高效液相色谱法测定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有关物质的含量

1、高效液相色谱法测定曲尼司特滴眼液中曲尼司特及其有关物质的含量                        【摘要】【关键词】  曲尼司特 滴眼剂 色谱法 高效液相 有关物质   曲尼司特（tranilast，肉桂氨茴酸）为新的抗变态反应药物，可稳定肥大细胞和噬碱性细胞膜，阻止细胞裂解脱颗粒，从而抑制组胺、5羟色胺、白三烯和SR

2、SA等过敏介质释放，目前，临床上主要用于过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎的治疗与预防1。20世纪70年代首先由日本学者Koda等2研制成功；国内由中国药科大学研制成功，且仅有口服制剂的生产与销售，尚无其滴眼剂（治疗过敏性结膜炎），为此我们开发了曲尼司特滴眼液，为控制其质量，在参考文献3的基础上，建立了测定曲尼司特滴眼液含量及有关物质的高效液相色谱法。    1  材料和方法    1.1  材料    1.2  色谱条件    色谱柱：江苏汉邦

3、Lichrospher C18 (200mm×4.6mm，5m)；流动相：甲醇-0.02mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至4.2)(6040)，流速为1.0 ml·min-1,检测波长333nm，进样量为20l。    1.3  溶液的制备    1.4  分析测定    2  结    果    2.1  色谱行为    在试验确定

4、条件下，空白辅料和有关物质对曲尼司特峰无干扰，且主峰分离较好，结果表明本色谱条件检测曲尼司特滴眼液的有关物质是可行的（分离度大于1.5）。见图1。A.空白辅料；B.对照品；C.有关物质(:曲尼司特)    图1  曲尼司特色谱图    2.2  方法可靠性    在试验条件下，主药和辅料在酸、碱、热、光及氧化等破坏条件下，曲尼司特与有关破坏产物能有效分离，辅料和有关物质对其测定不产生干扰，从而证明该方法可靠。      

5、60;                          2.3  线性关系    以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，回归计算得回归方程： A=17306.5c +44189.4，r=0.9999（n=5），结果表明本品在25200mg·L-1浓度范围内与色谱峰面积线性良好。  &

6、#160; 2.4  检测限    在 0.002AU下时，以基线噪音3倍计算，本品的检测限为3ng（进样量20l）。    2.5  方法回收率及精密度测定    取处方量辅料，加水制成处方浓度的空白溶液。按80%、100%、120%比例分别加入曲尼司特，加流动相稀释制成每1ml含曲尼司特分别为80、100和120g的供试品溶液各3份，精密取20l进样，计算回收率、日内相对标准偏差和日间相对标准偏差，结果见表1。表1  曲尼司特回收率及精密度  

7、0; 2.6   辅料干扰试验    取辅料供试溶液20l，进样，记录色谱图，结果见图1。    2.7  含量测定    取含量供试溶液20l，进样，记录色谱图，3批样品含量测定结果见表2。表2  含量测定结果       3  讨    论    曲尼司特难溶于水，配制其对照溶液时先加入少量无水乙醇使之恰溶，然后加流动相定量，不干扰本品的含量测

8、定及有关物质的检测。本品在光照条件下有关物质稍有增加，故我们在配制样品时应避光或使用棕色容量瓶，以减少降解。建立的HPLC法可实现曲尼司特与辅料及有关物质的有效分离，两者之间的分离度大于1.5，色谱柱效高。在流动相选择试验过程中发现pH值对试验有较大影响，当用磷酸调节pH值至4.2时，其色谱行为最佳，取得了较好分离效果。    本品在25200mg·L-1浓度范围内与色谱峰面积线性良好，含量测定回收率高且重现良好，可克服辅料及有关物质的干扰，具有准确、可靠、灵敏度高等特点，对控制本品及相关制剂的质量具有重要的意义。 【参考文献】  1陈新谦，金有豫，汤光. 新编药物学M.15版. 北京：人民卫生出版社，2005： 416,562.2KODA A，NAGAI H，WATANABE S，et al. Inhibition of hypersensivity reaction by a new drug,N(3,4dimethoxycinamoly) anthranitic acid (N5)J. J Auerg