081122高二生物《基因工程的基本操作程序》（课件）

1、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序善假于物也善假于物也原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构编码区编码区原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 启动子启动子原核细胞的

2、基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子原核细胞的基因结构原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子原原核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区：原原核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区：非编非编码区码区原原核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码蛋白质，连续不间断编码蛋白质，连续不间断编码区编码区：非编非编码区码区原原核

3、核细细胞胞的的 基基因因结结构构不编码蛋白质。不编码蛋白质。编码蛋白质，连续不间断编码蛋白质，连续不间断编码区编码区：非编非编码区码区原原核核细细胞胞的的 基基因因结结构构不编码蛋白质。不编码蛋白质。编码蛋白质，连续不间断编码蛋白质，连续不间断编码区编码区：非编非编码区码区原原核核细细胞胞的的 基基因因结结构构调控遗传信息表达调控遗传信息表达, ,上上游的游的RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区真核细胞的基因

4、结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区编码区上游编码区上游 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点启动子启动子编码区上游编码区上游 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点启动子启动子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码

5、区下游编码区下游 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 外显子外显子 真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 内含子内含子 外显子外显子 真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区：非编码区

6、：真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区：非编码区：外显子：能编码蛋白质的外显子：能编码蛋白质的 序列序列内含子：不能编码蛋白质内含子：不能编码蛋白质 的序列的序列真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区：非编码区：外显子：能编码蛋白质的外显子：能编码蛋白质的 序列序列内含子：不能编码蛋白质内含子：不能编码蛋白质 的序列的序列有调控作用，上游有有调控作用，上游有RNARNA聚聚合酶结合位点合酶结合位点( (启动子启动子) )。真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区：非编码区：外显子：能编码蛋白质的外显子：能编码蛋白质的 序列序列内含子：

7、不能编码蛋白质内含子：不能编码蛋白质 的序列的序列有调控作用，上游有有调控作用，上游有RNARNA聚聚合酶结合位点合酶结合位点( (启动子启动子) )。非编码序列：非编码序列：真真核核细细胞胞的的 基基因因结结构构编码区编码区非编码区：非编码区：外显子：能编码蛋白质的外显子：能编码蛋白质的 序列序列内含子：不能编码蛋白质内含子：不能编码蛋白质 的序列的序列有调控作用，上游有有调控作用，上游有RNARNA聚聚合酶结合位点合酶结合位点( (启动子启动子) )。非编码序列：非编码序列： 包括非编码区和内含子包括非编码区和内含子非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区RNA聚合酶聚合酶结合位点结合

8、位点外显子外显子内含子内含子终止子终止子启动子启动子原原核核真真核核基因的结构基因的结构1. 下列关于基因结构的认识中，正下列关于基因结构的认识中，正确的是确的是 （ ）A. 大豆基因中内含子是能够编码蛋大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列白质的序列B. 乳酸菌与酵母菌基因结构中都存乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子在外显子和内含子C. 大肠杆菌基因与大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合聚合酶结合位点位于编码区的下游位点位于编码区的下游D. 水稻细胞基因的编码区中存在非水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列编码序列1. 下列关于基因结构的认识中，正下列关于基因结构的认识中，正确的是确的是

9、（ ）A. 大豆基因中内含子是能够编码蛋大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列白质的序列B. 乳酸菌与酵母菌基因结构中都存乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子在外显子和内含子C. 大肠杆菌基因与大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合聚合酶结合位点位于编码区的下游位点位于编码区的下游D. 水稻细胞基因的编码区中存在非水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列编码序列2.(多选多选)原核细胞与真核细胞基因结原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是构的共同特点是 （ ）A. 编码区都有能编码蛋白质的序列编码区都有能编码蛋白质的序列B. 编码区都是连续的编码区都是连续的C. 非编码区都能调控遗传信息的表达非编

10、码区都能调控遗传信息的表达D. 非编码区都有非编码区都有RNA聚合酶结合的聚合酶结合的位点位点2.(多选多选)原核细胞与真核细胞基因结原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是构的共同特点是 （ ）A. 编码区都有能编码蛋白质的序列编码区都有能编码蛋白质的序列B. 编码区都是连续的编码区都是连续的C. 非编码区都能调控遗传信息的表达非编码区都能调控遗传信息的表达D. 非编码区都有非编码区都有RNA聚合酶结合的聚合酶结合的位点位点基因工程的操作四个步骤：基因工程的操作四个步骤：1、提出目的基因、提出目的基因2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4

