第四章植物胚胎培养及离体授粉2014

1、 植物胚胎培养植物胚胎培养指对植物胚、子房、胚珠、胚乳进行离体培养，指对植物胚、子房、胚珠、胚乳进行离体培养，使其发育成使其发育成完整植株完整植株的培养方式。的培养方式。第四章第四章 植物胚胎培养及离体授粉植物胚胎培养及离体授粉一、胚培养的意义（应用）一、胚培养的意义（应用）1. 促使促使发育不良和中途败育发育不良和中途败育的胚发育成熟（胚抢救）的胚发育成熟（胚抢救）高等植物的种间和属间进行高等植物的种间和属间进行远缘杂交远缘杂交时，时， 由由胚乳发育不良胚乳发育不良使杂种胚的败育。使杂种胚的败育。 可以建立胚胎培养，可以建立胚胎培养， 在人工培养基上供应与在人工培养基上供应与胚乳成分类似胚乳

2、成分类似的外源营养，以保证胚的正常发育。的外源营养，以保证胚的正常发育。2. 打破休眠期打破休眠期促使萌发促使萌发胚培养可以胚培养可以克服种子发育上的障碍克服种子发育上的障碍和和促进胚的生长促进胚的生长， 提高发芽率、缩短育种周期或加速良种繁育。提高发芽率、缩短育种周期或加速良种繁育。第一节第一节 胚培养胚培养3. 克服多胚品种克服多胚品种珠心胚的干扰珠心胚的干扰 仙人掌、仙人掌、柑橘柑橘等，除正常等，除正常有性胚有性胚外，还配以从外，还配以从珠心组织珠心组织发生多个不定胚。发生多个不定胚。 这些不定胚常常侵入胚囊，使这些不定胚常常侵入胚囊，使合子胚发育受阻合子胚发育受阻，影响了育种效率。，影

3、响了育种效率。4. 快速繁殖良种砧木快速繁殖良种砧木 可以产生大量的可以产生大量的次生胚次生胚，加速良种砧木的繁殖；，加速良种砧木的繁殖； 而且胚胎发生技术是而且胚胎发生技术是人工种子人工种子的重要基础。的重要基础。5. 诱导胚性愈伤组织诱导胚性愈伤组织 利用利用幼胚幼胚或或胚轴胚轴，珠心组织珠心组织等外植体，培养产生等外植体，培养产生胚性愈伤组织胚性愈伤组织， 为细胞悬浮培养、原生质体分离、融合，或遗传转化提供很好的为细胞悬浮培养、原生质体分离、融合，或遗传转化提供很好的材料材料。 6. 种子生活力的测定种子生活力的测定 测定测定休眠的种子休眠的种子生活力，应用一般的萌发试验需时间很长，生活

4、力，应用一般的萌发试验需时间很长， 要预先进行要预先进行后熟处理。后熟处理。 离体培养时间短离体培养时间短。 7. 稀有植物的繁殖稀有植物的繁殖 芭碧蕉芭碧蕉是商品香蕉的一个野生亲缘物种，其是商品香蕉的一个野生亲缘物种，其种子种子在在自然条件自然条件下下不能萌发不能萌发， 然而通过然而通过离体胚的培养离体胚的培养很容易产生幼苗。很容易产生幼苗。作为一种作为一种异常异常现象，有些现象，有些椰子椰子不能产生不能产生液体胚乳液体胚乳，而是一种，而是一种肥厚的组织肥厚的组织。 由于十分罕见，价格非常由于十分罕见，价格非常昂贵昂贵，在菲律宾只有盛大宴会才供应这种果实，在菲律宾只有盛大宴会才供应这种果实，

