动物细胞工程0222

1、专题(zhunt)2.2动物细胞工程共七十一页动物(dngw)细胞培养动物(dngw)细胞融合单克隆抗体制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础共七十一页2.2.1动物(dngw)细胞培养和核移植技术共七十一页动物(dngw)细胞培养共七十一页（一）、概念(ginin) 是指从动物机体内取出相关(xinggun)的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖动物细胞培养共七十一页（三）、过程(guchng)幼龄动物剪碎组织原代细胞培养取动物器官和组织细胞悬浮液传代细胞培养胰蛋白酶处理单个细胞胰蛋白酶处理单个细胞动物(dngw)细胞培养

2、共七十一页细胞(xbo)贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.共七十一页细胞(xbo)接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个(y )单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。共七十一页有关(yugun)概念原代培养：即第一次培养，从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上(yshng)的培养瓶中继续培养，称为传代培养。共七十一页归纳(gun)过程取 的组织(zzh)、器官细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞单个细胞加入 液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原

3、代 培养(分装前)1-10代细胞共七十一页遗传物质 改变原代细胞培养(piyng)加 液4050代细胞(xbo)(细胞株)未遗传物质 改变无限传代（细胞系）已传代培养胰蛋白 酶 共七十一页思考题：1、为什么选用动物胚胎(piti)或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养(piyng)前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。共七十一页3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞(xbo)间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质(wzh)主要是蛋白质(胶原蛋

4、白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能共七十一页6、既然胰蛋白酶(y dn bi mi)能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替(dit)胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近共七十一页1、无菌、无毒的环境(hunjng) 保证(bozhng)细胞顺利的生长增殖 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清血浆等。（四）、动物细胞培养的条件2、营养共七十一页3、温度(wnd)和P

5、H 培养(piyng)室中控制,使之达到36.5 0.5, 7.27.4培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）4、气体环境：共七十一页（五）、动物细胞培养技术(jsh)的应用（3）细胞(xbo)的生理、药理、病理研究 （1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（2） 基因工程的受体细胞共七十一页植物组织培养和动物(dngw)细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的 细胞培养基特有成分 、植物激素葡萄糖、 培养结果植物体培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得全能性增殖(zngzh)蔗糖动物血清细胞株、细胞系细胞,某些蛋白质共七十一页前景(qinjng)展望资料(zli

6、o)一：共七十一页 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异(biny)。根据变异(biny)细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 资料(zlio)二：共七十一页动物体细胞核移植技术(jsh)和克隆动物共七十一页（一）、动物(dngw)细胞核移植的概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育(fy)成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物：用核移植的方法得到的动物。共七十一页动物核移植是将

7、动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉(q dio)细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体共七十一页（二）、分类(fn li)：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度(chngd)低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性困难克隆动物:用核移植方法得到的动物.克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。 共七十一页共七十一页共七十一页去核卵母细胞供体细胞(xbo)电刺激使两细胞融合重组(zhn z)细胞重组胚胎新个体代孕母

8、牛C胚胎移植卵母细胞培养无性生殖（三）、体细胞的核移植过程高产奶牛A供体细胞培养供卵奶牛B共七十一页（四）、体细胞核移植技术的应用(yngyng)前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传(ychun)改良的进程2、保护濒危物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体共七十一页（五）、体细胞核移植技术(jsh)存在的问题 1、克隆动物基因组重新编程的机制(jzh)尚不清楚。2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出 现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。共七十一页 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生(fshng)改变的细胞是 （ ） A获得不死性的细胞 B10代以内细胞 C原代细胞 D传代细胞

9、1、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎(piti)移植 D.动物细胞培养AD课堂反馈练习共七十一页3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C、细胞的癌变(i bin)发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变B共七十一页4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足(mnz)以下条件（ ）无毒的环境 无菌的环境 培养基需要加入血清 温度(wnd)与动物体温相似 需要O2，不需要CO2 CO2能调节培养液PHA、 B、 C

10、、 D、 D共七十一页5、动物细胞培养的特点(tdin) （ ）细胞贴壁 有丝分裂 细胞分化 接触抑制 减数分裂 原代培养一般传110代A、 B、C、 D、A共七十一页6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官(qgun)或组织。它一般取自_。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。动物胚胎(piti)或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养共七十一页（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡(swng)，这是培养到第

