不合格样本对止凝血指标的影响分析

1、不合格样本对止凝血指标的影响分析【摘要】目的了解不合格样本(样本采集量、储存条件和时间、溶血及输液)对止凝血检测指标的影响。方法 运用STA-R全自动凝血功能仪检测各 组样本的血浆凝血酶原(PT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝 血活酶时间(APTT)o结果对于正确采集全血量为 ml的凝血功能管来说，采集 量少于ml,其检测结果显示4项凝血指标均有显着性降低,多于ml,会导致FIB 明显增高。血液离体后，不管是离心后室温、4c冰箱还是混匀后室温保存，放置 6 h或8 h,PT测得值与即刻测定相比均明显缩短，放置24 h时又明显增加。APTT 检测结果显示4 h后的测得值均

2、明显延长。TT的分析结果提示，血液离体后即刻 分离血浆，无论是室温还是4c冰箱存放，对TT的测定值均没有明显影响，但以全 血混匀状态存在，从4 h起就明显增加。FIB对样本的存放条件和时间没有特别 的要求。溶血会对很多临床检测指标的检测结果造成影响，对止凝血指标而言，轻、中度溶血对检测结果没有明显的干扰，严重溶血状态下会使得TT的测定值明 显延长。另外，因为临床输液或动/静脉置管不正确采集止凝血样本，分别会造 成(9/141)、(23/141)的分析误差。结论 由于采集量、存储、溶血及输液等原 因造成的不合格样本对止凝血指标均有明显的影响，医护人员应该尽可能按照标准操作规程进行样本的采集、运送

3、、保存等，以免造成检验结果的假性结论，误导 临床医生作出错误的判断。【关键词】样本采集；凝血酶原时间(PT)；活化部分凝血活酶时间(APTT);溶血；输液止凝血检查是临床上常用的血栓与止血筛查实验，对患者的术前准备、 出血性疾病或血栓形成性疾病的初步判断，以及用药疗效的评估与监测有直接指 导作用。合格的样本是保证止凝血检测指标准确性的前提，但在实际工作中，我们 经常会遇到一些不合格的样本，有的在样本接收时就可发现，如样本量不足、有凝 块，有的在离心后才可发现，如样本溶血；有的甚至要在检测后才可发现，如样本 放置时间、动/静脉置管采血。那么这些不合格因素对止凝血检测指标的影响程 度如何？相差多少

4、会造成临床不可接受的实验室结果 ？本研究将从常规的凝血4 项项目进行分析。1材料和方法材料样本来源 按实验要求采集门诊患者各组凝血功能样本，要求无明显脂血和黄疸，样本经过3000 r/min 离心15 min,备用。仪器STA-R全自动凝血功能仪（法国Diagnostica Stago 公司）， KDC-40ffi速离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）。试剂 血浆凝血酶原（PT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）、活化 部分凝血活酶时间（APTT）检测试剂均为仪器配套试剂。检测指标 PT、FIB、TT APTT方法凝血4项的测定 按照标准操作规程，根据磁珠法原理在STA-R全自动

5、凝血功能仪上进行各组PT APTT FIB（凝血酶法）、TT的测定。均测定2次，取 均值。血红蛋白（Hb）浓度的测定参照文献并结合本实验室设备进行如下操 作：取溶血样本30川，加去离子水ml,混匀，在721分光光度计上以去离子水调 0点，于380 nm、415 nm、450 nm波长处读取光密度值（D值），经公式 Hb（g/L）=D415 X （D380+D450） XX10 换算出相应的 Hb浓度。统计学处理 结果以± s表示，使用SPSS 11.5统计分析软件进行配对 t检验,P<为差异有显着性。2结果样本采集量对凝血指标的影响样本采集量或多或少是临床上最常见 的不合格样本

6、现象，为了了解样本量多多少或少多少会造成临床结果的统计学差 异，本研究挑选20例门诊患者，抽取10 ml全血，分别取样、ml加于含有 ml（109 mmol/L枸檬酸钠）的凝血功能管内，颠倒混匀10次,离心后按标准操作程 序即刻测定，数据见表1。结果表明，样本采集量少于ml,其检测结果显示4项凝 血指标均有显着性降低；多于ml,会导致FIB明显增高。表1样本采集量对止凝 血指标的影响放置时间对凝血指标的影响 挑选20例门诊患者，按照标准操作程序 采集3管凝血功能栓测样本，颠倒混匀10次，分3组,离心后即刻测定；然后一组 于室温，一组于4c冰箱，另一组每次测定后混匀室温，分别放置2、4、6、8、

7、24 h 进行测定，数据见表2。结果表明，不管是离心后室温、4c冰箱还是混匀后室温 保存，放置6 h或8 h,PT测得值与即刻测定相比均明显缩短，放置24 h时又明显 增加。APTT 4 h后的测得值均明显延长。血液离体后即刻分离血浆，无论室温还是4c冰箱存放，对TT的测定值均没有明显影响；但以全血混匀状态存在，从4 h 起就明显增加。FIB对样本的存放条件和时间没有特别的要求。表2样本放置时问和条件对止凝血指标测定的影响与即刻测定值比较：*P<样本溶血对凝血指标的干扰 溶血是临床样本采集过程中不可避免的现象,为了了解溶血对止凝血指标的干扰，本研究挑选20例门诊样本，按标准操 作程序采集

