药学专业开题报告

1、药学专业开题报告福建中医药大学药学院本科毕业研究课题开题报告课题名称:连花解毒颗粒急性毒性及解热实验研究级:07药学林波波学生姓名:导师所在单位:南京军区福州总医院药学科研究方向:药理实验研究导师姓名:周欣陈旭职称/职务:主管药师药师课题研究起止时间:20年1月至20_年5月11日填表时间：20年1月23日本计划由学生本人在向导师小组作过开题报告后填写,式一份，最后经系（院）及实习单位批准后，留系部存 档。开题报告一般要求在课题研究前完成。计划批准后不得随意更改。第1页共10页在课题执行过程中导师检查两次。检查情况及变动情况应 记录在表内。一课题研究的目的与意义、国内外研究的发展概况和趋 势1

2、课题研究的目的与意义连花解毒颗粒由金银花、牛菊子、芦根等多味中药提取制 成，该处方是我院中医科专家长期在临床使用的验方，具有清 热解毒，凉血利咽，宣肺化痰，止咳平喘的功效。临床适用于 风热感冒，温病初起，流感、上呼吸道感染、咽炎、支气管 炎、腮腺炎、斑疹等病症治疗 1 -5 o中医理论认为：由于风热之邪犯表，则热郁肌肤月奏理，卫 表失和，故见身热较著，微恶风，汗泄不畅等症；风热上扰则 头胀痛；风热之邪上犯则咽燥或咽喉红肿疼痛，口渴欲饮、鼻 塞、流黄浊涕。中医的“毒”含义甚广，清热解毒中药所解之 的“毒”为火热壅盛所致的“热毒”及“火毒”，主要用于温 热病及热毒炽盛症。随着现代医学的不断发展，清

3、热解毒中药 所解之“毒”不仅包括“外源性之毒”（细菌、病毒、内毒 素），还包括氧自由基和细胞因子过度释放等“内源性之毒” 6。第2页共10页连花解毒颗粒所含主药均为清热解毒中药的典型代表，利 用动物发热模型对发热过程进行模拟，从而对解热作用进行进 一步研究。本课题还对药物的急性毒性进行了考察，为临床安 全用药提供了实验数据和理论基础。2国内外研究的发展概况和趋势目前，国内外研究药物急性毒性的方法有很多，经典的有 半数致死量试验(50% lethal dose , LD50)、最大给药量试 验等，除此之外，还有限量试验、近似致死剂量实验、扩展试 验、固定计量法、剂量累积试验等。中药新药中应用最多

4、的是 半数致死量和最大给药量试验。中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则规定未在 国内上市的由中药、天然药物组成的非注射给药的复方制剂， 如该复方制剂处方组成符合中医药理论，有一定的临床应用经 验，一般情况下，可采用一种动物，按临床给药途径进行急性 毒性反应的观察。本课题选用啮齿类动物小鼠为实验动物，采 用口服给药方式，对连花解毒颗粒进行急性毒性反应的研究。发热是清热药最主要的适应症之一，解热作用是清热药的 一个重要共性。在实验中可以采用多种方法来引起实验动物发 热，如细菌或细菌产物、造成无菌炎症、化学药物、刺激丘脑 体温调节中枢及暴露于高热坏境等，这些发热模型均可用于解 热实验研究，如目前国

5、内外常用的有注射腐败枯草浸液、角叉第3页共10页菜胶、牛乳或蛋白月东、加热杀死的革兰阴性菌（大肠杆菌、伤 寒或副伤寒杆菌、痢疾杆菌）菌液、伤寒副伤寒菌苗、啤酒醉 母、2,4一二硝基苯酚等发热方法研究中药的解热作用。为了 进行机制分析或特殊研究目的，还可选用内生致热原生成及发 热试验、微量PGE囱室内或下丘脑注射致热试验、Lipid A、IL-1、干扰素及TNF性发热试验等7 o本课题选用啮齿类动物大鼠为实验动物，拟采用角叉菜胶 为发热模型致热源，皮下注射可于局部产生强烈的炎症反应， 此炎症的形成主要与其诱导前列腺素生物合成及释放有关，可 引起一个持续炎症反应，并激活巨噬细胞引发发热。因其来源

6、不同，其致热作用有些差异，故于正式实验前宜先做预试验， 以选择适宜的种类、浓度与剂量，此外在预实验阶段观察大鼠 体温变化全过程。二主要研究内容本课题采用啮齿类动物大鼠和小鼠以口服给药方式，对连 花解毒颗粒进行以下两个方面进行研究：（一）连花解毒颗粒急性毒性反应的研究（二）连花解毒颗解热药效学的研究三 主要研究方案连花解毒颗粒的急性毒性实验第4页共10页中药新药审评的技术要求规定，当受试药物的毒性很低，或者因浓度或体积的限制，无法测由LD50时，可仅提供最大给药量试验的结果，测定其能达到人用量的多少倍，对药物安 全性进行评估，以耐受人用量口服100倍以上为安全8 o溶液的配制与预实验溶液的配制连

7、花解毒颗粒供试品1的制备：取连花解毒颗粒125.0g溶于100mL水中，搅拌均匀即得混悬药液，此作为连花解毒颗 粒供试品1溶液（相当于人临床用量100倍）。连花解毒颗粒供试品 2的制备：取连花解毒颗粒188.0g溶于100mL水中，搅拌均匀即得混悬药液，此作为连花解毒颗 粒供试品2溶液。预实验方法：选择体重约20g的健康小鼠10只，雌雄各半， 实验前禁食不禁水12ho每只小鼠按100g/kg/d量于12h内给 予灌胃供试品1溶液2次，灌胃体积为0.4mL/ 10g ,给药后 连续观察7天。如果小鼠全部存活，则采用最大给药量法进行 实验，如果小鼠部分或全部死亡则采用LD50的测定。选择体重约20

