脑通复方对血管性痴呆大鼠海马尼古丁受体的影响

1、脑通复方对血管性痴呆大鼠海马尼古丁受体的影响<                  作者：肖雁，王晓亮，邓婕，闫秀明，黄勇，况时祥，官志忠【摘要】   目的观察脑通复方制剂对拟血管性痴呆(VaD)模型大鼠脑 组织 神经型尼古丁受体（Nicotinic acetylcholine receptors ，nAChR）的影响，分析脑通复方制剂改善血管性痴呆学习记忆能力的作用机制。方法采用改良Pulsinelli四血管阻

2、断（Pulsinelli's four-vessel occlusion, 4-VO）法复制大鼠血管性痴呆模型，脑通复方制剂 治疗 后观察学习记忆能力，Western-blot法测定脑组织神经型尼古丁受体蛋白水平。结果脑通复方制剂可缩短实验大鼠逃避潜伏期，增加跨越平台次数，上调海马组织神经型尼古丁受体的表达。结论脑通复方制剂可通过上调nAChR表达，从而改善血管性痴呆学习记忆能力。 【关键词】   脑通复方制剂； 血管性痴呆； 学习记忆； 神经型尼古丁受体Abstract：ObjectiveTo observe the influnce of Nao Tong Compoun

3、d Recipe on the nicotinic acetylcholine receptors (nAChR) in rats with vascular dementia(VaD) and to explore the preventive effects of traditional Chinese medicine on spatial learning and memory deficits in rats with VaD. MethodsVaD model was created with the reformed Pulsinelli 4VO method. After es

4、tablishing the model, the rats were treated with Nao Tong compound recipe. The ability of learning and memory of VaD rats were assessed by Morris Water Maze TestThe expression of Nicotinic acetylcholine receptors in hippocampus was detected by Western-blot method. ResultsThe ability of learning and

5、memory of VaD rats was improved and the expression of nAChR in hippocampus was increased after treatment with Nao Tong compound recipe. ConclusionBy increasing the expression of nAChR and protecting neurons in hippocampus following ischemia,Nao Tong compound recipe may improve the ability of learnin

6、g and memory of VaD ratsKey words： Nao Tong Compound Recipe；  Vascular Dementia；  Learning and memory；  Nicotinic acetylcholine receptors    血管性痴呆(vascular dementia，VaD)是因血管疾病所致的智能及认知功能障碍的 临床 综合征，是老年性痴呆中最常见的类型之一， 目前尚无有效的治疗方法。但VaD是一种可以预防的痴呆,早期治疗具有可逆性。因此，探索VaD发病的相关因素、早期诊断

7、方法及其防治措施，是 医学 基础研究和临床研究的主要课题。神经型尼古丁乙酰胆碱受体(Nicotinic Acetylcholine Receptors, nAChR) 在大脑的学习、记忆、注意力的保持等方面起着重要作用1, 2。脑通复方制剂由人参、黄芪、蔓荆子、白芍、葛根、黄柏、升麻、甘草等为基础，并配以水蛭、天麻等化淤、通络、健脑之品组方。为探讨脑通复方制剂对VaD的预防效果和可能的机制，采用四血管阻断法制作VaD模型3, 4，用脑通复方制剂预防性治疗，用Morris水迷宫检测学习记忆能力。结果发现脑通复方制剂对血管性痴呆大鼠空间学习记忆减退有明显防治作用，并从神经型胆碱能受体方面初步探讨防

8、治作用的机制，为脑通复方制剂临床防治VaD提供实验室依据。 1  材料与仪器 1.1  动物健康清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，雌雄各半，68月龄，体质量300350 g，均由贵阳医学院动物研究中心提供合格证号: SCXK(黔) 200220001。随机分组分笼饲养，室内常温下配方饲料喂养，自由饮食水。适应 环境 1周后进行实验。1.2  药物脑通复方制剂由益气聪明汤化裁而成，主要药物有西洋参、天麻、黄芪、水蛭等，由贵阳医学院药学系按一定比例研制成浸膏，临床人日用生药量为23.5 g。对照用药安力申每片5 mg，成人用药量5 mg/d，批号：

9、070308A。以上药品实验前用双蒸水配制成所需浓度的混悬液，4冰箱保存，皆灌胃给药。1.3  仪器及试剂Morris水迷宫（DNS-2型），由 中国 医学 科学 院药物研究所提供。羊抗4、7，兔抗3多克隆抗体及HRP标记的抗羊、抗兔及抗鼠二抗购自美国Santa Cruz Biotechnology Inc公司；鼠抗-肌动蛋白单克隆抗体购自美国Sigma公司；聚乙烯二氟（Polyvingliene fluoride , PVDF）膜、ECL-Plus发光试剂、高效显影胶片购自Amersham公司。 2  方法 2.1  动物筛选与分组大鼠适应性喂养1周后，先进行M

10、orris水迷宫训练。第14天行定向航行实验，每天将大鼠按、象限的顺序单独放入水中，站台置于第象限，记录60 s内大鼠从水中爬上站台所需时间为逃避潜伏期；第5天行空间探索实验，记录2 min内大鼠在第象限游泳时间和穿越站台次数。选取学习能力、记忆力相近的大鼠，淘汰4只大鼠。将余下大鼠56随机分出12只作为假手术组，其余44只采用改良Pulsinelli四血管阻断(4VO)法制造血管性痴呆大鼠模型。2.2  VaD 模型的复制大鼠于术前禁食12 h，不禁水。用10%水合氯醛(300 mg·kg-1体质量)腹腔麻醉大鼠, 将大鼠俯卧固定，行背侧颈正中切口,逐层钝性分离，暴露双侧

11、第一颈椎横突翼小孔,用直径0.5 mm的电凝针插入双侧翼小孔烧灼双侧椎动脉,造成永久性闭塞。然后，再将大鼠仰卧固定，行腹侧颈正中切口,钝性分离双侧颈总动脉,以“4”号丝线穿线备用。24 h后，用微动脉夹可逆性夹闭双侧颈总动脉5 min,共夹闭3次,每次间隔1 h。局部伤口缝合前，以青霉素局部喷洒处理防止感染，术后3 d给予青霉素20万U·只-1肌肉注射抗感染,常规饲养、观察。假手术组手术程序同上，仅暴露4条血管, 但不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。2.3  动物分组4-VO术后死亡和淘汰共8只，实际成模为36只，根据随机数字表随机分为3组：模型组12只，脑通复方制剂组12只，安力申组12只。假手术组和模型组均灌服等量生理盐水；防治组给予脑通复方制剂8