人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应

1、人胎盘绒毛提取物体外对T细胞应答的抑制效应 07-08-21 16:11:00 编辑：studa20 作者：肇静娴，曾耀英，江逊，季煜华，刘毅 【关键词】 胎盘绒毛；滋养层；免疫抑制；T淋巴细胞；色氨酸加氧酶 【Abstract】 AIM: To have a progressive knowledge of the inhibitory capacity of placental villi on T cell response and its changes in the 3 trimesters of pregnancy. METHODS: Tissue extracts were pr

2、epared from early (10 weeks), middle (20 weeks) and late (37 weeks) placental villi, and their impacts on T cell activation were evaluated by detecting CD69 and CD25 expressions, impacts on proliferation were analyzed by method of WST1, and impacts on Th1/Th2 cytokine repertoire were measured by cyt

3、ometric bead array (CBA). Content of indoleamine 2,3dioxygenase (IDO) in the tissue extracts was detected by Western blotting. RESULTS: All tissue extracts from the 3 trimesters showed inhibitory effects on activation, proliferation and cytokine secretion of human peripheral T cells stimulated by PH

4、A, and also on activation of mouse T cell activation stimulated by ConA (P0.01). In general, the 20 week extracts had the strongest immunosuppressive effects. The content of IDO was much more in 20 week extracts than in 37 week extracts, and there was only trace amount of IDO in 10 week extracts. CO

5、NCLUSION: Villous extracts from the 3 trimesters of pregnancy had different degrees of inhibitory effects on T cell response, and their inhibitions to different T cell behaviors were not consistent, indicating their different expression patterns (quality and quantity) of inhibitory factors. 【Keyword

6、s】 placental villus; trophoblast; immunosuppression; T lymphocytes; tryptophan oxygenase 【摘要】 目的： 了解胎盘绒毛对T细胞应答的抑制能力及其在妊娠周期不同阶段的变化. 方法： 制备孕10，20和37 wk的绒毛提取物，通过检测CD69和CD25分子的表达，评价其对T细胞活化的影响，WST1法分析其对T细胞增殖的影响，流式微球阵列（CBA）法分析其对Th1/Th2细胞因子谱的影响，并以Western印迹法分析提取物中吲哚胺2,3双加氧酶（IDO）的含量. 结果： 孕早、中、晚期的胎盘绒毛提取物均能显著抑

7、制植物血凝素(PHA)诱导的人T细胞活化，增殖，细胞因子分泌以及ConA诱导的小鼠T细胞活化（P0.01）. 但三个时期的提取物对上述不同T细胞行为的抑制强度不同，以20 wk提取物的抑制作用最强. 提取物中IDO蛋白的含量20 wk最高，37 wk次之，10 wk最低. 结论： 妊娠不同时期的绒毛滋养细胞均能够抑制T细胞应答，但抑制强度不一致，且对T细胞不同行为的抑制存在分离现象，提示妊娠不同时期的绒毛滋养细胞表达抑制因子的模式不同. 【关键词】 胎盘绒毛；滋养层；免疫抑制；T淋巴细胞；色氨酸加氧酶 0引言 在胎盘局部，受精卵来源的绒毛滋养细胞和绒毛外滋养细胞作为胎儿细胞的代表，处于母胎界面

8、的最前沿，因此已成为研究母胎耐受机制中胎儿因素的最重要靶点. 虽然已知绒毛滋养细胞表达HLAG, FasL, 吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3dioxygenase, IDO），以及分泌高浓度的雌、孕激素都可能参与了降低母体免疫系统对胎儿抗原的应答1-4，但以往研究多是对上述单个因素的作用进行分析，而对胎盘绒毛所具有的整体的免疫抑制能力，及其在妊娠不同阶段有何变化等问题的研究报道较少. 本研究拟从胎盘绒毛提取物的角度，对妊娠早、中、晚期胎盘绒毛的细胞免疫抑制能力进行评价，并希望通过此研究思路为发现新的免疫耐受相关机制奠定基础. 1材料和方法 1.1材料K2EDTA抗凝静脉血

9、取自8例健康志愿者，男性，年龄1835岁；SPF级Balb/cJ近交系小鼠，雄性，810 wk，购自南方医科大学实验动物中心；碘化丙锭（propidium Iodide, PI）、刀豆蛋白A（ConA）、植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）均购自美国Sigma公司；NycoPrepTM淋巴细胞分离液购自挪威Nycomed Pharma AS公司；WST1购自德国Boehringer Mannhein公司；人Th1/Th2细胞因子流式微球检测（cytometric bead array, CBA）试剂盒以及抗人和抗小鼠CD3FITC, CD69PE, CD25PE mAb均购自美国BD PharMingen公司；兔抗IDO 抗体购自美国CHEMICON 公司；小鼠抗actin 抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG, HRP标记的兔抗小鼠IgG均购自美国Sant