第六章 芳酸及其酯类药物的分析

1、l第一节第一节 典型药物分类与性质典型药物分类与性质一、分类根据结构分为: 苯甲酸类 水杨酸类 其它芳酸l1、苯甲酸类苯甲酸类l代表药物：COOHSO2(CH3CH2CH2)2NC O O N a苯甲酸(钠) 丙磺舒丙磺舒COOHNHCH3CH3甲芬那酸甲芬那酸l2、水杨酸类水杨酸类l代表药物有:COOHOCOCH3COONaOHC O O N aO HN H2阿司匹林 水杨酸(钠) 对氨基水杨酸(钠) l3、其它芳酸其它芳酸l代表药物CH2CHCH3CH3COOHCH3CH氯贝丁酯 布洛芬ClO CCH3CH3COOC2H5二、结构分析包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐 共同点：苯环、羧基共同点：苯

2、环、羧基 不同点：不同的取代基（如酚羟基、不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）芳伯氨基等） l三、性质三、性质l1、性状：l大多数是结晶性固体 少数为液体（水杨酸甲酯、苯甲酸苄酯）l2、溶解性：l游离芳酸类药物，几乎不溶于水，易溶于有机溶剂l芳酸碱金属盐易溶于水l3、酸性： 芳酸类药物分子中具有COOH，所以显酸性 药用芳酸pKa在36之间。 具有酸性，可以与碱成盐。l4、紫外吸收： 具有苯环，所以具有紫外吸收。l一一 FeCl3反应OHCOOH弱酸性中性orFeCl3COO-O-2Fe3Fe 紫色第二节鉴别试验第二节鉴别试验1.水杨酸及其盐水杨酸及其盐OCOCH3COOHH2OCOO

3、HOHCH3COOH+OHCOOH弱酸性中性orFeCl3COO-O-2Fe3Fe阿司匹林阿司匹林l2. 苯甲酸的碱性水溶液或中性溶液与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色 l 沉淀。l苯甲酸钠苯甲酸钠+ FeCl3+H2O l赭色沉淀赭色沉淀+NaCl+2Cl- 3.丙磺舒加少量的氢氧化钠试液使生成钠盐后.在PH约.0-6.0水溶液中与三氯化铁试液反应，即生成米黄色沉淀 米黄色钠盐丙磺舒3 0 . 60 . 5FeClpHNaOH布洛芬的无水乙醇溶液，加入高氯酸羟胺无水乙醇试液及N,N-双环己基羧二亚胺（DCC）无水乙醇试液，混合后，在温水中加热20分钟冷却后，加高氯酸铁无水乙醇溶液，即呈紫

4、色JP(15)的方法l二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应 具有芳伯氨基芳伯氨基结构的药物，如对氨基水杨酸钠等，在盐酸酸性溶液中，与亚硝酸钠试液发生重氮化反应，生成重氮盐，与碱性-萘酚偶合产生橙红色沉淀。这一反应称为重重氮化氮化-偶合反应偶合反应。具芳伯氨基或潜在芳伯氨基具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物的药物 ArNH2HClNaNO2重氮盐橙黄猩红色萘酚OH- NH2Rl 直接：对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠、盐酸普鲁卡、盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺 l 间接：贝诺酯贝诺酯 、l对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、对乙酰氨基酚（扑热息痛）、醋氨苯砜、l甲酚

5、那酸加硫酸溶解后，与重铬酸钾试液反应，即呈黄色，随即变成棕绿色。l甲酚那酸溶于硫酸后，加热，则溶液呈黄色，并产生绿色荧光JP(15)方法三氧化反应三氧化反应四水解反应四水解反应COOHOCOCH3+ Na2CO3COONaOH+ CH3COONa+ CO22COONaOH+ H2SO42 COOHOH+ Na2SO42CH3COONa + H2SO42 CH3COOH+Na2SO4醋酸臭气）水杨酸（白色醋酸钠水杨酸钠阿司匹林硫酸 CONa32可溶于醋酸铵（测定熔点），水杨酸白色双水杨酯稀盐酸NaOH 五、分解产物的反应 苯甲酸盐 苯甲酸苯甲酸钠42SOH243SOHNO酚磺乙胺 24HNO32

6、SOSONaNaOH3丙磺舒五、紫外光谱法紫外光谱法丙磺舒：丙磺舒：225nm和和249nm 下有最大吸收。下有最大吸收。甲酚那酸：甲酚那酸：279nm和和350nm处有最大吸收。处有最大吸收。二氟尼柳二氟尼柳贝诺酯贝诺酯布洛芬布洛芬氯贝丁酯氯贝丁酯六、红外光谱法六、红外光谱法l苯甲酸、丙磺舒、甲酚那酸苯甲酸、丙磺舒、甲酚那酸l水杨酸、阿司匹林、对氨基水杨酸钠等水杨酸、阿司匹林、对氨基水杨酸钠等l布洛芬、氯贝丁酯布洛芬、氯贝丁酯七、薄层层析法七、薄层层析法八、高效液相色谱法八、高效液相色谱法l 阿司匹林阿司匹林一、阿司匹林中特殊杂质的检查一、阿司匹林中特殊杂质的检查1、 炽灼残渣2、 重金属3

