光学比浊法与连续血小板计数法监测血小板聚集功能的比较

1、光学比浊法与连续血小板计数法监测血小板聚集功能的比较 838 解放军医学院学报 Acad J Chinese PLA Med Sch Aug 2013，34（8）光学比浊法与连续血小板计数法监测血小板聚集功能的比较关杰，任军伟，朱远，傅淑宏，白洁，邓新立，丛玉隆解放军总医院 南楼检验科，北京100853摘要：目的 评价血小板功能检测仪PL-11应用的连续血小板计数方法(PL-11)监测血小板功能的价值。方法 通过光学比浊法(light transmittance aggregometry，LTA)与PL-11连续血小板计数法检测本院2012年26例服用氯吡格雷抗凝治疗的心血管病患者和45例健康

2、志愿者的血小板聚集功能，分析两种方法相关性及差异。结果 血小板聚集诱聚剂二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)诱导的LTA与PL-11最大血小板聚集率(maximal aggregation ratio，MAR)存在较好相关性(r=0.766，P0.000 1)。分别用LTA与PL-11检测健康志愿者组、服药患者组，最大血小板聚集率均存在统计学差异(P0.000 1)。在两组人群中，LTA测得最大血小板聚集率范围均较PL-11广。PL-11在每例标本检测过程中，各测试点提供的平均血小板体积(mean platelet volume，MPV)变化趋势与检测期间血小板聚集

3、率变化情况一致。结论 PL-11连续血小板计数法与“金标准”的光学比浊法检测血小板聚集功能时有较好的相关性，其应用价值可供临床及实验室参考。富血小板血浆标本与全血标本可能是两种方法检测结果差异的原因。血小板聚集功能检测；光学比浊法；连续血小板计数；平均血小板体积；氯吡格雷关键词：10.3969/j.issn.2095-5227.2013.08.016R 446.111文献标志码：A文章编号：2095-5227(2013)08-0838-04DOI：中图分类号：2013-03-21 09:46网络出版地址：/kcms/detail/11.3275.R.20130321.0946.004.html

4、网络出版时间：Platelet aggregation function monitored by light transmittance aggregometry and continuous platelet countGUAN Jie, REN Jun-wei, ZHU Yuan, FU Shu-hong, BAI Jie, DENG Xin-li, CONG Yu-longClinical Laboratory in South Building, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, ChinaCorresponding auth

5、or: CONG Yu-long. Email: Abstract: Objective To assess the value of continuous platelet count with platelet function analyzer PL-11 in monitoring platelet function. Methods Platelet function of 26 coronary artery disease (CAD) patients admitted to our hospital in 2012 for anticoagulant therapy with

6、clopidogrel and 45 healthy volunteers was detected by light transmittance aggregometry (LTA) and continuous platelet count with platelet function analyzer PL-11, respectively. The correlation and the different results in the two methods were analyzed. Results The adenosine diphosphate (ADP)-induced

7、maximal aggregation ratio (MAR) detected by LTA and continuous platelet count with PL-11 was well-correlated in CAD patients and healthy volunteers (r=0.766, P0.000 1). The MAR detected by LTA was higher than that detected by continuous platelet count with PL-11 in CAD patients and healthy volunteer

8、s. The mean platelet volume (MPV) was consistent with the MAR in each sample measured by continuous platelet count with PL-11 at different time points. Conclusion The platelet function detected by continuous platelet count with PL-11 and LTA is similar, which can provide reference for their applicat

9、ion in clinical practice and laboratory tests. Platelet-rich and whole blood samples may be the reason for the different results of the two methods.Key words: platelet aggregation function test; light transmittance aggregometry; continuous platelet count; mean platelet volume; clopidogrel 抗血小板治疗是心血管

10、病患者重要的治疗方法，由于其治疗后仍存在出血或再次血栓的问题，临床实验室可以通过血小板功能监测患者治疗情况。血小板功能检测有诸多方法，许多文献对不同检测方法与临床预后的关系作了评价，其中，光学比浊法(light transmittance aggregometry，LTA)是受到广泛认可，甚至被认为是“金标准”的血小板功能检测方法，但存在如操作繁杂、质量控2012-12-19收稿日期：关杰，男，在读硕士。Email: gj1253作者简介：丛玉隆，男，主任医师，教授，博士生导师。Email: yu通信作者：制难等问题1-2。血小板功能检测仪PL-11应用的连续血小板计数法，是以库尔特原理为基础

11、的新型血小板功能检测方法，通过观察诱聚剂引起血小板聚集前后全血中血小板数量的改变来评估血小板功能。目前对于它的研究较少。本研究比较LTA与PL-11连续血小板计数方法对血小板功能的监测，评价PL-11连续血小板计数法与LTA的相关性及其监测血小板功能的价值。对象和方法1 对象实验组选择本院2012年经血管造影确诊为冠脉疾病(coronary artery disease，CAD)的患 解放军医学院学报 Acad J Chinese PLA Med Sch Aug 2013，34（8）839者26例，且目前仅以氯吡格雷作为抗血小板药物，服药时间1个月。其中男性19例，女性7例，平均年龄(76.8

