临床化学常用分析方法

1、临床化学常用分析技术临床化学常用分析方法一、光谱分析（分光光度技术）利用各种化学物质所具有的发射、吸收或散射光谱谱系的特征，来确定其性质、结构或含量的技术,称为光谱分析技术。具有灵敏、快速、简便等特点，是生物化学分析中最常用的分析技术。发射光谱分析：荧光分析法和火焰光度法吸收光谱分析：可见及紫外光分光光度法、原子吸收分光光度法散射光谱分析：比浊法二、电泳分析在直流电场中，带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳。7醋限纤维素薄膜电泳,源胶电泳：聚丙烯酷胺晶胶电泳、琼脂楣健胶电泳等电聚焦电泳：分离等电点不同的蛋白质;毛细管电泳三、离心技术离心技术分为制备离心技术和分析离心技术。制备离心技术主

2、要用于物质的分离、纯化，而分析离心技术主要用来分析样品的组成。平衡离心法工可用来分离细胞、细胞膜或细胞砰片.I差速离心法：分辨率不高，常用于定性分离手段之前的粗制品提取.密度梯度离心法：具有很高的分辨率。、分析性超速离心；研究生物大分子的沉降特性和结构。四、层析技术层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由固定相和流动相组成。凝胶层析：又称分子筛过滤.常用葡聚糖凝胶.离子交换层析：分离离子型化合物.高效液相层析：分离能力强、测定灵敏度高可在室温下进行口亲和层析,利用待分离物质I和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而血分离的目的.五、电化学分析技术利用物质的电化学性

3、质，测定化学电池的电位、电流或电量的变化进行分析的方法称为电化学分析法。包括电位法、电导法、电容量分析法。离子选择电极法：离子选择电极（ISE）能对某特定离子产生响应，在一定范围内，其电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系，因此可用离子选择电极来定量分析某些离子的活度或浓度。例题用于分离不同分子大小蛋白质的方法是A.琼脂糖凝胶电泳B.凝胶层析C.密度梯度离心法D.免疫比浊法E.电化学分析法答疑编号700812140101【正确答案】B血清酶催化活性浓度和代谢物浓度检测技术一、酶反应动力学原理酶反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素，定量时的观察对象是总单位时间

4、内底物的减少或产物增加的量。当底物SKm时，公式可近似为V=Vma4从理论上说只有测定的是酶Vmax反应速度才和酶量成正比。米氏方程：v=VmaxSKe +S二、酶活性的定义及单位在实验规定的条件下（温度、最适pH、最适底物浓度时），在1分钟内催化1mol底物发生反应所需的酶量作为1个酶活力国际单位（U。习惯用U/L来表示体液中酶活性浓度。三、测定酶活性浓度的两大类方法（一）固定时间法（取样法）（二）连续监测法：酶耦联法（指示酶、辅助酶）AExEaEiABCDCK磷酸肌酸+ADP-肌酸TPHKATPHfi銮檐6-磷酸荀萄精+ADP6-鳞假药罂糖脱墨酶6书酸萄糖靖ADP+6磷酸葡萄精酸（三）影响

5、酶活性测定的因素1 .底物浓度的影响：底物的种类和浓度。多种底物中，Km最小的底物往往是此酶的生理底物。2 .反应体系的最适pH、缓冲液的种类和浓度。3 .温度的控制：37Co四、代谢物浓度酶法测定（一）代谢物酶促终点法测定1 .一步法：最简单的底物法测定。2 .酶促耦联法：工具酶（指示酶、辅助酶）在临床生化测定中，最常用的耦联指示系统有两个：一个是脱氢酶系统，另一个为氧化酶系统。脱氢酶系统：测定NA-或NADP在340nm处的吸光度增高或下降来计算被测物的浓度。但会受到内源性脱氢酶及其底物如乳酸脱氢酶和乳酸/丙酮酸的干扰。（二）动力学法测定：实际操作中，测定两个固定时间的吸光度差值，只要此期间待测物消耗V5%就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度，所以动力学法有时又称为固定时间法。与终点法相比，动态法