人的外周血淋巴细胞培养

1、人的外周血淋巴细胞培养人的外周血淋巴细胞培养摘G要：、正常情况下哺乳动物的外周血中没有 于裂相期这是在于外条血下的小淋巴中胞大淋处 裂潺实验转制人和正血人染细体的组型方法；关键词：外周血淋巴细胞 低渗处理 空气干燥 法染色体组型分析前常三简便。胞凝(巴细 胞，进用方人体此周血取胞培养是制备染色体标本集96从 而能0分e离离和出Mo勰的验证，使红细 如分离dRHA在是人和其他动用 经过换为淋巴母细 经.期通经以的低 通过干利扰(phytohaem唱的有纟軽于成从而财分开，此色秋呈力乡成了体外活谓空 水仙素低渗空 ，后有sfc的 步骤叫做染色体分散 也有人把这一步和随后的 不加法。任何干燥，使载空

2、气干室温就是然干燥， 要方法法巴细胞的培养已成为易染色体同最主个体的固定滴过空气干燥制片等步。 有后再载玻滴片的法 。学八華 片化察本子 I p rn_ 一 帝、观理 体。毒 耆下研遗 的WS、 良、条華 优 到病培送约 得如星、 并站体屛 效巴-瘫 、察用淋 一 彩在(而 需可行医鼎内做疋宀环诵切分为收小 质證签前可行医、辭仃因等可临厂染理细止的使一导一臬疋 在面原向一细续段常H疋贰 超从已万苴痕进晉细尺作t固需中程：转子纟f要标。纟 O耐手主自化33w 、。本变( 一 s-wtT*rA f、1P4 frr细个使巴一II对质 致WkW疋 分wmwA5V管、Ph、口。 ，/混 固绳少致冰速效

3、M 二 一 7J J- rub 一 亠二1.材料万法血淋巴细胞。、脅唁培养瓶、温材料KE曰玻片和盖烧杯、酒精灯移液枪1.3药品1,3,1 “RPM“ JJ640 ”培养基 溶解称取溶解解后T 粉pH值调至6.八作为2含126溶液的浓度为504 单位/mL。13.3、用 0.9溶液。1.3.4秋水仙素100 mL的双蒸水 pH值调至6.0。每1000 毫升溶液加NaHC0 31.0克，校正PH到7.1。理NaC水加入100mL蒸馏水中，配制理盐 ，其最终浓溶液禽微克加升5m匚的培鮒 、是淋巴细植物凝血素刺鵬，本实验采用的是 帀面上购买的 PHA粉末，一个针剂为0.2mL。称放入冰箱素C加入用2用

4、时激剂）将1瓶粉末溶在2mL的蒸馏水中。80 t万单位为例）：丿将1瓶青 含10尢单 ，则最终浓八:以4毫升 位，取0.1mL 则最终浓度为100单位青霉素抗菌素 霉素溶在8mL 生 位。取 度为1000单链霉素（ 生理盐水稀/mL o宀盐水中，型每毫0.1mL注入5mL的培养物 单位/mL。每则每翠养物中，注入丐,L释培养每.实7室中有现染液夜实验室中有现好HC试剂溶液实验室有已0好磷剂缓冲液2方法步骤瓶用移分装培养养液和其他各试剂分装入培养4mL1mLRPM“1640”培养基 小 牛 血 清0.2mL0.1mLPHA双抗（青霉素加链霉素） 用3%NaHCO?履液调PH到7.3,分装到 置于

5、冰养瓶中毛甲川20，名, I I* J ，ZJ I J|/|、|J 2 /IJIJ 二 37C恒温锅中温育10minrmZb刖I。用精消毒手指皮肤，h用采血针刺 用毛细管敢血0.3mL全血，吹入并瓶 几下，盖二2.3培养好置白3培胞;分2AM水仙全血吹入瓶温箱轻轻摇动72小时这个时间恰W浓入浓度为8 40mL，嚐1=17 JA I ）、I I I I I 1 /妊盖子，直立 ，温裂的培个周期的培养仙素前1mL,最终浓度为98卩g/ 恒温箱中处理4h。处理完毕，小心地从温箱取出培养z ij，装装蒸馏养管沉置-，用語管轻 n使红细胞破碎白细胞膨胀。min，离心5min10s,弃去上清液，收集白细胞

6、。2.7固定 加入固；固定 15 min小加入固定液2 mL，用吸管轻轻打散，室温下 继续固定15min （过夜2.9再离心以00r/min，离心5min10s除去上清液， 留下白细胞制片 亠用吸管吸取细胞悬液自* im 中用出的一取细胞悬液的载玻戶 微烤干。九5,用磷酸染色冲液（PH7.4）稀释过的Geimsa染20min,2.7固定B.3?mL、/后离酸心打打成吸胞上液配可以）。嘴轻轻吹散高处，滴在从冰柜 上酒精灯火滴上悬然稀释过多余染液。良好待镜后然色体清晰、分散度好的细胞进行核型分析3结果分析3.1实验结果该图为显微镜视野内所拍到的图色6谱 染4韋* *条疋条，数46子16群家眷 4男

7、4七个 有的G亍 体以二、依rt 每代叮XXCD色、染体上疋度 B 和对 别相_22也任2分一色进薮E丝冃 。、体2)為46核对知f4分析讨论实验利实验是分析凝血素（PHA）使停止分裂的细胞从而分于的经过培养Ufe体标本质量杂菌等 进行的1行观|37C的细胞细胞因口冃匕为:环境菌处理此温由EUfe出现在视野中卜理不当短间则标本中的分裂天特观体缩得太短，以致 得短处理致惑细胞失；分散不佳，-_ _/、.才、 / t完全这、或染长丢裂渗处 响到观察的没 的沉淀！口冃匕fUfU 是后养基离碱度没没而影值 醇、冰醋，体形态模糊甲细胞随液体流动而丢失。水仙素处理则无隣片冷其表 不彻此,核型4.2实验注意事项244小时寸接种行血血养愈如鲜愈能立最最培养在采置于 4C存放，避免保存时间过久，会影响细胞的活力d4.2.2在培养中也十分重效价人的为37 0.5 C .培养获得良好适裂相KH的H7.2 7.4.用成细要在碎，灣箱丢失注意低渗液在使o c 希白右田挙旦生【I么白炖的淤冷林 的应沿管壁慢，会使固慢慢定液纯度要高 固定汛如都会影果到少、相果和观察 吸BU不、要。429 机胞膜间有长m过夜集寸、4.2.11配药品时需要注意分析天平是否水平5内容改进1贝3,80含升中 O彳品r下目了每器约时寸所 141出 卸定g 呢预2匕120需鳶rr出5前*踣帅为卜IO相素扭nL 菌冷Im U冃 m取 用