月季花药培养

1、 花中皇后月季又称花中皇后月季又称“月月红月月红”，自然花期自然花期5至至11月月，开花连续不断开花连续不断 ，通常扦插就可以成活通常扦插就可以成活。 课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养知识回顾 单倍体育种的过程？单倍体育种的过程？花药离体培养（花药离体培养（N）单倍体植株（单倍体植株（N）秋水仙素处理，秋水仙素处理，使染色体数加倍使染色体数加倍植株（植株（2N）正常植株（正常植株（2N）1 1、被子植物定义：、被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物一、被子植物和

2、裸子植物2 2、裸子植物定义：、裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植物为裸子植物实例：玉米、大豆、梨、杏实例：玉米、大豆、梨、杏实例：松、杉、柏实例：松、杉、柏花的结构花的结构花托花托花萼花萼花瓣花瓣雄蕊雄蕊花药花药花丝花丝雌蕊雌蕊柱头柱头花柱花柱子房子房花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉囊状结构，内有很多花粉1 雄蕊雄蕊一、基础知识一、基础知识2 花粉的概念花粉的概念:由由花粉母细胞花粉母细胞经过经过减数分裂减数分裂形成形成的的单倍体的生殖细胞单倍体的生殖细胞.被子植物花粉的

3、发育过程被子植物花粉的发育过程小孢子母细胞小孢子母细胞减数分裂减数分裂4个小孢子个小孢子(小孢子四分体时期小孢子四分体时期)小孢子小孢子(单核居中期单核居中期) 小孢子小孢子(单核靠边期单核靠边期)小孢子小孢子 生殖细胞核生殖细胞核+花粉管细胞核花粉管细胞核有丝分裂有丝分裂（花粉粒的双核期）（花粉粒的双核期）生殖细胞将再进行一次有丝分裂，形成两个精子生殖细胞将再进行一次有丝分裂，形成两个精子注意注意：二核花粉粒二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒三核花粉粒：有些植物的花粉

4、，在成熟前，生殖细：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个花粉管细胞核和两个精子。成熟时，含有一个花粉管细胞核和两个精子。例题：两个精子和花粉管细胞核的例题：两个精子和花粉管细胞核的基因型基因型相同相同4个小孢子个小孢子减数减数分裂分裂有丝有丝分裂分裂4个花粉管细胞核个花粉管细胞核4个生殖细胞核个生殖细胞核有丝分裂有丝分裂8个精子个精子1花粉花粉母细胞母细胞2NNNN被子植物子房的结构被子植物子房的结构胚珠的结构胚珠的结构花粉管花粉管精精 子子卵细胞卵细胞极核极核子房壁子房壁珠被珠被珠孔珠孔雌

5、蕊雌蕊 的结构的结构移栽移栽花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 花药中花药中的花粉的花粉脱分化脱分化 分化分化 丛芽丛芽 再分化再分化 丛芽丛芽 诱导诱导生根生根体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与变为与合子发育成的胚非常相似的结构合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类，发育过程亦与合子胚类似似原因：培养基中的激素原因：培养基中的激素种类种类及及浓度配比浓度配比烟草花药培养烟草花药培养胚状体发育途径胚状体发育途径部分花药通过胚状体途径形成小植株部分花药通过胚状体途径形成

6、小植株愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养水稻花药培养愈伤组织发育途径愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药接种在平板上的水稻花药 1、材料的选择、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响直接的影响. （一般选月季的初花期）（一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成、培养基的组成（ MSM

7、S培养基培养基+ +不同比例的植物生不同比例的植物生长调节激素）长调节激素）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等(三三)、影响花药培养的主要因素、影响花药培养的主要因素注意：选择最合适的花粉发育时期注意：选择最合适的花粉发育时期:单核期单核期 不选择单核期之前花药原因：不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎花药质地幼嫩，容易破碎； 不选择单核期之后花药原因：不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难难困难； 挑选单核期花药方法：应当选挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，