5、 这种椰子的这种椰子的种子种子也只能通过也只能通过离体培养离体培养才能萌发。才能萌发。此外此外，通过胚胎培养，通过胚胎培养，探讨胚胎发育的机制、探讨胚胎发育的机制、开展人工受精、开展人工受精、以及胚与胚乳的相互关系以及胚与胚乳的相互关系等等基础研究基础研究。杜鹃杜鹃种子种子1. 材料的消毒与接种材料的消毒与接种 种子种子95%酒精消毒酒精消毒选取完好种子选取完好种子70%酒精浸数酒精浸数S 0.1%升汞或升汞或10%次氯酸钠浸泡次氯酸钠浸泡无菌水冲洗无菌水冲洗 种子培养几天种子培养几天剥离种胚剥离种胚接种在培养基上。接种在培养基上。2. 培养基培养基 成熟胚是含有成熟胚是含有根原基根原基和和茎

6、原基茎原基以及以及1个或个或2个次生附属个次生附属子叶子叶， 培养时进一步发育产生根和茎，培养时进一步发育产生根和茎， 此时在营养上相对独立，只需要提供此时在营养上相对独立，只需要提供简单简单的的营养条件营养条件， 在含有在含有大量元素大量元素的无机盐和的无机盐和糖糖的培养基上即能生长。的培养基上即能生长。二、成熟胚的培养二、成熟胚的培养3. 种胚培养的外界条件种胚培养的外界条件 光照光照：黑暗黑暗。 温度：温度：25温度较适，温度较适， 但但有些材料有些材料的生长需要较高的温度，的生长需要较高的温度， 如如热带热带兰花的杂交种胚的培养，适于兰花的杂交种胚的培养，适于30温度；温度； 具有具有

7、休眠休眠习性的植物种胚，习性的植物种胚， 接种后先在接种后先在4温度下，培养一段时间，然后转入正常温度培养。温度下，培养一段时间，然后转入正常温度培养。固体固体培养培养 原胚指原胚指未成熟未成熟的幼胚。的幼胚。 其离体培养技术其离体培养技术难度较大难度较大， 越越早期早期的胚，培养越困难。的胚，培养越困难。 其分离需在其分离需在显微镜显微镜下进行。下进行。 Hanning早在早在1904年就培养了萝卜和辣根菜的年就培养了萝卜和辣根菜的胚胚， 发现离体胚可以发现离体胚可以充分发育充分发育， 并且并且提前萌发提前萌发形成小苗，形成小苗， 这是世界上这是世界上胚培养最早胚培养最早获得成功的一例。获得

8、成功的一例。三、原胚（幼胚）培养三、原胚（幼胚）培养幼胚则要求更幼胚则要求更复杂复杂的培养基。的培养基。除了一般的除了一般的无机盐无机盐成分外，还要加入成分外，还要加入微量元素微量元素和和生长辅助物质生长辅助物质，不同发育时期的幼胚对培养基成分要求不同，胚龄越小培养及成份越复杂。不同发育时期的幼胚对培养基成分要求不同，胚龄越小培养及成份越复杂。 对培养基对培养基营养营养的要求，认为的要求，认为无机氮无机氮是以硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐的形式供给，是以硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐的形式供给， 硝酸盐硝酸盐比铵盐好。比铵盐好。培养基的培养基的渗透压渗透压对幼胚的发育有密切的关系。对幼胚的发育有密切的关系。通

9、常培养基的渗透压用通常培养基的渗透压用蔗糖蔗糖调整，也可以用甘露醇，调整，也可以用甘露醇，用量在用量在812左右（甚至左右（甚至1818），），糖浓度过低还会引起胚早熟萌发糖浓度过低还会引起胚早熟萌发 幼胚不同发育时期对培养基幼胚不同发育时期对培养基渗透压渗透压要求不一。要求不一。 液体液体培养培养1. 基本培养基基本培养基（1）生长调节剂）生长调节剂 生长素与细胞分裂素生长素与细胞分裂素合理搭配合理搭配，才能控制胚性生长，促使胚发育成熟。，才能控制胚性生长，促使胚发育成熟。 添加生长调节剂添加生长调节剂不当不当，可能改变胚胎，可能改变胚胎发育发育的的方向方向， 转向脱分化而形成转向脱分化而形

