动物细胞工程实验教学大纲

1、动物细胞工程实验教学大纲课程名称：动物细胞工程课程编号：0321012课程性质：非独立设课 课程属性：专业课 学时学分：总学时40，总学分2，试验学时10应开实验学期：三 年级 六 学期适应专业：生物工程、生物技术专业先修课程：普通生物学;微生物学;细胞生物学；遗传学大钢主撰人： 王新卫 大纲审核人：张玉龙 张书松 一、实验课程简介细胞工程学是应用细胞生物学和分子生物学原理与方法，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有目标性状的细胞系、生物体或次生物的有关理论和技术的学科。它是一门生物科学理论和工程技术相结合的综合性学科。细胞工程是生物技术的重要组成部分，同时也是生物学研究的重要技术工具

2、。通过本课程实验课的学习和操作了解生物组织、器官及其细胞离体培养的基本技术，重点掌握细胞培养和细胞融合技术，为从事生物学和生物工程领域的相关科研、教学及生产工作奠定良好技术基础。二、本课程实验教学目的与基本要求通过实验教学，使学生重点掌握细胞工程的基本操作技术:无菌操作、培养基制备、动物原代及传代细胞培养、细胞融合及单克隆抗体制备等技术；了解细胞大批量培养方法、植物细胞培养、转基因技术、细胞重组与克隆技术、动物克隆等知识。通过实验课的教学最终达到掌握基本实验技能并培养学生创新能力的目的。要求学生有强烈的事业心，热爱生物技术专业、动物医学专业，理论和实践相结合，更深入的理解和掌握细胞工程原理与技

3、术。三、实验项目与学时分配实验序号实验项目名称学时要求类型每组人数0321012+01基础试验技术2必做基础性30321012+02培养基的制备2必做基础性30321012+03原代（鸡胚成纤维）细胞培养技术2必做创新性30321012+04细胞传代培养技术2必做创新性30321012+05细胞冻存与复苏2必做创新性30321012+06细胞融合2必做创新性3合计12四、实验方式与基本要求教学形式：实验前要求学生预习实验内容。实验课上指导教师讲述实验的基本原理、方法及仪器的使用，并指导学生独立完成具体实验步骤，解决实验中出现问题，分析实验结果。完成实验报告。要求：严格遵守实验室纪律。五、考核方

4、式与成绩评定本课程实验设置基本按照本学科研究的基本环节设计，因此，整个教学环节实行模拟研究型方式，每次实验学生进行详细观察记载，实验结束后形成完整实验资料，在此基础上撰写实验报告，作为实验考核的主要依据；同时，每次实验由指导老师对操作环节进行等级评定。最后的实验成绩按照操作成绩和报告成绩综合评分。实验成绩占整个成绩的20%。六、参考书目七、实验内容安排实验一、器械的清洗与消毒一、实验学时：2学时二、实验目的：学习并掌握细胞培养使用的器皿、器械的洗涤和消毒。三、实验内容：1清洗：(1)玻璃器皿的清洗；(2) 塑料器皿的清洗；(3) 胶塞等橡胶类的清洁；(4) 金属器械的清洗；(5) 除菌滤器的清

5、洁。2包装：1) 瓶类；2) 小瓶皿、胶塞、刀剪等器械；3) 吸管、滴管；4) 滤器、滤瓶、橡皮管；5) 无菌衣、帽、口罩。3消毒灭菌：1）热灭菌；2) 蒸气灭菌；3) 滤过除菌；4)紫外线；5)熏蒸消毒；6)煮沸消毒；7)化学消毒。四、实验要求：写出实验报告：记述玻璃器皿的清洗步骤和操作要领，分析不同的消毒除菌方式各适用于什么物品或场所的消毒除菌。五、实验用品与仪器：1仪器和用品：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器、紫外灯、0. 22m微孔滤膜。2试剂：75酒精、1%。新洁尔灭、高锰酸钾、重铬酸钾、浓硫酸。实验二、细胞培养液的配制一、实验学时：2学时二、实验目的：熟练掌握培养基（RPM116

6、40或DMEM）的配制，了解其他培养基的配制方法。2试剂：双蒸水、小牛血清、合成培养基（RPMI1640), NaHCO3。三、实验内容：1过滤器的准备和安装2合成培养基的配制3小牛血清的处理4生长培养基的配制四、实验要求：写出实验报告：列出详细实验操作过程，并在每步操作之后标明该步骤常发生的问题，指出如何解决这些问题及该步骤应注意的事项。五、实验用品与仪器：1仪器和用品：超净工作台、蠕动泵1套、滤器1套、蒸馏器、高压蒸汽灭菌锅、磁力搅拌器、pH计、3 000 ml锥形瓶、250 ml或500 ml培养液瓶、0. 22 m的微孔滤膜、冰箱实验三、原代细胞培养一、实验学时：2学时二、实验目的：掌

7、握原代细胞培养的一般方法和步骤及培养过程中的无菌操作技术，熟悉原代培养细胞的观察方法。三、实验内容：1胰酶消化法2组织块直接培养法四、实验要求：写出实验报告：记录实验过程和细胞生长情况，分析防止污染的关键环节。五、实验用品与仪器：1仪器：培养箱（调整至37）、培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血细胞计数板、离心机、水浴箱（37 )2材料：胎鼠或新生鼠。3试剂：1640培养基（含10小牛血清）,0.25胰蛋白酶、Hank's液、碘酒、75酒精。实验四、细胞的传代培养一、实验学时：2学时二、实验目的：学习掌握细胞的传代培养方法。三、实验内容：细胞传代培养：四

8、、实验要求：写出实验报告：简述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤，分析传代成败的原因。五、实验用品与仪器：1仪器：倒置显微镜、培养箱、超净工作台、培养瓶、吸管、废液缸等。2材料：贴壁细胞株。3试剂：0.25胰酶,1640培养基（含10小牛血清）。实验五、细胞的冻存和复苏一、实验学时：2学时二、实验目的：掌握细胞冻存的方法，熟练进行细胞冻存与复苏操作。三、实验内容：1冻存2复苏四、实验要求：写出实验报告，列出细胞冻存与复苏的详细过程，并注明各过程应注意的事项。统计细胞复苏后的生长情况，对结果进行分析。五、实验用品与仪器：1仪器：4冰箱、-70冰箱、液氮罐、离心机、水浴锅、微量加样器、冻存管（塑料螺口专用冻存管或安瓶瓶）、离心管、吸管等。2材料：细胞悬液。3试剂：0.25胰酶、细胞培养基、冻存液。实验六、动物细胞融合一、实验学时：2学时二、实验目的：1.了解PEG诱导细胞融合的基本原理。2.通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术。四、实验内容：1.采取鸡血2.制备细胞悬液。3.细胞计数。4.细胞融合5.计算细胞融合率五、实验要求：写出实验报告，简述动