高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠

1、高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠1 .原理酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。2 .试剂2.1甲醇:分析纯，经滤膜(HF 0.5)过滤；2.2无水乙醚：分析纯；2.3无水乙醇：分析纯；2.4 6N盐酸：取3638% 的盐酸500ml，定容至1000ml ;2.5 4%氯化钠溶液：称取40.0g氯化钠，定容至1000ml ;2.6 0.02M 乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵定容至1000ml，溶解后经滤膜(HA0.45)过滤；2.7苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸 0.1000g加2%碳酸氢钠溶液1ml,搅 拌溶解，加水定容

2、到100ml，苯甲酸浓度为1mg/ml ；2.8苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液10ml，放入100ml容量瓶中，定容至刻度，苯甲酸浓度为 0.1mg/ml 。3 .高效液相色谱条件3.1 Spectra-Physics 高效液相色谱仪；3.2 色谱柱：Spherisorb ODS1 4.6mm200mm ；3.3检测器：紫外检测器，波长 230nm，灵敏度0.2 AUFS ；3.4流动相：甲醇：0.02M 乙酸铵(5 : 95 );3.5 流速：1ml/min ；3.6进样量：10 l;3.7允许差：相对误差w 10%。4 .操作方法：4.1样品预处理：称取均匀的酱油样品5.0g放入12

3、5ml的分液漏斗中，加入6N盐酸 1ml酸化，用15、10ml无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入 125ml分液漏 斗中，用4%的氯化钠溶液约10ml分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入 80ml蒸发皿中，温水浴挥干，分别用10ml无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放 入100ml容量瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸 馏水定容至刻度，用0.45( HA )滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。4.2测定操作：开机预热30min并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测 器稳定后，用25 l微量进样器吸取供试液进样，绘图积分，得供试样品的 吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公

4、式算出样品 中苯甲酸的含量。4.3计算公式：A i C o1C i =nA om式中Ci 样品中苯甲酸的含量Ai 测定样品的吸收峰面积；Co 配制的标准苯甲酸溶液的浓度Ao 标准苯甲酸溶液的吸收峰面积n 测定样品的稀释倍数；m 测定样品的质量。5.实验数据:5.1实验操作过程的重现性测试：取均匀的金标生抽王样品，分装成五份，每份 5.0g，按上述的样品预 处理方法分别进行萃取操作（每次萃取操作尽可能完全一致），得五个待测 样品，分别进样检测，用外标峰法确定苯甲酸的含量。五次萃取操作数据比 较如下表：表1 实验操作重现性数据表样品编号12345苯甲酸标准（0.1mg/ml样品质量（g）5.005

5、.005.005.005.00)/吸收Ai129.2110.5111.098.3117.3峰面A2101.4112.191.1117.0490.7积(10 4)a115.3111.3101.198.3117.2样品中苯甲酸 含量（g/kg ）0.4700.4540.4120.4010.478/样品中苯甲酸 平均含量0.443/(g/kg)相对误差（）6.12.4-7.0-9.56.1/结论：从表中可知，连续五次同样的萃取操作所得的结果都较为接近，相对误 差在允许范围10%以内，完全符合标准要求，因此，从实验操作过程的重 现性来分析，用该操作方法测定苯甲酸的含量是稳定可行且符合标准要求 的。5.

6、2高效液相色谱仪进样的重复性（稳定性）测试：取0.1mg/ml苯甲酸标准使用液，用25 I微量进样器进高效液相色 谱仪,绘图积分,测出苯甲酸的吸收峰面积，以同样的操作手法连续进样6次, 将各次的吸收峰面积数据比较如下表：表2 .高效液相色谱仪稳定性测试数据表:进样编号123456吸收峰面积（104）452.0424.5452.4465.8450.6431.9平均吸收峰面积（10 4）446.2相对误差（）1.3-4.91.44.41.0-3.2结论：由上表数据可知，连续6次进样所得的实验结果都十分接近，相对误差在允许范围10%以内，因此，从仪器稳定性方面考虑，本实验所用的高效液相色谱仪作为测定

7、苯甲酸含量是符合标准要求的。5.3苯甲酸浓度一一吸收峰面积的线性关系实验:分别配希9 0.1mg/ml 、0.05mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml 的苯甲酸溶液，分别进高效液相色谱仪测定吸收峰的面积，得数据如下表：表3 苯甲酸浓度一一吸收峰面积关系表：苯甲酸的浓度(mg/ml)0.0010.010.050.1吸收峰119.862.8294.3537.7面积(104)220.069.0293.6541.0319.266.3286.0560.1吸收峰平均面积(10 4)19.766.1291.3546.3100 -C（mg/ml）? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 00.0

8、10.020.030.040.050.060.070.080.090.10苯甲酸浓度C吸收峰面积A关系曲线结论：由上面所作的“苯甲酸浓度一一吸收峰面积关系曲线”可以看出，在苯 甲酸浓度比较接近的范围内，样品的吸收峰面积与苯甲酸浓度成正比的线性 关系。5.4乙醚萃取苯甲酸的回收率测试：样品A （不加标准样）：取金标生抽王样品5.00g，按照上述的样品预处理方法得样品A （不加标准样）。样品B （加标准样）：取金标生抽王样品5.00g，加入O.OIOOg苯甲酸，溶解后按样品预处理方法得样品B（加标准样）做两组相同的样品A和样品B，分别测定回收率，数据如下表：表4 乙醚萃取苯甲酸的回收率数据表：样品

9、AiBiA2B2金标生抽样品质里（g）5.005.005.005.00加入苯甲酸的质量(g)/0.0100/0.0100吸收峰面积(104)1144.3605.8118.0614.32123.5609.0117.0575.13149.6609.4117.3579.1平均吸收峰面积(10 4)139.1608.1117.5589.5苯甲酸标准 吸收峰面积(10 4)490.7490.7回收率()95.696.25.5自来水空白萃取实验及最低检测量的测试：取5.00g自来水作为空白样品，按样品的预处理方法进行萃取操作，测定其色谱吸收峰面积；取5.00g苯甲酸溶液(1mg/1000ml)，按样品的预处理方法进行操作，测定其色谱吸收峰面积，所得的实验数据如下表：表5.自来水空白及最低检测量测试数据表