8、微生物少，择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。易消毒。花花雄蕊雄蕊雌蕊雌蕊花药花药花粉粒花粉粒精子精子精子精子子子 房房胚珠胚珠胚囊胚囊子房壁子房壁珠被珠被卵细胞卵细胞两个极核两个极核受受精精卵卵受受精精极极核核胚胚胚胚乳乳种皮种皮种种子子果皮果皮果实果实有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂1n1n1n1n2n2n1n1n3n3n2n2n2n2n2n2n2n2n胚是一个新个体的幼体胚是一个新个体的幼体5 5、发育结果、发育结果实验操作实验操作一、材料的选取一、材料的选取二、材料的消毒二、材料的消毒三、接种和培养三、接种和培养（一）材料选取（一）材料选取 2、通过、通过镜检镜检来确定是否处于适宜的

9、发育期来确定是否处于适宜的发育期。 方法：方法：醋酸洋红法醋酸洋红法(将染色体染成红色将染色体染成红色) 焙花青焙花青-铬矾法铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看、从花药看：月季的初花期：月季的初花期 从花粉看：从花粉看：单核期单核期 从花蕾看从花蕾看：完全未开放的：完全未开放的 花药（载玻片上）花药（载玻片上）1%的醋酸洋红的醋酸洋红1滴滴用镊柄将花药捣碎，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于载玻片上取出，置于载玻片上焙花青

10、铬矾溶液染色焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）被染成蓝黑色） 醋酸洋红法染色机理醋酸洋红法染色机理: :醋酸洋红为醋酸洋红为碱性染色剂碱性染色剂，而花，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNADNA和蛋白质和蛋白质, ,易被碱性染料着色易被碱性染料着色染成红色染成红色 。 醋酸洋红法染色机理醋酸洋红法染色机理: :醋酸洋红为醋酸洋红为碱性染色剂碱性染色剂，而花，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNADNA和蛋白质和蛋白质, ,易被碱性染料着色易被碱性染料着色染

11、成红色染成红色 。（二）材料的消毒（二）材料的消毒5 5、无菌水冲洗、无菌水冲洗3 35 5次次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用、花蕾用体积分数为体积分数为70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、无菌水清洗、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分钟分钟 （质量分数为质量分数为1%的的次氯酸钙溶液次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液或饱和漂白粉溶液）为什么花瓣松动会给为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？材料的消毒带来困难？答：花

12、瓣松动后，微答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。为什么花瓣松动会给为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？材料的消毒带来困难？（三）接种和培养（三）接种和培养 1 1 灭菌后花蕾，要在灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。并立即将花药接种到培养基上。 3 通常每瓶接种花药通常每瓶接种花药 ，温度控制在，温度控制在 左左右，右， 。幼小植株形成后才。幼小植株形成后才 。 2 在剥离花药时，要尽量在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织容易从受伤

13、部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻），同时还要彻底底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成胚状体的形成。 一般经过一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 4 进一步鉴定和筛选：进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变常常会出现染色体倍性的变化化无菌条件无菌条件不损伤花药不损伤花药去除花丝去除花丝7-10个个25不需要光照不需要光照需要

14、光照需要光照主要原因是主要原因是花粉管核和花粉管核和生殖核融合生殖核融合造成的造成的课题成果评价课题成果评价 一一 选材是否恰当选材是否恰当 二二 无菌技术是否过关无菌技术是否过关 三三 接种是否成功接种是否成功植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织植物组织培养技术培养技术离体的植物组离体的植物组织经脱分化形织经脱分化形成愈伤组织，成愈伤组织，再分化成丛芽，再分化成丛芽，诱导出根，然诱导出根，然后进行移栽。后进行移栽。外植体为体细胞，染色体外植体为体细胞，染色体数无需加倍。数无需加倍。花药培养花药培养技术技术取材

15、为花药，培养的为单取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，复正常植株的染色体数，而且为纯种。而且为纯种。1.1.答：答： F F2 2代紫色甜玉米的基因型组成可能为代紫色甜玉米的基因型组成可能为AasusuAasusu或或AAsusuAAsusu。 如果运用常规育种方法，将如果运用常规育种方法，将F F2 2代中的紫色甜玉米与代中的紫色甜玉米与白色甜玉米（白色甜玉米（aasusuaasusu）进行测交，可以选择出基因型为）进行测交，可以选择出基因型为AAsusuAAsusu纯种紫色甜玉米。但这种方法比较繁琐，耗时也纯种紫色甜玉米