10、成愈伤组织愈伤组织， 或引发或引发早熟萌发早熟萌发。（2）其他物质）其他物质 氨基酸：氨基酸：谷氨酰胺谷氨酰胺等；等； 维生素：必需。硫胺素、烟酸、维生素：必需。硫胺素、烟酸、泛酸泛酸等；等； 附加物附加物：椰乳、香蕉、酵母提取物等天然有机物或活性炭。：椰乳、香蕉、酵母提取物等天然有机物或活性炭。2. 生长调节剂及其他附加物的影响生长调节剂及其他附加物的影响 多培养基多培养基培培养：养：外环，较简单的培养基；外环，较简单的培养基； 中央，较复杂的培养基中央，较复杂的培养基 - - 接种幼胚接种幼胚。 （异养（异养自养）自养） 胚乳看护胚乳看护培养：培养基周围放置同种或异种培养：培养基周围放置同

11、种或异种胚乳胚乳。胚柄胚柄的作用的作用位于胚根一端，对幼胚的位于胚根一端，对幼胚的存活存活是关键，显著是关键，显著刺激胚刺激胚的进一步发育。的进一步发育。3.培养方法培养方法4. 培养过程培养过程幼胚培养的幼胚培养的关键技术关键技术 取材时期取材时期 幼胚剥离幼胚剥离 培养条件的控制培养条件的控制 （是否需要特殊处理）（是否需要特殊处理） 成熟或未成熟成熟或未成熟子房子房70%酒精浸数酒精浸数S0.1%升汞或饱和漂白粉浸升汞或饱和漂白粉浸10-30min 无菌水冲洗无菌水冲洗剖出胚珠剖出胚珠取出取出完整胚完整胚接种在培养基上。接种在培养基上。 一般采用一般采用液体液体培养法。培养法。 培养条件

12、：培养条件： 20-30，2000Lx，10-14hr1）按）按正常胚胎发育途径正常胚胎发育途径形成植株（维持胚性生长）形成植株（维持胚性生长）2）胚胎）胚胎脱分化脱分化形成愈伤组织形成愈伤组织 多数植物幼胚形成愈伤组织，多数植物幼胚形成愈伤组织，再分化再分化成胚状体或形成芽苗。成胚状体或形成芽苗。3）胚）胚“早熟萌发早熟萌发” 幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。 多数情况多数情况1个幼胚萌发成个幼胚萌发成1个植株；个植株； 有时因细胞分裂形成有时因细胞分裂形成许多胚状体许多胚状体，进而形成许多植株，即，进而形成许多植株，即丛生胚丛生胚现象。现象。 “早熟萌发早熟萌发

13、”产生产生畸形苗畸形苗，或瘦弱发育不正常而，或瘦弱发育不正常而死亡死亡。 这种畸形苗加以利用分离培养这种畸形苗加以利用分离培养变异体变异体，作为育种材料，作为育种材料.5. 幼胚培养的发育途径幼胚培养的发育途径胚乳培养的最早研究始于胚乳培养的最早研究始于1933年，年，Lampe和和Mills首例进行了首例进行了玉米玉米胚乳培养。胚乳培养。到目前为止，已有到目前为止，已有40多种植物的胚乳进行了培养。多种植物的胚乳进行了培养。其中苹果、柚、橙、檀香、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦、小黑麦、水稻、马铃其中苹果、柚、橙、檀香、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦、小黑麦、水稻、马铃薯、梨、核桃等近薯、梨、核桃等近2

14、0种植物的胚乳培养得到了种植物的胚乳培养得到了再生植株再生植株。其它有的分化出芽、根、叶等或得到愈伤组织。其它有的分化出芽、根、叶等或得到愈伤组织。 胚乳培养：将胚乳培养：将胚乳胚乳组织从母体上分离下来，通过离体培养，组织从母体上分离下来，通过离体培养， 使其发育成完整植株的技术。使其发育成完整植株的技术。 裸子植物裸子植物，胚乳胚乳是由雌配子体发育而成，是是由雌配子体发育而成，是单倍体单倍体。 被子植物被子植物，胚乳胚乳是双受精的产物，是是双受精的产物，是三倍体三倍体，因此可以获得，因此可以获得无籽果实无籽果实。第二节第二节 胚乳培养胚乳培养1.1.胚乳外植体的制备胚乳外植体的制备1 1）胚