8、g的健康小鼠10只，雌雄各半， 实验前禁食不禁水12ho每只小鼠按150g/kg/d量于12h内给 予灌胃供试品2溶液2次，灌胃体积为0.4mL/ 10g第5页共10页最大给药量法进行实验选择体重约20g的健康小鼠48只，雌雄各半，分成两 组，每组24只，实验前禁食不禁水12ho实验组每只小鼠按150g/kg/d量于12h内给予灌胃连花解毒颗粒供试品2溶液2次，灌胃体积为 0.4mL/ 10g。对照组每只小鼠给以生理盐 水，一天两次，灌胃体积为 0.4mL/ 10g。两组小鼠给药后连 续观察14天。期间若有死亡小鼠即刻尸解，肉眼观察小鼠主 要脏器（心、肝、脾、肺、肾等）的变化，若肉眼可见异常则

9、进 行病理检查。若无14天后处死全部存活小鼠，解剖和尸检内 脏器官有无异常。并记录 14天内雌雄小鼠的行为活动、被 毛、皮肤、呼吸、大小便、食欲，鼻、眼、口腔有无异常分泌 物等情况（见附录I ）。2连花解毒颗粒对角叉菜胶所致大鼠发热的解热作用13-15人与大鼠之间给药量的换算表2-1不同实验动物与人的等效剂量比值（注：剂量按 mg/kg算，人按照60kg算）12动物小鼠大鼠豚鼠第6页共10页猫猴狗剂量比值8.655.985.153.112.590.9981.78通过查表可知大鼠与人的等效剂量比约为6倍实验动物用剂量=（动物体重/人的体重）x人的剂量X6=（0.2kg/60kg） x 60gx

10、6=1.2g致热因子溶液的配制与发热模型的建立致热因子的制备：精密称取角叉菜胶（卡拉胶）100mg置于试管中，加入灭菌生理盐水（或蒸储水）10mL轻轻搅拌或摇匀，放置于 4 c冰箱中过夜，次日晨取由，轻第7页共10页发热模型的建立：取 12只健康大鼠，雌雄各半， 于实验前810 h禁食，但不禁水。实验前三天，每日测大鼠 肛温2次，实验当日每小时测肛温 1次，连续3次，选取体温 变化不高于0.3 C的大鼠进行实验，取被选中的大鼠肛温平均 值为基础体温。于大鼠两爪脚跖皮下各注射1%!叉菜胶悬液0.1mL/爪，分别于 1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、 10h测大鼠肛温，观察大鼠

11、建模情况，如注射致热因子4小时后，大鼠体温开始升高，至67小时达高峰，并持续时间长于10小时，则可判断为建模成功，视情况调整致热因子的2.3预实验观察：选取 20只健康大鼠，雌雄各半，于实验前810 h禁食，但不禁水。实验前三天，每日用体温计测大鼠肛 温2次，实验当日每小时测肛温1次，连续3次，选取肛温变化不高于0.3 C的大鼠进行实验，取被选中大鼠肛温的平均值 为基础体温。以角叉菜胶作为致热因子，参考相关文献，在预 实验中设置两种实验大鼠每天给浓度为 0.4g/mL连花解度颗粒3mL一次，连 续3d。末次给药后，用体温计测量致热前肛温，然后于大鼠 两爪脚跖皮下各注射 1%角叉菜胶悬于大鼠两爪

12、脚跖皮下各注射1%角叉菜月液0.1mL/爪，此后立即给予每只大鼠浓度为0.4g/mL连花解度颗粒3mL 分别于 1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h 测第8页共10页大鼠肛温。观察动物反应情况和体温变化，选择最佳的实验方 法(给药量计算：连花解毒颗粒60kg人每天用量为60g,按体表面积折算0.2kg大鼠正常用量为1.2g, 0.2kg大鼠每次灌 胃3mL即连花解毒颗粒配制的浓度为1.2g/3mL=0.4g2.4连花解度颗粒解热效果正式实验：根据预实验结果， 选取实验方案。大鼠于实验前810 h禁食，但不禁水。每日用体温计测大鼠肛温 2次，连续3日，实验当日每小时测体温

13、 1次，连续3次，选取体温变化不高于 0.3 C的健康大鼠，取 被选中大鼠体温的平均值为基础体温。将大鼠随机分成七组， 灌服以下七连花解毒颗粒低剂量组：0.2g/mL连花解度颗粒3mL连花解毒颗粒中剂量组：0.4g连花解毒颗粒高剂量组：0.8g/mL连花解度颗粒3mL双黄连颗粒阳性对照品组：0.2g/mL柴黄颗粒3mL阿司匹林阳性对照品组：6.7mg/mL阿司匹林3mL空白辅料对照组：266.7mg/mL空白辅料3mL模型组：不给药根据预实验确定的试验方法建模，于1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h测大鼠肛温。记录每只大鼠的体温 变化并绘制曲线图，利用 spss件分析计算，判断连花解毒颗粒组与模型组体温差别是否有统计学意义(P0. 05),即连第9页共10页花解毒颗粒的解热效果（给药量计算：连花解毒颗粒60kg人每天用量为60g,按体表面积折算0.2kg大鼠正常用量为 1.2g , 0.2kg大鼠每次灌胃3mL因此配制的连花解毒颗粒中 剂量组浓度为1.2g/3mL=0.4g/mL ;双黄连颗粒60kg人每天 用量为30g,则大鼠正