11、、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定一、提取目的基因一、提取目的基因1. 目的基因主要是指目的基因主要是指_2. 获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法一、提取目的基因一、提取目的基因1. 目的基因主要是指目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因2. 获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法一、提取目的基因一、提取目的基因1. 目的基因主要是指目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因2. 获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取）从基因文库中获取一、提取目的基因一、提取目的基因1. 目的基因主要是指目的基因主要是指

12、_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因2. 获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取）从基因文库中获取（2）利用）利用PCR技术扩增技术扩增一、提取目的基因一、提取目的基因1. 目的基因主要是指目的基因主要是指_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因2. 获取目的基因的常用方法获取目的基因的常用方法（1）从基因文库中获取）从基因文库中获取（2）利用）利用PCR技术扩增技术扩增（3）人工合成）人工合成1. 基因文库基因文库( (一一) )从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因1. 基因文库基因文库( (一一) )从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目

13、的基因将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库称为基因文库基因文库基因文库 基因组文库基因组文库部分基因文库部分基因文库（如（如:cDNA文库）文库）1. 基因文库基因文库( (一一) )从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为

14、基因文库称为基因文库基因组基因组文库与文库与部分基部分基因文库因文库的关系的关系基因组基因组DNADNA文库的构建文库的构建鸟枪法：鸟枪法： ( (直接分离法直接分离法) )该法最大的缺点是带有很大的该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。生物中去。鸟枪法：鸟枪法： ( (直接分离法直接分离法) )鸟枪法：鸟枪法：( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建

15、基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA限制酶限制酶( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段限制酶限制酶( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载

16、体连接载体连接( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接分别分别 导入导入( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接受体细胞受体细胞分别分别 导入导入( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA

17、片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接受体细胞受体细胞分别分别 导入导入外源外源DNADNA扩增扩增( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状分别分别 导入导入外源外源DNADNA扩增扩增( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载

18、体连接载体连接受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状分别分别 导入导入外源外源DNADNA扩增扩增分离分离( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库鸟枪法：鸟枪法：供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶分别与运分别与运 载体连接载体连接受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状分别分别 导入导入外源外源DNADNA扩增扩增目的基因目的基因分离分离( (直接分离法直接分离法) )2. 构建基因文库构建基因文库反转录法：反转录法：2. 构建基因文库构建基因文库反转录法：反转录法：基因重组基因重组反转录酶反转录酶mRNAcDNA2

19、. 构建基因文库构建基因文库mRNA 反转录反转录cDNA(互补互补DNA） DNA聚合酶聚合酶双链双链DNA反转录法：反转录法：基因重组基因重组反转录酶反转录酶mRNAcDNA2. 构建基因文库构建基因文库基因组基因组DNADNA文库文库cDNAcDNA文库文库基因组基因组DNA文库与文库与cDNA文库的比较文库的比较根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补

20、配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列根据已知的氨基酸序列合成根据

21、已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列推测推测根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，

22、推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列推测推测根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因

23、。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列推测推测推测推测根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测推测

24、推测根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测推测推测化学合成化学合成根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNA法：法：根据已知蛋白质根据

25、已知蛋白质的氨基酸序列，推测的氨基酸序列，推测出相应的信使出相应的信使RNA序序列，然后按照碱基互列，然后按照碱基互补配对原则，推测出补配对原则，推测出它的结构基因的核苷它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测推测推测目的基因目的基因化学合成化学合成上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成

26、酸合成DNADNA法法上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操作简便广泛使用广泛使用上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操作简便广泛使用广泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分离出来的有时并分离出来的有时并非一个基因非一个基因上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点

27、鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操作简便广泛使用广泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分离出来的有时并分离出来的有时并非一个基因非一个基因专一性强专一性强上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操作简便广泛使用广泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分离出来的有时并分离出来的有时并非一个基因非一个基因专一性强专一性强操作过程麻烦，操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要很不稳定，要求的技术条件较高求的技术条

