甜草化学成分研究

1、甜草化学成分研究甜草化学成分研究答辩人：刘文基指导教师：李厚金 副教授中山大学有机所内容提要 一、前言 二、研究目的 三、实验内容 四、实验结果 五、结论 致谢一、前 言 甜草是我国南方的一种民间草药，是茜草科植物，在江西草药中国草药大全有其药用记载，“性平，味甘，有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效”。其叶子榨汁，可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤，疗效显著。二、研究目的 目前尚未见到关于甜草Oldenlandia cantonensis How 的研究报告。甜草化学成分的研究可发现新的具有药用价值的化合物。三、实验内容（一）甜草的采集与提取 原料甜草，2004年7月份采集于江西省地

2、区的向阳山坡，取地上全草，收集后晒干剪碎，用95%乙醇多次浸泡，合并浸泡液，用旋转蒸发仪浓缩至干，浓缩物再用甲醇溶解，溶解液拌硅胶。硅胶拌样后吹干进行下一步分离操作。 三、实验内容 （二） 分离提纯 实验用柱层析，薄层层析，以及重结晶的方法分离提纯甜草中的化学成分。用GCMS，紫外光谱法，红外光谱法，质谱法，核磁共振等方法分析确定甜草化学成分。将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态，进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱，然后依次用PE:EA=10:1， 5:1， 3:1， 2:1， 1:1， 1:2， 1:3溶液梯度冲洗柱子。对初次柱层析得到的溶液进行再次的柱层析分离操作。用重结晶方法对化合物进一步

3、提纯，分离得到的低极性成分用GCMS分析，中等极性成分中得到四个化合物成分（A，B，C，D）。 四、实验结果 低极性成分分析,液体油状物用氯仿溶解，进行GC-MS分析。表1 甜草Oldenlandia cantonensis How的低极性成分及相对含量序号化合物含量(%)序号化合物含量(%)13,3,6-三甲基-2,5-庚二酮0.10313,7-二甲基-7-羟基-二甲缩醛0.7326,10,14-三甲基-2-十五烷酮1.25321-二十八烷醇0.9239-十八烯酸-1-甲基酯0.21332-二十七烷酮0.904Z-8-十六烯0.7534二十六烷酸甲基酯0.8051-十六酸乙基酯1.6435十

4、四烷酸十四烷基酯0.9961,1-二甲氧基十二烷0.1736十一烷二甲缩醛0.8178,11-十八二烯酸甲基酯1.4337二十六烷0.6789(Z)-十八烯酸甲基酯2.14382-甲基丙基酸-十二烷基酯0.909十八烷酸甲基酯0.783928-Nor-17-(H)-hopane0.54101-十七碳烯0.13401-烯-3-酮-10-二甲氧基甲基-17-乙酰氧基-雄甾烷0.48119,12-十八二烯酸乙基酯0.44413,5,22-三烯-豆甾烷0.5712油酸乙基酯0.51422-二十九烷酮1.2613十八烷酸乙基酯0.4243二十七酸甲基酯0.72145(Z)-十九碳烯0.2244Vitam

5、in E1.08153,7,11,15-四甲基-2-烯-1-十六醇0.3545十四酸十六烷基酯2.1616二十烷酸甲基酯0.4946十一烷基二甲缩醛0.9317正二十三烷0.774711-甲基-二十九烷0.79182,4-二-(1-甲基-1-苯基)乙基-苯酚0.7448桉叶油醇0.7619二十二烷酸甲基酯1.1549丁基酸环己醇酯1.5120二-n-辛基-邻苯二甲酸酯 1.04501,1-二甲氧基-9-(Z)-十八烷烯1.51212-十二烷基菲0.4751软木三萜酮0.6622二十三烷酸甲基酯1.16523,5-二烯-3,17-二（三甲基硅氧基）-雄甾烷1.6323二十五碳烷1.2553十六烷

6、基环氧丙烷0.89241-二十六碳烯1.32547-酮基-3-乙酰氧基-胆甾烷1.3425二十四烷酸甲基酯1.32551-氨基-4-甲基-哌嗪1.21263-甲酰氧基-11-羟基-17-酮基-雄甾烷0.40565,9(11)-二烯-3-乙酰氧基-胆甾烷1.392711,13-二甲基-12-十四烯-1-醇-乙酸酯0.845722,23-二氢豆甾醇1.73281,1-二甲基-十四烷基-叔硫醇1.13583-酮基香树脂0.95291-(2-十二烷烯)-丁二酸酐0.39595-雄甾烷烯-3,17-二乙酰氧基1.7430二十二烷酸甲基酯0.71609-十八烯酸-二十烷醇酯2.07 中等极性成分分析 共分

