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文档简介
1、 动物细胞融合过程示意图动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞灭活病毒诱导细胞融合的原理:n病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。n灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏这些病原体的失去感染能力,但并不破坏这些病原体的抗原结构。抗原结构。思考题
2、思考题1.1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁?植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁? 酶解法,如纤维素酶和果胶酶酶解法,如纤维素酶和果胶酶2.2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?动物细胞融合时需要进行去壁处理吗?为什么?无需,因为动物细胞无细胞壁无需,因为动物细胞无细胞壁3.3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些?离心、电激等物理方法;离心、电激等物理方法;PEGPEG等化学方法等化学方法4.4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?动物细胞融合能利用上述两类方法吗?还有其他方法吗?能能 还可以
3、利用灭活的病毒进行诱导还可以利用灭活的病毒进行诱导5.5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形 成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?成完整的杂种个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?不能不能提问?1.1.抗体是由何种细胞产生的?抗体是由何种细胞产生的? 效应效应B B细胞(浆细胞)细胞(浆细胞)2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞( (浆细胞浆细胞) )能分泌多种抗体吗?能分泌多种抗体吗? 每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体3. 3. 引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗?引
4、起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗? 动物在免疫反应过程中,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上动物在免疫反应过程中,体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上4. 4. 简述获得抗体的传统途径?简述获得抗体的传统途径? 抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯二、单克隆抗体二、单克隆抗体刺激刺激浆细胞浆细胞6.6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体?如何获得化学性质单一、特异性强的抗体? 体外培养单个效应淋巴细胞,提取分泌的抗体体外培养单个效应淋巴细胞,提取分泌的抗体7.7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? ?怎样解决这个问题?怎样解
5、决这个问题?5.5.这种方法获得的抗体有什么缺陷?这种方法获得的抗体有什么缺陷? 产量低,纯度低,特异性差产量低,纯度低,特异性差与骨髓瘤细胞融合与骨髓瘤细胞融合单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备抗原抗原小鼠小鼠效应效应B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合,细胞融合,筛选筛选细胞培养细胞培养筛选筛选体外培养体外培养体内培养体内培养单克隆抗体单克隆抗体特定的杂交瘤特定的杂交瘤拓展:聚乙二醇处拓展:聚乙二醇处理后,培养液中存理后,培养液中存在哪几种细胞?在哪几种细胞?B-B B-瘤瘤 瘤瘤-瘤瘤 未融合的未融合的B细胞细胞 未融合的瘤细胞未融合的瘤细胞补救练习1.1.动物细胞融
6、合技术最重要的用途是动物细胞融合技术最重要的用途是 ( )A.A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体C.C.培育新物种培育新物种 D.D.生产杂种细胞生产杂种细胞B2.2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 ( )A.BA.B淋巴细胞淋巴细胞 B.TB.T淋巴细胞淋巴细胞 C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D.D.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 D3.3.(多选)(多选)19751975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是(
7、 )A.A.效应效应B B细胞细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞C.C.骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C DB B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 4.4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌的实验方案伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体制备单克隆抗体不能,没有将抗原注入小鼠体内,无法获得产不能,没有将抗原注入小鼠体内,无法获得产生单一抗体的生单一抗体的B B淋巴细胞。淋巴细胞。(1).(1).该实验方案的目的是
8、:该实验方案的目的是:_(2).(2).该方案能达到预期效果吗?为什么?该方案能达到预期效果吗?为什么?(3).A(3).A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_ _ 该细胞能该细胞能够产生够产生_ _ 。(4).(4).图中图中B B为为_过程,常用过程,常用_作为诱导剂,该细胞继承作为诱导剂,该细胞继承_的遗传特性,既能的遗传特性,既能_,_,又能又能_。(5).C(5).C过程指细胞培养,该过程包括过程指细胞培养,该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段,其中培养两个阶段,其中_代以内的的细胞属于代以内的的细胞属于细胞株。细胞株。B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活的病毒
9、灭活的病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50501. 1. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖的细胞是在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 ( )淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C2.2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于动物细胞融合和植物原生质融合决定于 ( )( )A.A.细胞膜的流动性细胞膜的流动性 B B细胞膜的选择透过性细胞膜的选择透过性C.C.细胞质的流动性细胞质的流动性D D细胞质酶的活性细胞质酶的活性 A3.“3.“生物导弹生物导弹”是指是指 ( )A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂
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