快速石蜡包埋组织切片的制备

1、快速石蜡包埋组织切片的制备煮沸固定切片法1.固定：切取大小适宜（厚度<2mm的组织块，尽快置入装有58ml 10刈 性4%甲醛的试管中煮沸1min,然后已入冷水中。2脱水（1）将已经煮沸固定的组织块取出，用刀片将其厚度修切至<1.5mni随即置入盛有 58 ml 丙酮的试管中，煮沸 2 min ，然后将丙酮倾弃。（2）再向该试管中重新加入58 ml丙酮并煮沸2min。如此重复34次。3浸蜡：将已经丙酮脱水的组织块由试管中取出，用吸水纸去除其表面液体， 随即置入7580熔化的石蜡中，待组织块下沉、 不再出现气泡时 （约需30s） ，即可包埋。4包埋、切片和染色。（ 1）用热镊子将预制

2、的蜡块表面熔化，埋入已经浸蜡的组织块。（ 2）待埋入组织块的蜡块表面凝固后，即用载玻片轻压蜡块表面片刻，使蜡块表面平整。（ 3）将蜡块置入冰水中，使其变硬。（ 4）迅速切片，裱片后用吸水纸去除载玻片上的水分。（ 5）将载玻片用火焰烘干（勿距火焰太近）。（6）迅速进行HE染色。5注意事项（ 1） 为了尽量缩短制片时间， 必须预先作好有关准备工作， 备齐取材用具、试管、固定液、丙酮、酒精灯、火柴（或其他引火器） 、包埋用蜡块、载玻片和染色试剂等，放在固定部位待用。（ 2）全部制片过程一般在2025min 内完成。（ 3）制片后剩余组织块应作常规石蜡包埋切片染色，进一步诊断。（ 4）含脂肪较多的组织

3、，须经多次丙酮处理。（ 5） 用于组织固定、 脱水、 透明的试剂和浸蜡用的石蜡应及时过滤、 更换。（ 6）丙酮、乙醇、二甲苯等为易燃物，进行上述各项流程时，2m距离内不得存在明火。加温脱水和浸蜡过程必须应用隔水温箱，不得使用干烤箱操作。超声波快速处理仪石蜡切片法（参照有关厂商的说明书操作）。四、冷冻组织切片的制备应用恒冷箱切片机制备切片： 是目前最适用方法。 恒冷箱切片机种类较多，应严格按有关厂商的说明书操作。用于切片的标本必须未曾固定。应用开放式冷冻切片机制备切片1二氧化碳制冷切片（ 1）将组织块放在冷冻台上，滴加OCTE羟甲基纤维素液于组织块周围（将 组织块包埋） ，使固定在切片机上的切片

4、刀接近组织块表面。（ 2）间断开放液态二氧化碳桶的开关，喷冻组织块和切片刀，使组织块冻结和切片刀制冷。（ 3）迅速移动切片刀进行切片：先将组织块修平，然后调节厚度至812小m处进行切片。（ 4）用毛笔将切片展开，贴附于载玻片上，稍干后，置于冷冻切片固定液中固定1min,随即进行HE染色。也可用毛笔将切片托入水中，再用玻璃弯针将 切片移至染色皿中进行染色。（ 5）组织块也可先在4%H生甲醛中煮沸固定1min,水洗后再行冷冻切片。2半导体致冷切片（ 1）切片刀与持刀器之间要间隔一层云母片或硬纸片。将冷刀致冷器粘在刀面上。（ 2）将组织冷冻台安装在半导体切片机上。（ 3）将冷冻台和切片刀致冷器上的导

5、线连接在控制台直流电源上（注意：正负电极不可接反） 。（ 4）连接致冷器的冷却水管并开始放水，然后开启电源；冷却水管中的水流量不宜过大，在使用过程不得断水。（ 5）调整冷冻温度调节器，至切片刀和冷冻台呈现霜冻。（ 6） 将新鲜组织块或已固定的组织放在冷冻台中央， 滴加水或OCT， 或用水调成糊状的甲基纤维素于组织块周围（将组织块包埋） 。（ 7）待组织块冷冻适当后，进行切片。（ 8）对于未经固定的新鲜组织，用毛笔将制作满意的切片展平，立即裱贴于盖玻片或载玻片上， 待冷冻的切片刚要融化时， 立即将其置于冷冻切片固定液中固定1min。 对于已经固定的组织块， 可用毛笔将制作满意的切片托入水中， 再

6、用玻璃弯针将切片移至染色皿中进行染色。（ 9）切片完毕后，先关闭电源，再关闭冷却水，待冰霜融化后擦干机器，加罩。3甲醇致冷切片（按有关厂商的仪器说明书操作） 。4氯乙烷致冷切片（ 1）将新鲜的或已经固定的组织块置于支持器中央，加少许水或OCT。（ 2）连续喷射氯乙烷于组织块上，待组织块冻结后，改为间歇喷射，使冻结适度，立即切片。使用氯乙烷时应注意防火、防爆。（ 3）进行组织切片的裱贴、固定和染色（与上述方法相同） 。注意事项1制作冷冻切片所需的试剂和设备等应处于随时可供使用状态。2 切取的组织块大小适宜 （厚度<2mm） ， 并尽快置于冷冻组织切片机上制备切片。3调节冷冻程度，试切合适时

