水仙组织培养方案

1、水仙组织培养方案实验目的：了解植物组织培养的概念，认识植物组织培养的特点和类型；了 解植物组织培养技术在现代经济发展中的应用。实验原理：植物组织培养的理论依据是植物细胞具有全能性，所谓细胞全能 型是指植物体任何一个细胞都携带者一套能发育成完整植株的全部 遗传信息。在立体培养的情况下，这些信息可以表达，产生出完整的 植株。一些已经分化的细胞可以通过脱分化产生愈伤组织。该组织是 一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，经过进一步分化培 养，则可生出完整的小植株。实验步骤：1、接种选取一年生或两年生鳞茎为材料，去掉干枯鳞叶与鳞茎盘，在相对无 菌的条件下层剥鳞叶，再把鳞叶切掉4/5,仅留鳞叶基部及相

2、连的部 分鳞茎盘，最后纵切成长约2mm,宽约1mm的组织块直接接种于培养 基上。每支试管接种两块，置培养箱培养。2、诱导愈伤组织用鳞叶基部作为外植体诱导愈伤组织，在上述MS培养基中加入10mg/mL 6-BAP和0.1 mg/mL 2.4D，两周后形成愈伤组织。我们通常配制1L的MS诱导愈伤培养基中加入30g蔗糖，12g琼脂， 800uL 1M NaOH 调节 pH 至 5.8 左右，加入 800 uL 6-BAP 和 80UL2.4D，分装20瓶，高压灭菌20min，冷却凝固后放置1-2天， 无污染出现后即可使用。将组织块、愈伤诱导培养基、镊子和刀片、 酒精瓶（泡镊子）、大培养皿和废液瓶等全

3、部放入超净台灭菌20min， 开始进入超净台进行如下操作：（1）首先将组织块切至培养皿的滤纸中，将组织块四周的边缘全部 切去以造成愈伤，将愈伤的组织块分别切成小片（大小3-5mm左右）。（2）然后将配制的诱导培养基中残余的水分倒掉，再分别用镊子将 组织块接种至培养基中，注意要将叶背面和培养基充分接触，用镊子 轻摁一下，防止掉落，每瓶接6-8个左右。为了减少污染，建议每接 两瓶更换一次滤纸，操作人员勿离开超净台，直至将组织块全部接至 愈伤诱导培养基中。3、愈伤组织继代将诱导的愈伤组织继代两次，两周后进行取样。继代两次的主要原因 是将愈伤组织中残留的鳞叶切除干净，继代两次后的愈伤组织完全不 含有鳞

4、叶且大小合适取样。配制1L的MS愈伤组织继代培养基中加入30g蔗糖，12g琼脂，800uL 1M NaOH调节 pH 至 5.8 左右，加入 800 uL 6-BAP和 80uL2.4D，分装 20瓶，高压灭菌20min，冷却凝固后放置1-2天，无污染出现后即可 使用。将长出愈伤组织的鳞叶、愈伤组织继代培养基、镊子和刀片、 酒精瓶（泡镊子）、大培养皿和废液瓶等全部放入超净台灭菌20min, 开始进入超净台进行如下操作：首先将4瓶长出愈伤组织的鳞叶用镊子夹入培养皿的滤纸中，然后用 刀将愈伤组织切下来移至滤纸中干净的地方，待4瓶愈伤组织全部切 完后，将继代培养基打开倒出培养基中残余的水分，用镊子将切好的 愈伤组织接入培养基中，插入深度不宜过深，以愈伤组织大小的三分 之一左右为宜，每瓶接6个左右。每接好4瓶（长出愈伤组织的鳞叶） 更换一次滤纸，为了减少污染，操作人员勿离