白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

1、白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响高宝安，陈世雄，杨俊，黄骥，邓红艳【关键词】白花蛇舌草乙醇提取物细胞周期凋亡人肺腺癌A549细胞原发性支气管肺癌是如今最常见的恶性肿瘤之一。近30年来，其发病率和殒命率在天下范畴内呈上升趋势。肺腺癌在原发性支气管肺癌中极为常见，传统化疗和放疗对肺腺癌结果均不甚抱负1。白花蛇舌草Hedytisdiffusa为茜草科耳草属植物。中医以其全草入药，性寒，味甘淡，归心、肺、肝、大肠经；清热解毒，利尿；主治恶疮肿毒、泻痢等症，临床常用于治疗各种癌症2。研究表白3，差异工艺白花蛇舌草提取物抗肿瘤作用有差异：乙醇提取物冷水提取物煎煮提取物。我们通过研

2、究白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，展现白花蛇舌草抗肺腺癌大概的作用机制，为临床应用提供理论根据。1质料与要领1.1药物和试剂白花蛇舌草购于湖北省药材公司。取白花蛇舌草全草50g，破坏研磨，95%乙醇搅拌浸泡15d，滤去残渣，水浴至液体全部蒸发干，此后参加ddH250l溶解，得到生药浓度为1g/l，0.22滤膜过滤除菌，4保存，用前用DE造就基稀释至所需浓度。碘化丙啶PI购于Pharingin公司晶美公司署理。Hhest33258购于Siga公司。鼠抗人Bax、Bl-2及-atin单抗购自美国Santaruz公司。1.2细胞及其造就肺腺癌细胞株A549购于武汉大学中国典

3、范造就物收藏中央，用含10小牛血清杭州四序青生物工程质料的DE造就基Gib公司，在含52、37饱和湿度的造就箱中造就，0.25胰卵白酶消化传代。1.3TT试验A549细胞经胰酶消化后计数，调解细胞密度为1105l-1，接种于96孔板，每孔100l。分设比拟组和差异浓度药物组5，10，20，40，80g/l，每孔设6复孔，别离造就1，2，3，4d；每孔参加5g/LTT10l，继承孵育4h，每孔参加200l二甲基亚砜DS停顿，振荡15in，450型ELISA-Reader酶标仪Bi-Rad公司570n主波长，630n副波长检测吸光度。以比拟组细胞活力为100，按公式盘算差异浓度白花蛇舌草乙醇提取物

4、对A549细胞增殖的按捺率：细胞按捺率%(1药物组吸光度/比拟组吸光度)1001.4Hehst33258染色检测细胞凋亡按照TT实行结果，选择40g/l的白花蛇舌草乙醇提取物作为后续实行药物浓度。将干净无菌的盖玻片置于六孔板内，接种细胞留宿。当5080满时，参加白花蛇舌草乙醇提取物作用12，24，36，48h后，吸尽造就液，参加0.5l的结实液，结实10in。然后去结实液，用PBS洗两次，3in/次，吸尽液体，参加0.5lHehst33258染色液1g/l，染色5in，晃动数次，封片，荧光显微镜下不雅察。1.5流式细胞仪阐发细胞周期和凋亡率将A549细胞接种于六孔板，待细胞生长至75交融摆布，

5、比拟组参加DE造就基，实行组参加白花蛇舌草乙醇提取物40g/l，作用0，12，24，36，48h后，胰酶消化网络细胞，PBS洗涤后，80冰乙醇结实，20留宿。检测前PBS冲洗细胞1次，调解细胞浓度为106l-1，参加含RnaseA终浓度为0.25g/l的碘化丙啶PI染色液终浓度为5g/l中，室温避光染色30in，流式细胞仪购自BehanDiksn公司检测，每组重复3次，ellQuest及tift软件阐发SubG1峰和细胞周期。1.6卵白免疫印迹试验esternBlt网络细胞，参加细胞裂解液，冰上安排15in，12000r/in离心15in，取上清，以Bradfrd法作卵白质定量后置80贮存备用

6、。灌制10SDS-聚丙烯酰胺凝胶，通例电泳，转膜，关闭，一抗1500，4孵育留宿，二抗15000，室温孵育2h，EL显色。图像经UvpgrabitIage软件测定各条带的吸光度，以各条带的吸光度值与-atin吸光度值的比值举行细胞间卵白表达量的比力。1.7统计学阐发全部数据均用s表现，利用统计软件SPSS10.0进配对资料t查验，P0.05为差异有明显性意义。2结果2.3白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞凋亡率和细胞周期的影响40g/l的白花蛇舌草乙醇提取物作用于A549细胞12，24，36，48h，通过亚G1峰检测其凋亡率别离为5.720.98%，7.102.08%，19.894.25%，3

7、2.556.51%，与比拟组细胞凋亡率比拟，差异有明显性P均0.05。细胞周期检测结果表现，40g/l的白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后，G1G0期细胞百分比渐渐增高，从0h的36.345.15%，升高到48h的64.947.56%。结果见表1和图3。表140g/l白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞周期和细胞凋亡率的影响略2.4esternBlt检测结果40g/l的白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞0，12，24，36，48h，esternBlt检测Bax的表达渐渐增长，Bl-2的表达渐渐减低。结果见图4。3讨论经Hehst33258染色及流式细胞仪检测，白花蛇舌草乙醇提取物作用A54

8、9细胞，可诱导细胞产生凋亡，40g/l白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12，24，36，48h后，凋亡率别离为5.720.98%，7.102.08%，19.894.25%，32.556.51%，均高于比拟组P均0.05，且凋亡率随药物作用时间增长而增长。凋亡的线粒体通路重要由Bl-2家属成员所调控，该家属可分为两个亚群：一个亚群Bl-2，Bid，Bl-x，Bl-等抗凋亡卵白构成；另一个亚群由Bax，Bak，Bik，Bl-xs等促凋亡分子构成9。本实行检测了Bax和Bl-2卵白程度的变革环境，白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞，Bax卵白程度渐渐表达升高，Bl-2卵白程度表达渐渐减低，表白

9、凋亡是通过促凋亡分子Bax的上调和抗凋亡分子Bl-2的下调来实现的。【参考文献】1El-SharuniSY，KalHB，BatterannJJ，etal.Sequentialversusnurrenthe-raditherapyininperablestageIIInn-sallelllunganerJ.AntianerRes，2022，26(1B):495.2宋立人.中华本草，第1版.上海：上海科学技能出书社，1999：433.3赵浩如，李瑞，林以宁，等.白花蛇舌草差异提取工艺对抗肿瘤活性的影响J.中国药科大学学报，2002，336：510.4TaI，ShrieverF，DrkenB.App

10、tsis:ipliatinsfbasiresearhfrlinialnlgyJ.Lanetnl.2001，2(1):33.5SykitisGP，PapavassiliuAG.Apptsis:thesuiideslutininanertreatentandhepreventinJ.ExpertpinInvestigDrugs.2022，15(6):575.6Lin，NgLT，YangJJ.Antixidantativityfextratsfpeh-hue-jua-hi-ainaellfreesysteJ.AJhined.2022，32(3):339.7GuptaS，ZhangD，YiJ，etal.AntianerativitiesfldenlandiadiffusaJ.