薄层色谱法测定_氨基醇类药物中间体的含量

1、 第 40卷第 1期 郑 州 大 学 学 报 (理 学 版 Vol 140No 11 2008年 3月 J. of Zhengzhou Univ. (Nat. Sci. Ed. Mar 12008 收稿日期 :2007206201作者简介 :李永红 (1970- , 女 , 副教授 , 博士 , 主要从事分析化学和生物转化研究 ,E 2mail :lyh224163. com.薄层色谱法测定 2氨基醇类药物中间体的含量李永红 1,2, 于梅艳 1, 王 瑞 1, 刘宏民 1(1. 郑州大学新药研究开发中心 郑州 450052; 2. 郑州大学化学系 450001摘要 :在硅胶 GF 254薄层

2、板上 , 以氯仿 -甲醇 (体积比 10 1 , , 时测定生物转化液中两种 250250g 范围内线性关系良 好 , 平均加样回收率分别为 98. 4%和 98. 0, 准确度及回收率令人满意 , 可用于反应进程的 跟踪监测 .关键词 :; ; 2; 生物转化液 中图分类号 :O 文章编号 :1671-6841(2008 01-0094-030 引言手性药物进入人体后 , 在体内手性环境的作用下产生手性识别 , 从而在不同立体异构体之间产生药效 学 、 药物动力学和毒理学之间的立体选择性 , 对人体产生不同的效果 . 由于优势光学异构体的使用可以降低 药物毒副作用 , 目前含手性结构的手性药

3、物的研究已成为新的药物研究热点 1. 2受体阻滞剂类药物中起作 用的主要是 S 2异构体 2, S 2异构体降低眼内压的能力比 R 2异构体强 25. 9%左右 3, 其有效作用时间也比外 消旋体和 R 2异构体要长得多 4, 如目前用于治疗青光眼的即是 S 2倍他洛尔 527.获得手性药物的途径有天然光活性化合物分离 、 天然手性原料经半合成改造 、 外消旋体的结晶拆分 、 外 消旋体的化学拆分 、 外消旋体的生物拆分 、 色谱分离法等 1. 酶具有拆分效率高 、 立体选择性强 、 反应条件温 和 、 符合环保要求等优点 , 它们在手性化合物制备中的应用逐渐受到研究人员的重视 . 酶法与化学

4、法的结合 将是手性化合物合成的新途径 .作者以化合物 为底物 , 通过微生物酶的作用生成两种化合物 , 达到了手性拆分的目的 . 建立简便快速的 测定转化产物的方法是研究酶的活性、 优化转化条件等工作的前提 . 高效液相色谱法 (HPLC 可用于这两种物 质的定量分析 , 但其测定成本高 , 不适用于测定大量样品 . TLC 法常用于反应中间体及天然产物的分离、 鉴定和 定性、 定量分析 8210, 为了简便快速地跟踪监测研究过程中的反应进程 , 作者建立了成本低廉的 TLC 方法 .1 实验部分1. 1 仪器及试剂岛津 CS 930薄层扫描色谱仪 ; 微量进样器 ; 中间体 和 标准品按图

5、1路线由作者合成 , 经 HPL C 测定其质量分数分别为 98%和 98. 5%; 薄层硅胶 GF 254(化学纯 ; 其他试剂均为分析纯 . 1. 2 薄层条件取硅胶 GF 254与 5g/L 羰甲基纤维素钠 (CMC 以 1 3比例混合 , 研匀 , 铺成 0. 3mm 薄层板 , 室温晾干 , 105 活化 30min 后置于干燥器中备用 .展开剂 :氯仿 -甲醇 (体积比 10 1 . 显色剂 :碘蒸气 , 显色几分钟即可 .扫描条件 :双波长反射法锯齿扫描 , S =275nm , R =310nm , 灵敏度中等 , 背景校正 O N , S X =3,狭缝 第 1期李永红等 :

6、薄层色谱法测定 2氨基醇类药物中间体的含量 1. 2mm ×1. 2mm. 图 1 药物中间体拆分原理示意图Fig. 1 Scheme of drug intermediates resolution1. 3 样品预处理方法微生物转化液用等体积的乙酸乙酯萃取 3次 , HCO 3溶液和饱和 NaCl 溶液 洗涤 3次 , 并用无水 Na 2SO 4干燥备用 .2 实验结果2. 1 2. 1. 1 显色剂的选择 以 50%(体积分数 硫酸为显色剂 , 喷显色剂后需高温加热 , 另外 , 硅胶中若加入 CMC 会使背景颜色深且不均匀 . 用碘蒸气作为显色剂不需加热 , 样品点边缘清晰且背