15、乳较大胚乳较大块组织的种子，如大戟科和檀香科的植物，块组织的种子，如大戟科和檀香科的植物， 可直接将可直接将种子种子表面灭菌，无菌条件下表面灭菌，无菌条件下除去种皮除去种皮即可培养。即可培养。 2 2）带果实带果实的的种子种子（斛寄生类），（斛寄生类）， 取授粉几天后的取授粉几天后的幼果幼果，表面灭菌后，无菌条件下，表面灭菌后，无菌条件下切开幼果切开幼果， 取出种子，小心取出种子，小心分离出胚乳分离出胚乳，接种在培养基上。，接种在培养基上。 一、胚乳培养方法一、胚乳培养方法（1）愈伤组织诱导愈伤组织诱导 除除少数少数寄生或半寄生植物可寄生或半寄生植物可直接直接从胚乳中从胚乳中分化分化出器官，出

16、器官， 大部分大部分被子植物的胚乳，无论是未成熟的或成熟的，被子植物的胚乳，无论是未成熟的或成熟的， 都需要经历都需要经历愈伤组织阶段愈伤组织阶段，才能分化植株。，才能分化植株。 胚乳接种后的胚乳接种后的6-10天后，不断增生成天后，不断增生成乳白色团状乳白色团状，成为愈伤组织。，成为愈伤组织。2. 胚乳愈伤组织诱导及形态建成胚乳愈伤组织诱导及形态建成生长旺盛的愈伤组织应及时进行生长旺盛的愈伤组织应及时进行分化培养分化培养，此时，此时需光需光。胚乳愈伤组织诱导器官的形成也可通过胚乳愈伤组织诱导器官的形成也可通过器官发生器官发生和和胚胎发生胚胎发生2种途径来实现。种途径来实现。 通过通过胚胎发生

17、胚胎发生途径获得再生植株，最早的是途径获得再生植株，最早的是柑橘柑橘。 通过通过胚胎发生胚胎发生途径获得再生植株的植物有途径获得再生植株的植物有檀香、橙、桃、枣、核桃和猕猴桃等。檀香、橙、桃、枣、核桃和猕猴桃等。（2）形态建成）形态建成 （3） 3倍体后代的特征倍体后代的特征1）形态特征形态特征 由于被子植物的胚乳由于被子植物的胚乳是是3倍体，倍体， 因此，通过胚乳培养可得到因此，通过胚乳培养可得到3倍体倍体植株，产生植株，产生无籽果实无籽果实； 或由其加倍产生或由其加倍产生6倍体倍体植株。植株。 多倍体植株多倍体植株具有具有 粗壮、粗壮、 叶片大而肥厚、叶色浓、叶片大而肥厚、叶色浓、 花大或

18、重瓣、花大或重瓣、 果实果实大但大但结实率低结实率低的特征。的特征。 这些这些变异性状变异性状可直接利用或作为可直接利用或作为育种材料育种材料， 尤其在花卉和药用植物新品种选育方面尤其在花卉和药用植物新品种选育方面 往往有重要的利用价值。往往有重要的利用价值。 胚乳愈伤组织及再生植株的染色体数常常发生变化。胚乳愈伤组织及再生植株的染色体数常常发生变化。 如如苹果苹果（2n=34）胚乳植株根尖细胞）胚乳植株根尖细胞染色体数染色体数的分布范围是的分布范围是 29-56条，多数是条，多数是37-56条，条，3倍体细胞倍体细胞只占只占2%-3%。 同一植株是不同倍性细胞的同一植株是不同倍性细胞的嵌合体

19、嵌合体。 染色体染色体倍性混乱倍性混乱在胚乳培养中是相当在胚乳培养中是相当普遍普遍的。的。 但但有些有些植株胚乳培养，如核桃、檀香、橙和柚等，植株胚乳培养，如核桃、檀香、橙和柚等， 其其倍性倍性表现出相对的表现出相对的稳定稳定性，性， 这些植物的胚乳细胞往往也能长期保持这些植物的胚乳细胞往往也能长期保持器官的分化器官的分化能力。能力。2）胚乳再生植株的）胚乳再生植株的倍性倍性胚乳植株染色体数目的检查胚乳植株染色体数目的检查 取胚乳培养植株取胚乳培养植株根尖根尖、幼叶幼叶或或胚乳愈伤组织胚乳愈伤组织， 0.2-0.5%秋水仙素秋水仙素（或对二氯苯饱和溶液）（或对二氯苯饱和溶液）25下处理下处理4

