实验十、放线菌形态的观察

1、微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH放线菌形态的观察放线菌形态的观察微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH实验的目的要求v 学习并掌握观察放线菌形态的基本学习并掌握观察放线菌形态的基本方法方法v 初步了解放线菌的形态特征初步了解放线菌的形态特征微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH基本原理v放线菌：放线菌：基内菌丝基内菌丝气生菌丝气生菌丝孢子丝孢子丝 能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌兰氏阳性细菌，是由不同长短的纤细的菌

2、丝所，是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。形成的单细胞菌丝体。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH基内菌丝和气生菌丝形态比较 基内菌丝基内菌丝 气生菌丝气生菌丝位置位置颜色颜色直径直径在培养基内和表面在培养基内和表面位于下层位于下层 浅浅 细细 在培养基上方在培养基上方位于上层位于上层深深粗粗微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH扦片法原理v将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片将放线菌接种在琼脂平板上，扦上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与

3、盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。而且便于观察不同生长期的形态。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH玻璃纸法原理v 玻璃纸是一种透明的半透膜，具有半透膜特性，其透玻璃纸是一种透明的半透膜，具有半透膜特性，其透光性与载玻片的基本相同，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼光性与载玻片的基本相同，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面

4、，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载波片上直接镜检。这种方法既能保持放纸，固定在载波片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。特征。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH印片法原理v将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载波将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载波片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察片上，经染色

5、后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。方法孢子丝的形态，孢子的排列及其形状等。方法简便，但形态特征可能有所改变。简便，但形态特征可能有所改变。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH实验材料v菌种：菌种：未知放线菌未知放线菌v培养基：培养基：高氏高氏I号琼脂号琼脂v试剂试剂石炭酸复红染液石炭酸复红染液v仪器和用具仪器和用具载玻片载玻片盖玻片盖玻片滤纸滤纸平皿平皿玻璃纸玻璃纸玻璃涂棒玻璃涂棒 显微镜显微镜 镜头纸镜头纸 接种环接种环 接种铲接种铲 镊子镊子微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研

6、室YJH方法v扦片法扦片法v玻璃纸法玻璃纸法v印片印片法法微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH扦片法取融化并冷却至大约取融化并冷却至大约5050 C C的高氏的高氏I I号琼脂约号琼脂约20mL20mL倒平板，凝固备用。倒平板，凝固备用。v倒平板倒平板v接种接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在高氏高氏I I号琼脂号琼脂平板上划线接种平板上划线接种。v扦片扦片无菌操作用镊子将灭菌盖玻片以大约无菌操作用镊子将灭菌盖玻片以大约4545 角在接种线上扦入琼脂内角在接种线上扦入琼脂内。v培养培养将扦片平板倒置，将扦片平

7、板倒置，2828 C C 培养培养3-53-5天天。v镜检镜检 用镊子小心拔出扦片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上放在载玻片上，用镊子小心拔出扦片，擦去背面培养物，将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接显微镜观察直接显微镜观察。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH玻璃纸法v倒平板倒平板取融化并冷却至大约取融化并冷却至大约5050 C C的高氏的高氏I I号琼脂约号琼脂约20mL20mL倒平板，凝固备用。倒平板，凝固备用。v铺玻璃纸铺玻璃纸 无菌操作用镊子将灭菌的玻璃纸铺在无菌操作用镊子将灭菌的玻璃纸铺在高氏高氏I I号琼脂表面，用无菌玻璃涂布棒号琼脂

8、表面，用无菌玻璃涂布棒将玻璃纸压平。将玻璃纸压平。v接种接种用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在玻璃纸玻璃纸上划线接种上划线接种。v培养培养将平板倒置，将平板倒置，2828 C C培养培养3-53-5天天。v镜检镜检 在洁净载玻片上滴一滴水，用镊子小心取出玻璃纸，菌面朝上平贴在载玻在洁净载玻片上滴一滴水，用镊子小心取出玻璃纸，菌面朝上平贴在载玻片上，显微镜观察片上，显微镜观察。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH印片法v印片印片取融化并冷却至大约取融化并冷却至大约5050 C C的高氏的高氏I I号琼脂约号琼脂约

9、2020mLmL倒平板，凝固备用。倒平板，凝固备用。v接种接种v培养培养v倒平板倒平板用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在高氏高氏I I号琼脂号琼脂平板上划线接种平板上划线接种。将扦片平板倒置，将扦片平板倒置，2828 C C培养培养4-74-7天天。v染色染色 用接种铲或解剖刀将菌台连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片用接种铲或解剖刀将菌台连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上，取另一块载玻片在酒精灯上略微加热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使上，取另一块载玻片在酒精灯上略微加热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物黏附在微热的载波片上，印迹朝上，通过酒

10、精灯火焰培养物黏附在微热的载波片上，印迹朝上，通过酒精灯火焰2-32-3次固定。次固定。用石炭酸复红覆盖印迹，染色约用石炭酸复红覆盖印迹，染色约1 1分钟后水洗分钟后水洗。v镜检镜检油镜观察油镜观察。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH基内菌丝v又称为基质菌丝、营养菌丝或一级菌丝；又称为基质菌丝、营养菌丝或一级菌丝；v是孢子发芽后不断伸长、分枝并放射状在培养是孢子发芽后不断伸长、分枝并放射状在培养基内部和表面形成的大量色浅、较细的具有吸基内部和表面形成的大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的丝状结构。收营养和排泄代谢废物功能的丝状结构。v空间位置位于下层。空间位置位于下层。微生物学实验微生物学实验生命科学学院微生物学教研室生命科学学院微生物学教研室YJH气生菌丝v又称为二级菌丝；又称为二级菌丝；v是由基内菌丝向上向空间方向分化形成的颜色是由基内菌丝向上向空间方向分化形成的颜色较深、直径较粗的分枝菌丝。较深、直径较粗的分枝菌丝。v空间位置位于上层。空间位置位于上层。微生物学