28、件较高上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操作简便广泛使用广泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分离出来的有时并分离出来的有时并非一个基因非一个基因专一性强专一性强操作过程麻烦，操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要很不稳定，要求的技术条件较高求的技术条件较高专一性最强专一性最强上述三种目的基因提取的方法有何上述三种目的基因提取的方法有何优缺点优缺点？优点优点缺点缺点鸟枪法鸟枪法反转录法反转录法根据已知氨基根据已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作简便操

29、作简便广泛使用广泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分离出来的有时并分离出来的有时并非一个基因非一个基因专一性强专一性强操作过程麻烦，操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要很不稳定，要求的技术条件较高求的技术条件较高专一性最强专一性最强仅限于合成核苷酸仅限于合成核苷酸对较少的简单基因对较少的简单基因(3)如何从基因文库中得到所需要的基因？如何从基因文库中得到所需要的基因？(3)如何从基因文库中得到所需要的基因？如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。依据：目的基因的有关信息。(3)如何从基因文库中得到所需要的基因？如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。依

30、据：目的基因的有关信息。如：根据如：根据基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物基因的转录产物mRNAmRNA基因翻译产物蛋白质基因翻译产物蛋白质 等特性。等特性。1. 构建基因组构建基因组DNA文库时，首先应分文库时，首先应分离细胞的离细胞的( )A. 染色体染色体DNA B. 线粒体线粒体DNAC. 总总mRNA D. tRNA 1. 构建基因组构建基因组DNA文库时，首先应分文库时，首先应分离细胞的离细胞的( )A. 染色体染色体DNA B. 线粒体线粒体DNAC. 总总mRNA D. tRNA 2. 目的基因可从基因文库

31、中获得，目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是下列有关基因文库的描述正确的是A. 某生物的全套基因就是一个基因某生物的全套基因就是一个基因文库文库B. 将含有某种生物不同的许多将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物片段，导入某个生物 体内，则这个生物体内，则这个生物就是一个基因文库就是一个基因文库C. 含有一种生物所有基因的基因文含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库库叫做基因组文库D. 含有一种生物的一部分基因的基含有一种生物的一部分基因的基因文库叫因文库叫cDNA文库文库2. 目的基因可从基因文库中获得，目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述

32、正确的是下列有关基因文库的描述正确的是A. 某生物的全套基因就是一个基因某生物的全套基因就是一个基因文库文库B. 将含有某种生物不同的许多将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物片段，导入某个生物 体内，则这个生物体内，则这个生物就是一个基因文库就是一个基因文库C. 含有一种生物所有基因的基因文含有一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库库叫做基因组文库D. 含有一种生物的一部分基因的基含有一种生物的一部分基因的基因文库叫因文库叫cDNA文库文库 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_

33、、 _ 、_. 原理：原理：_( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外( (二二) )利用利用P

34、CRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制( (二二) )

35、利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链

36、式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物( (二二) )利用利用PCRPCR技术

37、扩增目的基因技术扩增目的基因 概念：概念：PCR全称为全称为_，是一项在生物是一项在生物_复制复制_的核酸合成技术。的核酸合成技术。 条件：条件：_(前提条件前提条件)_、 _ 、_. 原理：原理：_聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNA片段片段DNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物热稳定热稳定DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)( (二二) )利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）结果：结果：过程：过程：方式：以

38、方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）结果：结果：指数指数过程：过程：方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）结果：结果：指数指数2n过程：过程：方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）结果：结果：指数指数2n使目的基因的片段在短时间内成百使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增万倍地扩增过程：过程：方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）结果：结果：指数指数2n使目的基因的片段在短时间内成百使目的基因的片段在短时间内成百万倍

39、地扩增万倍地扩增过程：过程：变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲退火：退火：冷却至冷却至5560部分引物与模部分引物与模板的单链板的单链DNA的特的特定互补部位相配对定互补部位相配对和结合和结合延伸：延伸：加热至加热至7075以目的基因为以目的基因为模板，合成互补的模板，合成互补的新新DNA链链变性变性退火退火延伸延伸变性：变性：加热至加热至9095双链双链DNA解链成为解链成为单链单链DNA1. 在已知序列信息的情况下，获取在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是目的基因的最方便方法是A. 化学合成法化学合成法B. 基因组文库法基因组文库法C. cDNA文库法文库法D. 聚