20、-8h， 流水冲洗，流水冲洗， 卡洛氏液卡洛氏液或或FAA固定（福尔马林固定（福尔马林-酒精酒精-醋酸混合固定液），醋酸混合固定液）， 1mol盐酸，盐酸，60水浴下，水解水浴下，水解10min， 染色（染色（1%醋酸洋红，醋酸洋红，3-5min）、）、 压片（加压片（加1滴滴45%醋酸）、醋酸）、 观察。观察。 胚乳的胚乳的类型类型、胚乳愈伤组织发生的胚乳愈伤组织发生的部位部位、培养基中培养基中外源激素外源激素的种类和水平。的种类和水平。如猕猴桃来源于同一植株的胚乳，如猕猴桃来源于同一植株的胚乳，可以培养出可以培养出三倍体三倍体和和二倍体二倍体两种倍性的植株。两种倍性的植株。ZT 3.0mg

21、/L+NAA 0.5mg/L，愈伤组织再生，愈伤组织再生2倍体倍体植株；植株；ZT 3.0mg/L+2,4-D 1mg/L，愈伤组织再生，愈伤组织再生3倍体倍体植株；植株；影响胚乳培养细胞染色体稳定性的因素影响胚乳培养细胞染色体稳定性的因素1.1.培养基与培养条件培养基与培养条件（1）培养基）培养基 在胚乳培养中，常用的基本培养基有在胚乳培养中，常用的基本培养基有White、LS、MS、MT等，等， 其中以其中以MS使用最多。使用最多。 生长调节剂：生长调节剂：2,4-D、玉米素等；、玉米素等； 天然提取物：天然提取物：20%番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰乳、水解酪蛋白、番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰

22、乳、水解酪蛋白、 酵母提取物酵母提取物 促进促进胚乳培养；胚乳培养； 蔗糖：小麦蔗糖：小麦8%，枸杞，枸杞5%。（2）培养条件）培养条件 ph4.5-6.5；光照；光照10-12h；温度；温度24-26。二、影响胚乳培养的因素二、影响胚乳培养的因素胚乳培养中，胚乳培养中，通常有通常有带胚培养带胚培养和和不带胚培养不带胚培养两种方式。两种方式。带胚培养带胚培养胚乳比不带胚的胚乳组织胚乳比不带胚的胚乳组织容易容易形成愈伤组织。形成愈伤组织。当愈伤组织形成后，当愈伤组织形成后，除去胚除去胚并不影响胚乳组织的增殖。并不影响胚乳组织的增殖。2. 胚胚在胚乳培养中的作用在胚乳培养中的作用 被子植物胚乳的发

23、生方式分为被子植物胚乳的发生方式分为 核型核型（精核与极核受精后，只以（精核与极核受精后，只以核的分裂核的分裂方式增殖）、方式增殖）、 细胞型细胞型（精核与极核受精后，以（精核与极核受精后，以细胞分裂细胞分裂方式增殖）、方式增殖）、 有的精核与极核受精后，有有的精核与极核受精后，有核核分裂和分裂和细胞细胞分裂两种方式分裂两种方式混生增殖混生增殖。 不论胚乳属于核型或细胞型，不论胚乳属于核型或细胞型， 处于发育处于发育早期早期的胚乳，其愈伤组织的胚乳，其愈伤组织诱导率较低诱导率较低。 旺盛生长期是取材的最佳时期。旺盛生长期是取材的最佳时期。 几种植物胚乳培养的最佳时间（授粉后天数）几种植物胚乳培