8、、离心并即刻测定,然后轻轻吸取上清血浆并等分于 3个EP管内，红 细胞部分置-20C冰冻30 min,取出溶化,3000 r/min 离心10 min,分别加上层溶 血液20、40、60屋 于3个EP管内，制备成不同程度的溶血样本，用紫外三波长 法测其Hb浓度，然后用微量法在STA-R凝血功能仪上进行分析，数据见表3。结 果表明，轻、中度溶血对检测结果没有明显的干扰，严重溶血状态下会使得TT的 测定值明显延长。表3不同程度溶血对止凝血指标的影响与正常血浆比较：*P<输液或动/静脉置管采血对凝血指标的影响本研究分析了 20XX年5月一20XX年2月间不合格样本记录，在止凝血结果异常（主要是

9、PT、APTT TT）、 再次抽血检查结果正常中发现因输液原因导致的占 （9/141）,因动/静脉置管原 因导致的占（23/141）。3讨论分析前质量控制是全面质量控制中至关重要的前提，所包含的信息很庞 杂，如患者准备（饮食、运动）、患者信息的处理（申请单的核对、录入）、样本采 集等。对实验室来讲，临床采集的样本是否合格是实验室全面质量控制的前提保 证，止凝血功能检查对样本的要求尤为严格，如样本采集量、样本存放时间和条件、 是否溶血等。样本采集时除了要求采血顺利，做到“一针见血”外，按试管所需采血 量准确采集并混匀至关重要。本研究结果显示 ：对于采血量要求为ml的采血管 来讲，采血量少于ml时

10、,PT、APTT FIB、TT的检测结果均明显降低；即使加入ml 的血量对检测结果没有显着性影响，但对于处于临界值的检测结果或用于患者病 情的动态观察来说，还是值得注意的；采血量多于ml,会使得FIB的检测结果明 显增高，对于抗凝治疗或血栓前状态的评估，会造成假阳性判断。另外，对于患者 有多个检验项目需同时采样时，凝血试验样本应采取第一管。全血样本采集完成后，应尽快在室温下运送到实验室，并尽快离心，原则 上应立即检测。但在实际工作中，由于样本是护士或临床医生集中采血、集中运 送，样本在到达实验室前以全血混合状态停留不等时间。丛玉隆等认为：血液离体即开始变化，随存放方式和时间不同，凝血因子逐渐消

11、耗或激活，特别是V、皿、 DC因子消耗和叩 因子的激活较为明显。本实验结果表明,FIB对样本的存放条件 和时间没有特别的要求，但对PT样本来讲，不管是离心后室温、4c冰箱还是混匀 后室温，放置6 h或8 h,PT测得值都比即刻测得值明显缩短，这可能与血液离体 后即因子的激活有关；随着储存时间的延长，放置24 h时其测得值比即刻测得值 又有明显的增加，这与叩因子的生物半衰期有关，随时间延长即因子逐渐消耗。针 对APTT而言，血液离体4 h后的测得值比即刻测定值都有明显的延长，这与即因子和IX因子及其他凝血因子消耗密切相关。血液离体后即刻分离血浆，无论室温还是4c冰箱，对TT的测定值没有明显影响，

12、但以全血混匀状态保存时，从4 h起 就明显增加，这可能与血液混合状态的红细胞内循环抗凝物质或血小板活性物质 的的释放有关，具体原因尚不清楚。样本溶血是由于抽血过程不当或不顺利等因素而造成红细胞的破坏。Hb的红色是干扰的主要因素，但对不同仪器使用不同检测原理，其干扰程度不 同,STA-R采用的是磁珠法原理，对溶血具有一定的抗干扰能力。本研究结果表明,只有在严重溶血状态下，TT测得值有明显增高外，其他凝血3项的分析结果与正 常血浆状态差异无显着性。TT的延长也可能与严重溶血状态下红细胞破坏过多、 释放的循环抗凝物质增加有关。输液是临床必需的治疗措施，在不能停止输液的前提下仍然需要采集临 床样本进行

13、分析时，必须注意避免输液导致的血液稀释，切不可从输液管内采血。 正确的做法是尽可能远离输液处采集样本。对于危重患者，临床输液量大，样本采集次数多，往往带有槎动脉测压管或中心静脉置管，这类患者可以从置管中采血， 但必须做到槎动脉弃血5 ml，输液中的中心静脉弃血5 ml后才可以采集止凝血 样本，否则对某些临床检验结果(如本研究中的止凝血指标)会造成明显的干扰。全面的质量控制需要临床医护人员的密切参与。在实际工作中，不合格 样本是不可避免的现象，医护人员应该尽可能地按照标准操作规程进行样本的采 集、运送、保存等。对实验室检验人员来说，应该了解不合格样本对检测结果的 影响程度，便于对检测结果做一个客观的评价，以免造成临床上的假性结论。【参考文献】王莉，张淑琴，赵君，等.紫外分光光度法检测血浆游离血红蛋白 J.中国输血杂志,20XX, 19(6): 477-479.肖秀林，陈红宇，王昌富，等.PT和APTT样本采集顺序和保存温度 的探讨J.上海医学检验杂志，20