40、合酶链反应聚合酶链反应1. 在已知序列信息的情况下，获取在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是目的基因的最方便方法是A. 化学合成法化学合成法B. 基因组文库法基因组文库法C. cDNA文库法文库法D. 聚合酶链反应聚合酶链反应二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分

41、子（重组质粒）1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使

42、其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒

43、）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶相同的黏性末端相同的黏性末端1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心

44、核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶切口切口相同的黏性末端相同的黏性末端1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建核心核心(1)用一定的用一定的_切割质粒，使其出切割质粒，使其出现一个切口，露出现一个切口，露出_。(2)用用_切断目的基因，使

45、其切断目的基因，使其产生产生_。(3)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再加入适量处，再加入适量_，形，形成了一个重组成了一个重组 DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶切口切口DNA连接酶连接酶相同的黏性末端相同的黏性末端1.过程过程:1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理同一种同一种1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶

46、处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因同一种同一种1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNA 连接酶连接酶同一种同一种1.过程过程:二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建质粒质粒DNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNA 连接酶连接酶重组重组DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种1.过程过程:二、基因表

47、达载体的构建二、基因表达载体的构建2.2.基因表达载体的作用基因表达载体的作用2.2.基因表达载体的作用基因表达载体的作用a. 使目的基因在受体细胞中稳定存在并使目的基因在受体细胞中稳定存在并 遗传给子代遗传给子代b. 同时使目的基因能表达和发挥作用同时使目的基因能表达和发挥作用2.2.基因表达载体的作用基因表达载体的作用a. 使目的基因在受体细胞中稳定存在并使目的基因在受体细胞中稳定存在并 遗传给子代遗传给子代b. 同时使目的基因能表达和发挥作用同时使目的基因能表达和发挥作用思考：思考：作为基因工程表达载体，只作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？需含有目的基因就可以完成任

48、务吗？为什么？为什么？不可以。不可以。因为目的基因在表达载体中得到因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是：建上述元件的主要理由是：(1)(1)生物之间进行基因交流，只有使用受生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；基因的表达；(2)(2)通过通过cDNAcDNA文库获得的目的基因没有启文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法动子，只将编码序列

49、导入受体生物中无法转录；转录；(3)目的基因是否导入受体生物中需要有筛目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记；选标记；(4)为了增强目的基因的表达水平，往往还为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等；要增加一些其他调控元件，如增强子等；(5)有时需要确定目的基因表达的产物存在有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。等。3.3.基因表达载体的组成：基因表达

50、载体的组成：a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终止子终止子d. 标记基因标记基因3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终止子终止子d. 标记基因标记基因3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终止子终止子d. 标记基因标记基因位于基因的首端，是位于基因的首端，是mRNA结合位点结合位点3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终

51、止子终止子d. 标记基因标记基因位于基因的首端，是位于基因的首端，是mRNA结合位点结合位点位于基因的末端，位于基因的末端，终止转录终止转录3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：它们有什么作用？它们有什么作用？a.目的基因目的基因 b. 启动子启动子c. 终止子终止子d. 标记基因标记基因位于基因的首端，是位于基因的首端，是mRNA结合位点结合位点位于基因的末端，位于基因的末端，终止转录终止转录检测目的基因是否导检测目的基因是否导入受体细胞入受体细胞3.3.基因表达载体的组成：基因表达载体的组成：1.（多选）一个基因表达载体的构建（多选）一个基因表达载体的构建 应包括应包括 A. 目

52、的基因目的基因 B. 启动子启动子 C. 终止子终止子 D. 标记基因标记基因1.（多选）一个基因表达载体的构建（多选）一个基因表达载体的构建 应包括应包括 A. 目的基因目的基因 B. 启动子启动子 C. 终止子终止子 D. 标记基因标记基因2. 下列关于基因表达载体的叙述不正下列关于基因表达载体的叙述不正确的是确的是A. 启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合聚合酶识别和结合的部位，是起始密码的部位，是起始密码B. 启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C. 标记基因是为了鉴别受体细胞中是标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因从而便于筛选否有目的基因从而便于筛选D. 基因表达载体的构建视受体细胞及基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同而有所差别导入方式不同而有所差别2. 下列关于基因表达载体的叙述不正下列关于基因表达载体的叙述不正确的是确的是A. 启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合聚合酶识别和结合的部位，是起始密码的部位，是起始密码B. 启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用C. 标记基因是为