11、代，到这时的培养称为_ 。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。动物(dngw)血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬浮液共七十一页动物(dngw)细胞融合与单克隆抗体共七十一页1、概念(ginin)：略两个细胞正在融合 受精作用 两个(lin )或多个动物细胞要点： 一个细胞（杂交单核细胞）名词：“细胞杂交”与“杂交细胞”一、动物细胞融合共七十一页动物(dngw)细胞融合共七十一页细胞(xbo)A细胞(xbo)B杂交细胞灭活的病毒物理法化学法共七十一页细胞融合与融合诱导(yudo)细胞融合物质诱导(yudo)剂：病毒、聚乙二醇诱导(yudo)细胞融合的病毒必须灭活。思

12、考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？共七十一页共七十一页共七十一页共七十一页共七十一页共七十一页二、单克隆抗体(kngt)什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有(jyu)免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞产生抗体。共七十一页单克隆抗体(kngt) 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一(dny)、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、灵敏度高 共七十一页 单克隆抗体制备(zhbi)过程 注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选(shixun)杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、

13、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体共七十一页如何大量生产(shngchn)单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物(dngw)细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞共七十一页思考(sko)：1、本过程(guchng)利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体共七十一页单克隆抗体(kngt)的应用

14、与常规抗体(kngt)相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高。应用主要有：1、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。共七十一页共七十一页植物体细胞杂交和动物(dngw)细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融

15、合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒用途获得杂种植株制备单克隆抗体共七十一页 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产(shngchn)破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。1、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。制备(zhbi)单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培

16、养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC共七十一页右图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回 答：（1）这是细胞，它是由分化而来。（2）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的细胞结构顺序是（填标号）。抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有(jyu)。 并以的形式转变。效应(xioyng)BB细胞或记忆性B细胞一定的连续性 具膜小泡共七十一页（4）抗体的化学本质是，它能与发生特异性结合，发挥免疫效应。该过程属于免疫的阶段。（5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称(mngchng)为。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程的技术手段是。（3）在分泌抗体(kngt)时要消

17、耗由提供的能量。 线粒体球蛋白相应的抗原效应 体液杂交瘤细胞动物细胞融合、动物细胞培养共七十一页8.（2012山东卷）35（8分）【生物现代生物科技专题】毛角蛋白型中间丝（KIF）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。（）过程中最常用(chn yn)的运载工具是_，所需要的酶是限制酶和_。质粒DNA连接酶共七十一页（）在过程中，用_处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养(piyng)过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是_。（）在过成中，用_处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行_处理。胰蛋白酶(y

18、 dn bi mi)促性腺激素调节培养液pH去核共七十一页（）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_。在胚胎移植(yzh)前，通过_ 技术可获得较多胚胎。胚胎(piti)分割 早期胚胎培养共七十一页(选做题)人类在预防(yfng)与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图： (1)过程代表的是_。(2)过程构建A基因表达载体时，必须(bx)使用_和_两种工具酶。逆(反)转录DNA连接酶限制酶共七十一页请回答：(3)过程采用的实验技术是_，获得的X是_(4)对健康人进行该传染病免疫

19、预防时，可选用图中基因工程生产的_所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离(fnl)病毒，与已知病毒进行_ _比较；或用图中的_进行特异性结合检测。细胞融合杂交瘤细胞(xbo) 核酸(基因)序列A蛋白抗A蛋白的单克隆抗体共七十一页三维设计(shj) 最后一个大题2013海南生物）31单纯疱疹病毒I型(HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗HSV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。回答下列问题：(1)在制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_ _的抗体检测呈阳性(yngxng)，说明小鼠体内产生

20、了_ 反应，再从小鼠的_中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的_ 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_。HSV1蛋白 体液免疫 脾脏 骨髓瘤 无限增值且产生专一抗体 共七十一页(2)若要大量制备抗该蛋白(dnbi)的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_ 中使其增殖，再从_ 中提取、纯化获得。(3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-I蛋白，其原因是该抗体具有_ _和_ _等特性。 腹水(fshu) 腹腔 纯度高 特异性强 共七十一页1.动物细胞工程技术的基础(jch)是：（）A动物细胞融合B胚胎移植C动物细胞培养D核移植共七十一页在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的B杂种(zzhng)细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同共七十一页. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导(yudo)融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A BC D C共七十一页(2006年北京卷1题）以下不能说明细胞(xbo)全能性的 实验是A.胡萝卜韧皮