12、12.13)岁；排除使用其他影响血小板功能的药物(如阿司匹林，非甾体类抗炎药，噻氯匹定，双嘧达莫)、处于缺血性血管事件中或有出血性疾病的患者。另征集45例本院健康成年受试者为对照组，其中男33名，女12名，平均年龄(23.531.84)岁；排除患有任何慢性或者急性疾病、正在服用已知对血小板功能有影响的药物(包括非甾体类抗炎药)、吸烟或怀孕者。所有受试者对于本课题均知情同意。2 仪器与试剂CRONO-LOG Model 700血小板聚集仪(美国CHRONO-LOG公司)及配套试剂(ADP，浓度1 mmol/L)；PL-11血小板功能分析仪(南京神州英诺华医疗科技有限公司)及配套试剂(ADP，浓度

13、50 mmol/L)；真空采血管为美国B.D.公司的含3.2%枸橼酸盐抗凝管。3 标本采集均于清晨使用3.2%枸橼酸盐抗凝真空管采集受试者肘静脉血：3管/人，其中1管用于PL-11检测，2管用于LTA检测。标本保存于37 恒温箱，2 h内完成检测；检测前不能出现凝集。4 血小板聚集实验(LTA)两管枸橼酸盐抗凝血分别经800 r/min、5 min和4 000 r/min、8 min得到富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)和乏血小板血浆(platelet poor plasma，PPP)后各取500 l加至比色杯。使用CRONO-LOG血小板聚集仪检测，以PPP为空

14、白参照，5 l浓度为1 mmol/L的ADP为诱聚剂加入至PRP(ADP最终浓度：10 mmol/L)，PRP中透光度改变最大时得到血小板最大聚集率(max aggregation ratio，MAR)，以百分数表示。5 PL-11连续血小板计数法使用移液器吸取0.5 ml枸橼酸盐抗凝全血至PL-11检测试管并开始自动检测。全血标本经两次血小板基础值计数后，仪器自动加入40 l浓度为50 mmol/L诱聚剂ADP(全血中最终浓度：4 mmol/L)，并连续间隔一定时间对血标本中血小板计数，当得到最低血小板计数时结果自动换算，以最大血小板聚集率表示，即(初始血小板数最低血小板数)初始血小板数10

15、0%。6 统计学处理统计软件使用SPSS13.0进行分析，-s表示，两组间比较采用独立样连续变量采用x本t检验，两组结果相关性采用Pearson线性相关分P0.05析，多组间定量资料比较采用方差分析；为差异有统计学意义。绘图软件使用Prism 5 for Window version 5.01。结果1 两种方法检测血小板聚集率比较经独立样本t检验显示，LTA、PL-11分别检测健康志愿者和服两药患者时，结果均有统计学差异(P0.000 1)；种方法健康志愿者血小板聚集率值均大于服药患者组(表1)。在两组受试者中，LTA所检测的最大血小板聚集率范围高于PL-11，见图1。表1两种方法检测最大血小

16、板聚集率比较Tab. 1MAR detected by LTA and continuous platelet count with PL-11(%)LTA Healthy(n=45)32Patients(n=26)6PL-11 HealthyPatients(n=45)(n=26)61.332.485.679.573.696.1551.0711.26Min MARMax MAR9677-MAR(xs)74.8913.5141.7319.58P0.000 1; MAR: maximal aggregation ratio图 1实验组与对照组两种方法检测结果Fig. 1MAR detected

17、by LTA and continuous platelet count with PL-11 in CAD patients and volunteers2 两种方法相关性分析所有受试者中PL-11与r=0.766，P0.000 1)LTA结果MAR存在明显相关( (图2A)；在服药患者组中，PL-11与LTA结果存在在较好的相关性( r=0.616，P0.001)(图2B)；健康志愿者结果中，未发现两种检测方法存在相关性( r=0.250，P=0.098)。3 PL-11检测平均血小板体积(mean platelet volume，MPV)的变化结果显示，两组受试者全血标本中加入诱聚剂AD

18、P引起血小板聚集后，最大血小板聚集率主要出现在第35检测点，MPV值也在第3点后出现最大值，二者变化趋势一致。未发现健康者与患者初始MPV值的差异(P=0.321)；分别对两组受试者前6个检测点MPV进行方差分析时(图3)，第1、2个测试点间无统840 解放军医学院学报 Acad J Chinese PLA Med Sch Aug 2013，34（8）研究结果中LTA结果在健康人与服药患者组具有统计学差异，证实其能够反映血小板功能及监测服药后血小板功能改变，与之前文献结果一致8-9。PL-11连续血小板计数法同样能检测到两组受试者间差异。有文献报道，同样以血小板计数方法图 2PL-11与LTA

19、相关性分析 A：所有受试者B：服药患者组Fig. 2Correlation between continuous platelet count with PL-11 and LTA in all subjects (A) and 为基础的Plateletworks仪器CAD patients (B)检测到服用氯吡格雷后患者最大血小板聚集率也明显降低10。当以ADP为诱聚剂时，Van Werkum等11对CAD患者进行检测，Plateletworks与LTA之间结果存在较好相关( r=0.71，P0.000 1)，与本研r=0.766)。该作究结果相近( 者认为，通过血小板计数检测血小板聚集功能