7、便迅速切片。冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎。4冷冻切片固定液（ 1）乙醚 - 乙醇液无水乙醚 1 份95%乙醇1 份（ 2）乙醇 - 冰醋酸液95%乙醇100ml冰醋酸35滴五、脱钙方法骨和其他钙化组织， 通常需要脱去钙盐后进行切片。 骨组织脱钙前需先行固定。常规脱钙法：1 .将骨组织锯成薄片（约1x1x0.3cm）。2 . 在AF中或4%中性甲醛中固定 612h。3 将骨片置于5%硝酸（急需时可置于37温箱）中脱钙，至用针轻刺可入时为止，约需1224h （小块骨组织脱钙仅需23h）,其间可更新脱钙液23 次。4 流水冲洗12h。5 移入5%甲明矾液，24h。6 流水冲洗23h。7 按常规

8、脱水。8石蜡包埋。电解脱钙法：将骨片置于装有8%硝酸和10%甲酸混合液的电泳槽（有盖的方形玻璃标本缸或烧杯）内的阳极处，6V直流电源下持续电解30min3h,至用针轻刺可入时 为止。骨髓组织脱钙：可浸泡于苦味酸乙醇饱和液（占 85%、甲醛（占10%和冰醋酸（占5%）的混合液中（同时进行固定和脱钙）。注意事项1骨片等脱钙组织的厚度适宜。2脱钙组织与脱钙液的体积比>1:30 。3脱钙过程中应不时摇动，多次更换脱钙液。4脱钙时间不可过长。5微波处理可加速脱钙过程。6脱钙后的组织必须用流水充分冲洗。7用于包埋的石蜡硬度适中（不要过软或过硬）。六、苏木素伊红（HB染色HE染色是应用最广泛的组织病理

9、学常规染色技术。染色程序1.石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯 I 5 10min（2）二甲苯H 5 10min(3)无水乙醇I 13min(4)无水乙醇H 13min(5) 95%醇 I 1 3min(6) 95%>H 1 3min(7) 7) 80%乙醇1min(8) 8)蒸馏水 1min(9) 苏木素液染色510min(10) 10)流水洗去苏木素液1min(11) 1%fc酸-乙醇13s(12)稍水洗12s(13)返蓝(用温水或1%t水等)510s(14)流水冲洗12min(15)蒸储水洗12min(16) 0.5%R红液染色13min(17)蒸储水稍洗12s(18)

10、80%醇 1 2s(19) 95%>1 2 3min(20) 95%>H 2 3min(21)无水乙醇I 35min(22)无水乙醇H 35min(23)石炭酸-二甲苯35min(24)二甲苯 I 3 5min(25)二甲苯 H 3 5min(26)二甲苯田35min( 27)中性树胶封固注：(12)和(13)项可省去，但(14)的冲水时间需延长至1015min。(23)项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。2.冰冻切片HE染色(1)冰冻切片固定1030s(2)稍水洗12s(3)苏木素液染色(60 C) 3060s(4)流水洗去苏木素液510s(5) 1%盐酸-乙醇13s(6)稍水洗

11、12min(7)返蓝(用温水或19氮水等)510s(8)流水冲洗1530s(9) 0.5%红液染色12min(10)蒸储水稍洗12min(11) 80%醇 1 2min(12) 95%醇 1 2min(13)无水乙醇I 12min(14)无水乙醇H 12min(15)石炭酸-二甲苯23min(16)二甲苯 I 2 3min(17)二甲苯 H 2 3min( 18)中性树胶封固注：(7)和(8)项可省去，但(9)的冲水时间需延长至1015min (细 胞核显示更清晰)。(15)项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌

12、可呈蓝色或紫蓝色。染色注意事项1切片染色前，应彻底脱蜡。2用含有升汞液体固定的组织，其切片染色前应先脱去汞盐：( 1)石蜡切片脱蜡至水洗( 2) Lugol 液 20min( 3)流水冲洗5min( 4) 95%乙醇10min（ 5）水洗 1min（ 6） 5%次亚硫酸钠水溶液5min（ 7）流水冲洗5min（ 8）显微镜观察除汞满意后，转入 HE染色3脱除福尔马林色素（必要时）：（ 1）石蜡切片脱蜡至水洗（ 2） 1%NaOH（1m归 80%J亨（99ml）混合液 10min（ 3）流水冲洗5min（ 4）转入HE染色4.严格执行HE染色流程，用显微镜控制细胞核的苏木素染色质量。HE染片应着色鲜艳，红、蓝分明，对比清晰。5载玻片自二甲苯中取出后，应立即用洁净、光亮的盖玻片和稠度适宜的中性树胶湿封载玻片。 封盖处内无气泡， 外无溢胶。 封片时必须进行操作人员和 局部环境的二甲苯污染防护。不应将组织切片烤干或风干后再行封片。6必须在载玻片的一端牢贴标签。标签上应印有病理科所在的医院名称。标签上应清楚显示有关的病理号及其亚号； 标签上的病理号应准确无误， 无涂改。7制片完成后，技术人员应对切片与其相应的病理学检查记录单或取材工作记录单认真进行核对；确认无误后，将制备好的