24、养的最佳时间（授粉后天数） 大麦大麦1012天；黄瓜天；黄瓜716天；小黑麦天；小黑麦 714天。天。3. 胚乳发育类型和发育程度胚乳发育类型和发育程度培养胚乳的培养胚乳的首要目的首要目的是为了直接获得是为了直接获得三倍体植株三倍体植株。三倍体三倍体六倍体六倍体生产；生产；倍性多样性倍性多样性筛选非整倍体植株；筛选非整倍体植株；杂种杂种胚乳胚乳附加系和代换系附加系和代换系遗传育种。遗传育种。 自自1965年以来，许多植物通过胚乳培养获得了年以来，许多植物通过胚乳培养获得了3倍倍体幼苗和植株。体幼苗和植株。 但但被子植物被子植物中，培养的胚乳细胞以及得到的胚乳植株，中，培养的胚乳细胞以及得到的胚

25、乳植株， 并并不都是不都是三倍体。三倍体。三、三、 胚乳培养的应用胚乳培养的应用附加系：正常染色体组附加系：正常染色体组添加添加了了1或多条或多条亲缘种染色体的品系。亲缘种染色体的品系。代换系：正常染色体被异源种属的代换系：正常染色体被异源种属的1条或条或1对对染色体染色体代换代换后所形成的品系。后所形成的品系。 一、胚珠培养一、胚珠培养胚珠胚珠是种子植物的大孢子囊，是种子植物的大孢子囊，是孕育雌配子体的是孕育雌配子体的场所场所，也是，也是种子种子形成的前身。形成的前身。 分为受精胚珠和未受精胚珠。分为受精胚珠和未受精胚珠。将将胚珠胚珠从母株中分离出来，从母株中分离出来，放在无菌的人工环境条件

26、下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以致形成让其进一步生长发育，以致形成幼苗幼苗的过程。的过程。第三节第三节 胚珠和子房培养胚珠和子房培养（1）材料的选择和灭菌）材料的选择和灭菌 培养培养受精受精胚珠，摘取授粉时间合适的子房，胚珠，摘取授粉时间合适的子房， 如培养如培养未受精未受精胚珠，则在授粉前摘取子房。胚珠，则在授粉前摘取子房。 子房子房表面灭菌表面灭菌 剖开子房壁，取出剖开子房壁，取出胚珠胚珠或或带胚珠的胎座带胚珠的胎座接种。接种。（2）培养基对胚珠培养的影响）培养基对胚珠培养的影响 培养基多为培养基多为White、Nitsch、MS等，等， Nitsch使用更普遍。使用更

27、普遍。1. 培养方法培养方法（3）胎座胎座和和子房子房对胚珠培养的影响对胚珠培养的影响 带有胎座和子房带有胎座和子房 对胚珠早期发育对胚珠早期发育起重要作用起重要作用。（4）胚发育时期的影响）胚发育时期的影响 合子合子和和原胚期原胚期的胚珠的胚珠较难较难剥取和培养，剥取和培养， 对培养基的成分要求严格。对培养基的成分要求严格。原胚期：原胚期：合子不均等横向分裂形成顶细胞和基细胞，合子不均等横向分裂形成顶细胞和基细胞， 分别进行纵向和横向分裂，形成分别进行纵向和横向分裂，形成4个细胞的原胚。个细胞的原胚。2. 培养条件培养条件 固体固体培养基培养基 室温室温26， 50-60%相对湿度，相对湿度

28、， 光照光照18hr。3. 受精胚珠的发育受精胚珠的发育 胚珠胚珠种子种子 胚珠胚珠愈伤组织愈伤组织将将子房子房从母株上摘下，从母株上摘下，放在无菌的人工环境条件下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长让其进一步生长发育，以至形成发育，以至形成幼苗幼苗的过程。的过程。子房是子房是雌蕊基部雌蕊基部膨大的部分，膨大的部分，由子房壁、胎座和胚珠组成。由子房壁、胎座和胚珠组成。根据培养的子房是否授粉分为根据培养的子房是否授粉分为 授粉授粉子房、子房、 未授粉未授粉子房。子房。二、子房培养二、子房培养1. 子房的获取子房的获取 未授粉未授粉子房在子房在开花前开花前1-5天摘取子房，天摘取子房， 授粉