7、景无色 . 由于要对薄层板进行扫描 , 硅胶中需加入 CMC 以增加板的硬度 , 因此选择碘蒸气作为显色剂 .2. 1. 2 扫描波长的确定 通过光谱扫描确定扫描波长 (S 为 275nm , 参比波长 (R 为 310nm.2. 1. 3 展开剂的确定 因两种待测物质的极性相差很小 , 展开剂选择比较困难 . 用不同比例的乙酸乙酯 -石油醚 -乙醇 、 氯仿 -乙酸乙酯 -乙醇和氯仿 -甲醇等体系进行了试验 , 最后确定以氯仿 -甲醇 (体积比 10 1 为展开剂 , 用此展开剂 , 展开结果斑点集中 , 无拖尾 , 中间体 和中间体 的 R f 值分别为 0. 520和 0. 647, 分

8、离效果理想 , 薄层分离结果如图 2所示 . 图 2 对照品和样品的薄层色谱图Fig. 2 TL C diagram of control and samples 2. 2 标准曲线的制作精密称取中间体 和中间体 标准品各 0. 1g , 加乙酸乙酯溶解并定 容至 10mL , 配成两种中间体质量浓度为 100g/L 的混合标准样品 . 用微 量进样器吸取不同量的混合标样点于同一薄层板上 , 在选定的分析条件下进行展开 、 显色 、 扫描 , 以峰面积对样品质量进行回归得到标准曲线 . 中间 体 和中间体 的线性范围均为 50250g , 其标准曲线分别为 y =4633. 1x -4146.

9、 8(R 2=0. 9920 和 y =4421. 9x -28629(R 2=0. 9916 . 其中 , x 表示样品的质量 , y 表示峰面积 . 2. 3 精密度试验用微量进样器吸取混合标准溶液 5份点于同一硅胶板上 , 每份 2L , 依上述方法展开 、 显色 、 扫描 , 中间 体 和中间体 峰面积积分值的 R S D 分别为 0. 53%和 0. 73%.2. 4 稳定性试验用微量进样器吸取混合标准溶液 2L 点于硅胶板上 , 依上述方法展开 、 显色 , 每隔 0. 5h 扫描一次 . 结 果表明 , 两种中间体的面积积分值在 5h 内稳定性良好 . 因此薄层板显色后最好在 5

10、h 内扫描 , 如不能及时 扫描 , 可用保鲜膜包裹 , 以减缓褪色 . 2. 5 检测限试验在同一块薄层板上分别点 10,8,6,4,2,1,0. 5,0. 2,0. 1g/L 样品各 1L , 依上述方法展开 、 显色 、 扫描 . 结果表明 ,2种中间体的目测检测限 (肉眼能看到的最小浓度 分别为 2g 和 1g , 而仪器检测限 (仪器能检 测到的最小浓度 分别为 1g 和 0. 5g. 2. 6 加样回收率在转化液中加入不同量的混合标准溶液 , 依上述方法处理样品 , 点样 、 展开 、 显色 、 扫描 , 并计算回收率 , 结果见表 1. 中间体 的平均回收率为 98. 4%, R

11、 S D 为 1. 56%, 中间体 的平均回收率为 98. 0%, R S D 为 1. 48%.59 郑 州 大 学 学 报 (理 学 版 第 40卷表 1 加样回收试验结果T ab. 1 Results of recovery experiment序号加入量 /g中间体 中间体 测得量 /g 回收率 /%测得量 /g回收率 /%110. 9898. 00. 9999. 0221. 9698. 01. 9597. 5332. 9598. 32. 9096. 7444. 05101. 34. 100. 5554. 8997. 88597. 0665. 808597. 52. 7 样品含量测定

12、取适量转化样品 , , 结果见表 2(n =3 .3 讨论表 2 样品含量测定结果T ab. 2 Results of sample content determination样品号中间体 中间体 平均值 /(g L -1RS D /%平均值 /(g L -1RS D /%10. 731. 990. 643. 5220. 610. 210. 621. 1430. 960. 320. 791. 1941. 151. 040. 791. 35 提前 30min 将展开剂加入展缸内 , 并在缸壁贴滤纸 , 以使展开剂充分 饱和 , 减少边缘效应 , 获得较圆的斑 点 . 由于板厚度的影响 , 板与板