20、有时间依图 3PL-11检测血小板聚集时MPV变化 A：服药患者组B：健康志愿者组Fig. 3MPV detected by continuous platelet count with PL-11 in CAD patients (A) and volunteers (B)赖性，当检测时间10 min时结果偏低。事实上，加入计学差异(P=0.998)，第3个测试点与第1、2个测ADP诱聚后，PL-11连续进行血小板计数，在第35试点间有统计学差异(P值均0.000 1)，与第4、个测试点达到最大聚集率，时间为610 min，即血5、6测试点间差异无统计学意义(P值分别为0.969，小板计数呈

21、现先急剧减少而后缓慢增加的状态，0.791，0.977)。故10 min后结果偏低。这种现象同样发生在LTA检测中，透光强度急剧达到最大时又逐渐减小。讨论这种现象可能与ADP浓度有关，因为本试验中所 自1962年血小板聚集功能的概念提出及20使用ADP浓度较低，有资料显示，较低浓度的世纪80年代末英国血液学标准委员会(British ADP刺激血小板聚集后易发生解聚，若提高浓度，com-mittee for Standards in Haematology，BCSH)提可能使情况发生改变12。出血小板功能检测方法指南后，许多实验室检测 本研究发现，无论在健康人或服药患者中，方法问世，其中最常用

22、方法是LTA，被认为是血LTA检测结果范围均高于PL-11。实际上LTA是小板功能检测“金标准”。尽管存在一些技术缺陷，诱聚剂刺激后，血小板与纤维蛋白原结合产生光仍有许多研究报道LTA检测结果与临床不良事件学变化后的反映，而PL-11检测的是经库尔特原之间存在联系3-7。理设定参数范围内认为是血小板的较小颗粒(血小 本文通过PL-11与LTA检测健康人群及服用板直径230 m)，较LTA对小颗粒更敏感，故出氯吡格雷患者经ADP诱导后血小板聚集功能变化，现该现象。由此引起的问题可能是当LTA测得最对两种方法进行评价，证实PL-11连续血小板计大血小板聚集率处于0100%中间水平与较低水平数法对全

23、血标本检测与“金标准”的LTA方法在时，PL-11结果变化较小，反映血小板功能较小差检测血小板聚集功能时具有较好的相关性。由于异时不明显。不同检测标本可能也是带来这种差两种检测方法均为体外检测，受到采血、保存等异的原因，因为在PRP中可能存在由于离心从细因素的影响，二者检测结果最大血小板聚集率在胞中释放出继续引起血小板聚集的物质13。这种正常范围内微幅波动，因此在健康人群中未见二推论需要进一步验证。者结果的相关性。 MPV被认为是血小板活性的标记物之一，增 解放军医学院学报 Acad J Chinese PLA Med Sch Aug 2013，34（8）841大的MPV提示血小板活性增强14

24、。PL-11在连续计数血小板时，提供每个测试点的血小板MPV值，检测结果中聚集后剩余血小板体积增加(其原因可能是两个或者多个较小的血小板聚集成大血小板聚集颗粒引起)，为明确其活化聚集提供了依据。 综上所述，PL-11连续血小板计数法与光学比浊法在检测血小板聚集功能时有较好的相关性，较全面地提供了最大血小板聚集率、血小板计数、MPV变化情况，是一种可以供临床实验室选择的血小板功能检测方法。参考文献1 Sharma RK， Voelker DJ， Sharma R， et al. Evolving role of platelet function testing in coronary arte

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34、 Usefulness of mean platelet volume as a biomarker for long-term outcomes after percutaneous coronary interventionJ. Am J Cardiol， 2011， 107（2）：204-209.6 (上接819页)间隙渗液回吸收，减轻肠源性感染，间接促进急性胰腺炎患者恢复9。临床实践表明，早期放置空肠营养管积极开展肠内营养、应用药理营养制剂进行胃肠道免疫调理或其他手段保护胃肠黏膜，能改善胃肠道功能，有助于急性胰腺炎患者尽快康复10-11。本研究初步证实，胃肠道功能是胰腺病变的“晴雨表”

35、，可以通过观察胃肠道功能变化间接推测胰腺病变的发展，对于急性胰腺炎患者的治疗具有一定的临床指导意义。参考文献1 2 蒋剑明，赵京丽，刘斌，等急性胰腺炎12年前后临床资料对比分析J.军医进修学院学报，2011，32（5）：445-447潘莉雅，王新颖，李维勤，等脂肪酸结合蛋白在重症急性胰腺炎诊断中的应用J.肠外与肠内营养，2010，17（3）：134-137Balthazar EJ， Freeny PC， Van Sonnenberg E. Imaging and intervention in acute pancreatitisJ. Radiology， 1994， 193（2）：297-306.3 王长友，张国志，石秋艳，等高脂血症性急性胰腺炎临床特点分析J.军医进修学院学报，2009，3