7、、溶液的澄清度 检查碳酸钠试液中不溶物，主要有：酚类（如苯酚） 醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯 原理：杂质在碳酸钠试液中不溶，而阿司匹林溶于碳酸钠试液。4、水杨酸、水杨酸来源：生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。原理：阿司匹林无酚羟基，不与高铁反应。 水杨酸有酚羟基，与高铁反应生成紫堇色5、易碳化物二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查杂质来源:未反应完全的原料间氨基酚 遇热受潮生成间氨基酚,再 被氧化成二苯醌型化合物检查方法: 双相滴定法(ChP2005) P140 HPLC(USP29)间氨基酚间氨基酚不仅导致变色，且有毒性，不超过0.25%。三

8、二氟尼柳中有关物质的检查三二氟尼柳中有关物质的检查 中国药典中国药典2005：薄层色谱法和反相高效液相色：薄层色谱法和反相高效液相色谱法谱法 美国美国USP（29）：薄层色谱法检查单个杂质不）：薄层色谱法检查单个杂质不能超过能超过0.2%，同时检查，同时检查“有机挥发性杂质有机挥发性杂质”和和“残留溶剂残留溶剂”四甲芬那酸中特殊杂质的检查四甲芬那酸中特殊杂质的检查l1、“干燥失重干燥失重”；l2、“灼烧残渣灼烧残渣”；l3、“铜盐铜盐”检查：分光光度法、原子吸检查：分光光度法、原子吸收分光光度法；收分光光度法；l4、有关物质检查：薄层色谱法、有关物质检查：薄层色谱法五氯贝丁酯中特殊杂质的检查五

9、氯贝丁酯中特殊杂质的检查l氯贝丁酯以对氯酚为原料，同时，分解也可以氯贝丁酯以对氯酚为原料，同时，分解也可以产生对氯酚。对氯酚毒性极大，各国药典均检产生对氯酚。对氯酚毒性极大，各国药典均检查查对氯酚对氯酚。l检查方法：检查方法：l1、气相色谱法、气相色谱法l2、高效液相色谱法、高效液相色谱法第四节含量测定第四节含量测定一、一、酸碱滴定法酸碱滴定法（一） 直接滴定法 原理：阿司匹林具有游离羧基，呈酸 性，以标准碱滴定液直接滴定。 方法: 取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇(对酚酞指示液显中性) 20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)滴定。每1 ml的氢氧化钠滴

10、定液(0.1 mol/L)相当于18.02的C9H8O4。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（1）测定方法及计算 Ka=3.2710-4 反应摩尔比为1 1 （2）讨论 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言 优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定l（二）（二） 水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法l原理：阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解，加入定量过量的氢氧化钠滴定，加热使酯水解，剩余的碱用酸回滴。l需做空白试验校正.

11、l目的：NaOH在加热时易吸收CO2l用酸回滴定会消耗酸，影响结果。USP（29）方法：）方法： 取本品约取本品约1.5g，精密称定精密称定,加入氢氧化钠滴加入氢氧化钠滴定液（定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氢氧化钠，并将滴滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴的氢氧化钠滴定液（定液（0.5mol/l）相当于相当于45.04mg的的C9H8O4。 COOHOCOCH3+ 2NaOHCOONaOH+CH

12、3COONa2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O剩余滴定：水解： 反应摩尔比为反应摩尔比为1 2 优点：消除了酯键水解的干扰优点：消除了酯键水解的干扰 缺点：酸性杂质干扰缺点：酸性杂质干扰 羟苯乙酯含量测定亦可用此法羟苯乙酯含量测定亦可用此法 （三）（三）两步滴定法两步滴定法 -适用于阿司匹林片剂片剂稳定剂:酒石酸或枸橼酸分解产物:水杨酸和醋酸第一步:中和第二步:水解与测定 取本品取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林（约相当于阿司匹林0.3g），），置锥形瓶中，加中性乙置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇

13、使阿司匹林醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色。至溶液显粉红色。 再精密加再精密加氢氧化钠滴定液（氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）40m1，置置水浴上加热水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。白试验校正。每每lml的氢氧化钠滴定液（的氢氧化钠滴定液（0.1mo1/L）相相当于当于18.02mg的的C9H8O4。 COOHO