29、授粉子房在授粉后摘取子房。子房在授粉后摘取子房。 灭菌灭菌 禾谷类禾谷类幼穗幼穗表面用表面用70%酒精酒精擦拭即可，擦拭即可， 双子叶双子叶花蕾漂白粉液花蕾漂白粉液灭菌，灭菌， 其他植株其他植株暴露暴露的子房须的子房须严格消毒严格消毒，无菌滤纸吸干。，无菌滤纸吸干。 拨开幼花，子房接种到培养基上。拨开幼花，子房接种到培养基上。（一）子房培养的过程（一）子房培养的过程固体和液体培养基固体和液体培养基均可均可，26，50-60%相对湿度，相对湿度，光照光照16h。 N6、MS、BN培养基。培养基。2. .子房的培养子房的培养（二）培养子房的发育（二）培养子房的发育 子房子房性细胞性细胞愈伤组织或胚

30、状体愈伤组织或胚状体单倍体单倍体植株植株 子房子房体细胞体细胞愈伤组织或胚状体愈伤组织或胚状体二倍体二倍体植株植株 1. 胚珠胚珠 受精胚珠培养目的受精胚珠培养目的打破打破种子的种子的休眠休眠； 挽救胚挽救胚的发育以获得杂交种。的发育以获得杂交种。 未受精胚珠培养目的未受精胚珠培养目的获得获得单倍体单倍体细胞发育而来的植株。细胞发育而来的植株。2. 子房子房 授粉子房培养目的授粉子房培养目的挽救挽救子房内子房内杂种胚杂种胚的发育。的发育。 未授粉子房培养目的未授粉子房培养目的获得获得单倍体单倍体植株；植株； 试管受精试管受精解决杂交育种中解决杂交育种中不亲和不亲和问题。问题。三、胚珠和子房培养

31、的应用三、胚珠和子房培养的应用远缘杂交中远缘杂交中, , 受精前的障碍受精前的障碍如如花粉花粉在柱头上在柱头上不能萌发不能萌发；花粉管花粉管生长受抑制生长受抑制而不能进入胚珠，而不能进入胚珠，其原因是其原因是花柱太长花柱太长或花粉管或花粉管生长缓慢生长缓慢。 受精后的障碍受精后的障碍胚和胚乳之间的胚和胚乳之间的不亲和不亲和, ,或或胚乳胚乳发育不良，杂种发育不成熟。发育不良，杂种发育不成熟。第四节第四节 植物离体授粉植物离体授粉 （pollination in vitro） 离体授粉离体授粉 将未授粉的将未授粉的胚珠胚珠或或子房子房从母体上分离下来，进行无菌培养，从母体上分离下来，进行无菌培养

32、， 并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术， 所以又称所以又称离体受精离体受精（fertilization in vitro）。）。1. 离体离体柱头柱头授粉授粉 指通过指通过雌蕊雌蕊的离体培养，使无菌花粉授于的离体培养，使无菌花粉授于柱头柱头上，上， 得到含有可育的种子和果实的技术。得到含有可育的种子和果实的技术。 是一种接近于自然授粉的试管授精技术。是一种接近于自然授粉的试管授精技术。2. 离体离体子房子房授粉授粉 通过人工方法将花粉直接通过人工方法将花粉直接引入子房引入子房， 使花粉粒在使花粉粒在子房腔内萌发子房腔内萌发，并进行正常受精，并进行正常受精， 最后获得具有生活力的种子，又称为最后获得具有生活力的种子，又称为子房内授粉子房内授粉。一、离体授粉的类型一、离体授粉的类型 3 是指离体培养是指离体培养未受精的胚珠未受精的胚珠，并在胚珠上授粉，并在胚珠上授粉， 最终在试管内结出正常种子的技术。最终在试管内结出正常种子的技术。 离体胚珠授粉既可以将胎座上切下的离体胚珠授粉既可以将胎座上切下的单个胚珠单个胚珠（裸露的胚珠）接种在培养（裸露的胚珠）接种在培养基上，然后撒播花粉与胚珠表面，实现受精；基上，然后撒播