医院检验中心红细胞沉降率测定操作规程

1、医院检验中心红细胞沉降率测定操作规程 标本 200ul 枸橼酸钠抗凝静脉血 1.1ml ，颠倒混匀。 原理 离体抗凝血液置于特制刻度测定管 魏氏法血沉管内， 垂直立于室温中，一定时间时观察上层血 浆高度的毫米数值报 告之。 仪器及试剂 MONITOR JI 血沉仪、专用血沉管109mmoJ/ L 32g/L 枸橼酸钠溶液：取含二分子结 晶水的枸橼酸钠分子量 294123 28，用蒸馏水溶解，稀释至 100ml 。此液在室温保存不得超过 2 周。 操作 1专用血沉管 1 支，加抗凝剂 0 2ml。2静脉采血后，取下针头，加血至刻度，颠倒混匀3. 用血沉管300mnX 2. 5mn吸取上述混匀血液

2、至“ 0 刻度处，拭去管外附着的血液，将血沉管直立在血沉 架上。MONITOR JI操作4. 记时，室温中静置 lh ，读出血沉仪上的读数即是血沉值。 参考值 男： v 15mm/ 60min女： v 20mm/60min 附注 1 . 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量和质，血浆中脂类的量和质，红细胞的大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置 直，室温上下等因素都有关系。2. 要求(1) 标本采集时防止脂肪血。(2) 血液和抗凝剂比例要准确。(3) 血沉管内径要标准(2 . 5mm放置要垂直。(4) 做血沉的标本要在采集后 3h 内测定，并充分混3室温过低、过高和

3、贫血时，对结果都有影响。为是否垂匀。此，血沉应尽量放在 1825C 室温下测定。 室温 过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过 低时血沉减 慢，无法校正。 临床意义 增快：(l) 生理性：年幼小儿、 经期、妊娠 3 个月至产后 1 个月(2) 病理性： 急性炎症、结缔组织病、活动性结核、风湿 热活动期、 组织严重破坏、 贫血、 恶性肿瘤、 高球蛋白血症、重金属中毒等。医院检验中心 血型鉴定操作规程(1) ABO血型鉴定根据红细胞上有或无 A抗原或/和B抗原，将血型分为 A型、B型、 AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、 反定型准确鉴 定ABC血型。所谓正定型，是用抗一 A和 抗

4、一 B分型血清来测 定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用 A细胞和B细胞来测定血清中 有无相 应的抗一 A或/和抗一 Bo 试剂和材料 1. 抗一 A B型血、抗一 B A型血及抗一 A十B O型血分型血清，制备方法见本节附注；2. 5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3. 受检者血清；4. 受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。方法1试管法 取洁净小试管内径10mn60mm3支，分别标明抗A、抗一 B和抗一 A十B,用滴管分别加抗一 A、抗一 B和抗一A十B。分型血清各I滴于试管底部，再以滴管 分别参加受检者5红细胞盐水悬液 1 滴，混和。2

5、 另取洁净小试管 内径 10mm 60mm3 支，分别标明 A B和0细胞。用滴管分别参加受检者血清I滴于试 管底部, 再分别以滴管参加 A B和0型5%式剂红细胞悬液I滴，混和(4) 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以 内眼观察有无凝集 ( 或溶血 ) 现象。 如内眼不见凝集， 应 将 反响物倒于玻片上，再以低倍镜检查。(5) 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度， 此有助 于 A、 B 亚型、类 B 或 cisAB 的发现。(6) 凝集强度判断标准4 十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细

6、胞。1 十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞 镜下可见数 个红细胞凝集在一起，周围有很多土游离红细胞混合凝集外观 (mixed field) 是指镜下可见少数红 MF细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布2 玻片法1取清洁玻片1张或白瓷板1块，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内， 再各加受检者 2 %红细胞悬液1滴，混和。2另取洁净玻片一张或白瓷板1块，用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加 A B和0型试剂 红细胞 悬液

7、1滴3将玻片或白瓷板不断轻轻转动，使血清与细胞充 分 混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集 或溶 血反 应。如以玻片作试验时，也可用低倍镜观察结果。结果判定IABO血型正反定型结果受检者分型血清+受检者受检者血清+试剂红细胞血型红细胞抗-A抗-B抗-A十BA细胞B细胞0细胞十十A十十十B十0十十十十十AB注：十为凝集；一为一不凝集。附注1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。2. 试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理 盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3. 试管、滴管和玻片必须清洁枯燥，防止溶血。4 操作方法应按规定，一般应先加血清，

8、然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清5.按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反响温度以4C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰， 一般仍在室温 (20 24C) 内进行试验， 37C 可使反响减弱。6. 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防 假阳性 或假阴性结果。7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8判断结果后应仔细核对、记录，防止笔误。 正反定型结果不一致的原因 有技术性问题或红细胞和血清本身 的问题，常见者有以下几 种：1. 分型血清效价太低、 亲和力不强。 如抗 A 血清效价不 高，可将A亚型误定为 0型，AB型误定为B型。2红细胞悬液过

9、浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反 应不明显，误判为阴性反响。3受检者红细胞上抗原位点过少 (如亚型 )或抗原性减弱见于白血病或恶性肿瘤：以及类 B 或 cisAB 等4受检者血清中蛋白紊乱 高球蛋白血症 ，或实验时温 度 过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。5受检者血清中缺乏应有的抗 -A 及或抗 B 抗体，如丙 种球 蛋白缺乏症。6各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。局部溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体 .7由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。8血清中有意外抗体，如自身抗 I ，常引起干扰。 9老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决方法如发

10、现 ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验 1 次。严格执行操作规程， 使用质量合格的试 剂以 及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问 题，对一些疑 难问题月必须进一步研究。 检查步骤 1另从受检者采取 l 份新鲜血液标本这样可以纠正因污 染或搞 错样本造成的不符合。2将红细胞洗涤数次， 配成 5盐水细胞悬液， 用抗 A、抗一 B、抗一 Al，抗一 A十B及抗H做试验可以得到其 它有用 的信息。3对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性， 表示红细胞已被抗体致敏。4. 用Al、Az、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果疑心是抗一 I ,用O型或ABO相合的脐血红细胞 检查。5如

11、果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4C放置30min，用显微镜检查核实。6.如疑为A抗原或B抗原减弱，那么可将受检红细胞与抗 A 或抗 B 血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对 80%HAB分泌型的人有用。7如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水l 滴，混和， 往往可使绢钱现象消失。 应注意不应先加盐水 l 滴 于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释&如受检者为 A 型血而疑为有类 B 抗原时，可用以下方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗一 A 及抗一 B 的凝集强度，与抗一 A 的 反响 要比与抗一 B 的反响强。这种区别用玻片法作 试验更为明 显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗B不凝集自身红细胞上的类 B抗原。(3) 检查唾液中是否有 A、 B 物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。(4) 核对患者的诊断，类