13、之间的 差别较大 , 但通过在每块板上点标样校正可克服这一缺点 . 样品测定结果与 H PL C 测定结果基本一致 .本文建立了一种由薄层色谱法测 定微生物转化液中药物中间体含量的 方法 , 该方法成本低廉 、 结果可靠 , 适用于批量样品的测定 .参考文献 :1 李雯 , 赵君颖 , 章亚冬 , 等 . 一水合 2L 2(2R , 3R 2(- 2二苯甲酰酒石酸的合成 J.郑州大学学报 :工学版 ,2006,27(2 :62264.2 G iuseppe D B , Antonio S. A chemoenzymatic route to both enantiomers of betaxo

14、lolJ.Synthesis ,1995(6 :6992702. 3 Sharif N A , Xu S X. Binding affinities of ocular hypotensive beta 2blockers levobetaxolol , levobunolol , and timolol at en 2dogenous guinea pig beta 2adrenoceptorsJ.J Ocul Pharm Therap , 2004,20(2 :93299.4 Sharif N A , Xu S X , Crider J Y , et al. Levobetaxolol (

15、betaxon and other beta 2adrenergic antagonists :preclinical phar 2macology , IOP 2lowering activity and sites of action in human eyesJ.J Ocul Pharm Therap , 2001,17(4 :3052317. 5 Osborne N N , Wood J P M , Chidlow G , et al. Effectiveness of levobetaxolol and timolol at blunting retinal ischaemia is

16、related to their calcium and sodium blocking activities :relevance to glaucomaJ.Brain Res Bull , 2004,62(6 :5252528. 6 Aoyama Y , Motoki M , Hashimoto M , et al. Effect of various anti 2glaucoma eyedrops on human corneal epithelial cellsJ.Nippon Ganka G akkai Zasshi , 2004,108(2 :75283.7 Melena J ,

17、Stanton D , Osborne N. Comparative effects of anti 2glaucoma drugs on voltage 2dependent calcium channelsJ.Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol , 2001,239:5222530.8 王勇 , 史会齐 , 李明静 , 等 . 山药及其同属植物参薯中多酚含量的测定 J.河南大学学报 :自然科学版 , 2005, 35(4 :41244.9 尹文清 , 张青松 , 陈柳生 , 等 . 海洋真菌 K26号代谢产物的研究 J.广西师范大学学报 :自然科学版 , 20

18、04,22(3 :54257. 10严伟 , 王一丁 , 冯定胜 . 闹羊花素 2 (Rhodojaponin 2在小白菜中残留的初步研究 J.四川师范大学学报 :自然科学 版 ,2003,26(5 :5262528.(下转第 124页 69 郑 州 大 学 学 报 (理 学 版 第 40卷 Dynamic Perform ance Analysisof the K aifeng Yellow River 2nd Main B ridgeZHAO Hong 2lei 1, GU Ding 2yu 2(1. Dep artment of Ci vil Engi neeri ng , Henan

19、Engi neeri n g nstit 451191, Chi na; 2. Henan N ew cent ury L oa d &B ri d ge Consult t d. , , Chi na Abstract :The main bridge of 2nd bridge of Daguang freeway is 72tower and 82span p rest cable 2stayed bridge. By adopting M IDAS/Civil finite element p t he finite element calculating model is s

20、et up , and t he dynamic perform 2 ance using sub repetitive p rocess is calculated. The result indicates t hat t he low step s vi 2 bration of t he bridge mainly takes t he form of whole vertical vibration of t he bridge deck system and horizontal vibration of t he bridge tower ; nat ural vibratio

21、n cycle is bigger , and vibration mod 2 el is crowded. Because t he widt h 2span ratio of t his bridge is heavier , whole vertical vibration deck system appears earlier ; t he ratio of t he 1st step reverse f requency and t he 1st step vertical st roke curved frequency is 4. 01. The result s show t

22、hat t his bridge has t he good air operated stability. K ey w ords :finite element met hod ; nat ural vibration frequency ; vibration model ; ext rado sed ca 2 ble 2stayed bridge(上接第 96页 Determination of 2amino Alcohol Drug Intermediates by T LCL I Y ong 2ho ng 1,2, YU Mei 2yan 1, WAN G Rui 1, L IU Hong 2min 1(1. N ew D ru g Research &Development Center , Zhen gz hou Universit y , Zhengz hou 4500