7、离得到4个纯化合物，分别为十二碳脂肪酸，谷甾醇，2个三萜化合物，其中1个三萜是新的化合物。2个三萜化合物活性显著, 对人肝癌细胞株Bel-7402的IC50 值分别为6.5g/ml，7.0g/ml ，对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值分别为8.0g/ml，7.0g/ml。 化合物A为浅白色奶油状固体，微加热即融化，1H-NMR（CDCl3,TMS, ppm)： 7.223，3.634，2.340，2.316，2.291，2.272，2.246，1.277，1.232，1.144，1.123，0.877，0.855，0.832，0.810。 A红外光谱，IR/cm1（KBr）：3448，

8、2920，2851，2366，2342，1740，1652，1545，1463，1438，1378，1172。 鉴定A为十二碳脂肪酸。化合物A的H-NMR图 化合物B，白色粉末固体，1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：5.226，5.215，2.793，2.057，2.049，1.293，1.171，1.128，0.988，0.969，0.952，0.943，0.918，0.898，0.884，0.865，0.839，0.810，0.783。 IR/cm1（KBr）：3421，2927，1690，1651，1574，1456，1407，1273，1185。通过数据比较确定其为谷甾

9、醇。化合物B的H-NMR图HO谷甾醇 化合物C，白色固体，可结晶成透明针状晶体。 1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：7.981，5.222，5.208，5.197，2.794，2.250，2.213，2.045，1.957，1.943，1.933，1.922，1.902，1.891，1.168，1.125，0.982，0.964，0.949，0.937，0.914，0.894，0.870，0.835，0.777。 IR/cm1（KBr）：3428，2927，2856，2337，1736，1689，1632，1574，1458，1404，1385，1274，1254，1170，1

10、107，1042，997。 此化合物比较复杂，为三萜类化合物，结构确定工作尚在进行中。化合物C的1H-NMR图四、实验结果表表2 2 化合物化合物D的的NMR数据数据(DMSO-d6, TMS, 500MHz) 位置编号位置编号DEPT13C NMR1H NMR1CH238.21.542CH223.71.50, 1.913CH76.83.004C38.35CH54.70.666CH226.91.467CH232.61.578C46.79CH46.91.4510C41.611CH222.71.8612CH124.55.1313C138.114C41.515CH227.51.8016CH217.9

11、1.46, 1.3017CH232.61.25,1.43 分子式为 C29H48O3, FABMS：m/z 445M+1+，相对分子量为444。元素分析结果：C, 78.33; H, 10.90; N, 0.000。IR（KBr）：3420, 2970, 2928, 2871, 1693, 1575, 1455, 1407, 1313, 1279, 1249, 1142, 1091, 1032, 996, 758, 661, 568。 18CH52.32.1119CH315.90.6820CH328.10.9021CH315.10.8722CH316.90.7623CH323.21.0424C

12、H38.30.9425C178.126CH230.01.4227CH38.40.9528CH316.80.8229CH320.90.923-OH 4.1525-COOH 11.8化合物D的13C-NMR图化合物D的1H-NMR图化合物D 的结构：HOH3CCH3CH3CH3CH3HOOC1234567891011121314151617181920212223242526272829新化合物新化合物对化合物D衍生物制备将D与苯甲酸反应COHO+HOH3CCH3CH3CH3CH3HOOCOOHOOC对化合物C，D进行药理测试得到以下结果。表表3 3 对拓扑异构酶对拓扑异构酶（hTOP I ）的的

13、IC50测定结果测定结果 产物编号产物编号结构结构产物来源产物来源IC50（gg/mL）C三萜类三萜类甜草甜草18D三萜三萜甜草甜草15表表4 对对肝癌细胞株肝癌细胞株Bel-7402的的IC50 值值测定结果测定结果 产物编号产物编号结构结构产物来源产物来源IC50（gg/mL）C三萜类三萜类甜草甜草6.5D三萜三萜甜草甜草7.0表表5 对对人胃腺癌细胞株人胃腺癌细胞株Mcg-803的的IC50值值测定结果测定结果产物编号产物编号结构结构产物来源产物来源IC50（gg/mL）C三萜类三萜类甜草甜草8.0D三萜三萜甜草甜草7.0五、结论 实验成功分离到预期的化合物，并对化合物的种类及结构进行了鉴定。 对分离所得到的2个三萜类化合物进行了结构鉴定， 确定其中1个化合物结构式，为新化合物，另外1个还在测