霉菌的培养与形态观察

1、姓名 系年级学号科目题目组别同组者：一、【目的要求】学习并掌握霉菌的形态观察法一一小室培养法；了解四类常见霉菌（青、根、毛、曲霉）的形态特征;巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。二、【实验原理】霉菌可产生分枝的菌丝体，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生 繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别 不同种类霉菌的重要依据（本次实验观察青霉、曲霉、根霉和毛霉菌四种霉菌）。霉菌菌丝 和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约3-10um），常是细菌菌体宽度的几倍至几十 倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有直接制片观察

2、法、载玻片培养观察法和玻璃培养观 察法三种方法，本次实验米用载玻片培养观察法（小室培养法）。载玻片培养观察法（小室培养法）：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后 盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定 时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态， 还便于观察不同发育期的培养物。三、【实验器材】菌种：曲霉，青霉，根霉和毛霉培养7d的马铃薯琼脂平板培养物培养基：马铃薯培养基（简称PDA）（配方见附表）仪器和其他用品：平皿，载玻片，盖玻片，无菌吸管，U型玻璃棒，解剖刀，镊子，50%乙醇，20%甘油， 显微镜，接种

3、环，酒精灯等四、【实验内容】配培养基:根据报告后附录准确称取实验所需各种物质的质量，配置PDA培养基150ml， 121C灭菌20分钟；培养小室的准备及灭菌：在八个平皿底部各铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再各放一个姓名系年级学号科目组别同组者:u形玻璃棒，其上各放一洁净载玻片和四块盖玻片，盖上平皿盖，加上两个空平皿，包 扎后于121C灭菌30分钟，烘干备用；琼脂薄片的制作：取己灭菌的马铃薯琼脂培养基分别注入两个灭菌平皿（事先在平皿底部画上1cm X 1cm或1.2cm X 1.2cm的方格）中，使之凝固成薄层。通过无菌操作，用 解剖刀将其切成小琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块

4、）;接种：通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子，接种于培养小室中琼 脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上，每个菌种接种两个平皿；培养：通过无菌操作，在培养小室中的圆滤纸上加3ml灭菌的20%的甘油（用于保持平 皿内的湿度），盖上皿盖，28 C正置培养一周；镜检：根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。 记录观察结果。注意事项：载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少；尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观 察。五、【实验结果】（1）四种霉菌形态特征对比菌种曲霉根霉毛霉青霉形态特征营养菌丝具有分 隔；气生菌丝

5、的 一部分形成长而 粗糙的分生孢子 梗，顶端膨大成 球状顶囊，表面 辐射出一层或两 层小梗，小梗上 着生成串的球形 分生孢子。分生 孢子梗生于足细 胞上，并通过足 细胞与营养国丝 相连。菌丝无隔、多核、 分枝状，有匍匐 菌丝和假根。在 假根的上方直立 地生长出一至数 根孢囊梗，其顶 端膨大成球形孢 子囊。囊的基部 有囊托，中间有 球形或半球形囊 轴。囊内产大量 孢囊孢子，有性 生殖时由不同性 别的菌丝或匍匐 菌丝上生出配子 囊，配子囊双双 异宗配合形成一 接合孢子。菌丝无隔、多核、 分枝状，无假根 或匍匐菌丝。菌 丝体上直接生出 单生、总状分枝 或假轴状分枝的 孢囊梗。各分枝 顶端着生球形孢

6、子囊，无囊托。菌丝有横隔， 分生孢子梗亦 有横隔，光滑 或粗糙。基部 无足细胞，顶 端不形成膨大 的顶囊，其分 生孢子梗经过 多次分枝，产 生几轮对称或 不对称的小 梗，形如扫帚， 称为帚状体。 小梗顶端有孢 子。姓名科目系年级学号题目组别同组者：（2）显微镜下四种霉菌形态对比:根霉菌（10X40）毛霉菌（10X40）曲霉菌（10X10）姓名科目系年级学号题目组别同组者：曲霉菌足细胞放大（10X40）结果分析：显微镜下都能观察到四种霉菌的菌丝体和孢子，且四种霉菌的形态对比非常明显， 霉菌培养结果较好。六、【思考题】1.黑根霉和黑曲霉在形态特征上有何区别？答：黑曲霉的营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大 成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生 于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连；而黑根霉菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数 根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。囊内产 大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配 合形成接合孢子。七、【附表】姓名科目系年级学号题目组别同组者：