14、COCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O第一步 中和酒石酸枸橼酸水杨酸醋酸+NaOH钠盐+H2O第二步 水解后剩余滴定 水解： COONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量过量）2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O 反应摩尔比为1 1 本法消除了酸性杂质的干扰，降低了酯键水解的干扰 。剩余滴定： 也适合于氯贝丁酯：消除供试品中共存的酸性杂质 片剂含量测定结果的计算片剂含量测定结果的计算 %100/%100%片）标示量（）平均片重（）供试品重（）测得量（标示量每片含量标示量gggg剩余滴定法 %100%0标示量平均片重）（标示量smFVVT二、亚

15、硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基，能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量地发生重氮化，生成重氮盐.Cl-+22+2+ArNH2 NaNO2 HCl ArNN NaCl H2O 三、双相滴定法 - 苯甲酸钠 ChP(2005)COONa+HClCOOH+NaCl水乙醚溶剂：水乙醚 取本品取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水精密称定，置分液漏斗中，加水25m1、乙醚乙醚50ml及甲基指示液及甲基指示液2滴，用盐酸滴定液滴，用盐酸滴定液（0.5mo1/L）滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水分取水层

16、，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗涤，洗液并入锥形瓶中洗液并入锥形瓶中,加乙醚加乙醚20m1，继续用盐酸滴定液继续用盐酸滴定液0.5mo1/L)滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙红色。每红色。每1ml的盐酸滴定液（的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于相当于72.06mg的的C7H5NaO2。 乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中乙醚的作用：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底。的中和反应进行到底。滴定中要强力振摇。滴定中要强力振摇。 随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应

17、完全，终点清晰。机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。优点：消除了反应产物的干扰优点：消除了反应产物的干扰四四、紫外分光光度法、紫外分光光度法1. 直接紫外分光光度法直接紫外分光光度法酚磺乙胺注射液酚磺乙胺注射液 ChP（2005） 精密量取本品适量（约相当于酚磺乙胺精密量取本品适量（约相当于酚磺乙胺0.25g），），置置200ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取摇匀，精密量取2m1，置置100ml量瓶中，用乙量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。在醇稀释至刻度，摇匀。在1cm吸收池中，以溶吸收池中，以溶剂为空白，于剂为空白，于305nm的波长处测定吸收度，按的波长处

18、测定吸收度，按C10H17NO5S的吸收系数（的吸收系数（ ）为为159计算含量。计算含量。 %11cmE注射液含量测定结果的计算注射液含量测定结果的计算%100%标示实测标示量cc紫外分光光度法 吸收系数法 %100100%11标示标示量cnlEAcm2. 过滤后的紫外分光光度法过滤后的紫外分光光度法 丙磺舒片丙磺舒片 取本品取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙磺舒（约相当于丙磺舒60mg），），置置200m1量瓶中，加乙量瓶中，加乙醇醇150ml与盐酸溶液（与盐酸溶液（9100）4m1，置置70水浴上水浴上加热加热30min，放冷，用乙醇稀

19、释至刻度，摇匀，滤过，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置置100ml量瓶中，量瓶中，加盐酸溶液（加盐酸溶液（9100）2m1，用乙醇稀释至刻度，摇用乙醇稀释至刻度，摇匀。于匀。于1cm吸收池中，以溶剂为空白，在吸收池中，以溶剂为空白，在249nm的波的波长处测定吸收度，按长处测定吸收度，按C13H19NO4S的吸收系数（的吸收系数（ ）为为338计算。计算。%11cmE紫外分光光度法 吸收系数法 %100100%11标示量平均片重标示量scmmVnlEA（二）、离子交换（二）、离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法 氯贝丁酯氯贝丁

20、酯 强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，对照法定量测定氯贝丁酯含量（对照法定量测定氯贝丁酯含量（USP29）. P150（三）、柱分配色谱（三）、柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法USP（29）阿司匹林胶囊）阿司匹林胶囊 可同时定量测定阿司可同时定量测定阿司匹林和水杨酸匹林和水杨酸（1）水杨酸的限量测定）水杨酸的限量测定固定相：固定相：FeCl3 SA保留，冰醋酸洗脱，保留，冰醋酸洗脱，306nm测测水杨酸的量水杨酸的量（2）阿司匹林含量测定）阿司匹林含量测定固定相：固定相：NaHCO3 AAS、SA保留保留冰醋酸洗脱，冰醋酸洗脱，280nm测总量测总量原料药 对照法 %100smVnAAc对供对百分含量五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法 阿司匹林胶囊、泡腾片、栓剂的含量测定阿司匹林胶囊、泡腾片、栓剂的含量测定ChP（2005） 离子抑制色谱法离子抑制色谱法 内标法定量内标法定量色谱条件：填充剂色谱条件：填充剂C18、流动相：甲醇：、流动相：甲醇：1%冰醋酸、冰醋酸、检测波长检测波长280nm系统适应性实验：系统适应性实验：测定法：测定法：第五节第五节 体内药物分析体内药物分析