《基因工程实验》实验教学大纲

1、基因工程实验实验教学大纲课程代码：UHOR1113 课程名称：基因工程实验 英文名称：Experiments in Genetic Engineering 实验室名称：园林园艺实验室课程学时：36实验学时：24一、本课程实验教学目的与要求基因工程是一门重要的、前沿性的专业技术实验课程，广泛应用于农业科学和园艺学的各个研究领域。通过本课程实验，帮助学生加深理解基因工程原理，培养学生理论与实践相结合的能力，提高学生的实际操作能力；初步掌握基因工程实验的基本操作技能；培养学生在实践中发现问题、分析问题和解决问题的能力以及实践创新能力。在实验课的教学过程中，要求学生在每次实验前预习好实验指导中的相关内

2、容、掌握实验目的和实验设计原理、了解实验操作的基本过程及注意事项。实验课上，教师必须认真讲解实验内容和操作要点，并正确演示操作程序，特别是有关实验仪器的操作规程；学生应仔细观察实验中出现的各种现象，如实记录实验结果和数据，并联系有关理论内容进行积极思考，认真分析实验结果；实验报告的书写要求简明扼要、字迹清楚、规范整洁、结果正确。二、主要仪器设备及现有台套数 仪器设备需要数量仪器设备需要数量DNA扩增仪(PCR仪)1台超低温冰箱1台荧光定量PCR仪1台空气振荡培养箱1台分子杂交仪1台水浴振荡培养箱2台生化培养箱2台普通台式离心机3台植物光照培养箱1台冷冻高速离心机1台超纯水制备系统1套多用途电泳

3、仪及配件2套操净工作台3台高压灭菌锅1台凝胶成像仪 1台pH酸度计3台微量移液器10套（2 l/ 20 l/ 200 l/ 1000 l）三、实验内容与学时分配序号实验项目名称目的、要求实验内容学时分配实验类型每组人数必开、选开1培养基制备及大肠杆菌菌种的活化熟悉无菌操作规范，掌握菌种活化过程配制LB培养基，取菌落无菌接种，37培养过夜3基础性2-3选开2大肠杆菌感受态细胞的制备掌握氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术配CaCl2溶液，菌种液体培养，菌液冰浴-热激处理3综合性2-3必开3植物总RNA提取及电泳检测学习植物总RNA的Trizol提取技术、琼脂糖凝胶电泳技术叶片液氮破碎，用Triz

4、ol提取，配制琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量3综合性2-3必开4植物目的基因cDNA的PCR扩增利用RT-PCR技术获得目的基因的原理、实验方法及操作步骤用试剂盒反转录合成cDNA第1链，用作模板，特异引物PCR6设计性2-3必开5RT-PCR扩增产物检测及回收学习利用试剂盒从琼脂糖凝胶中回收目的基因片段的方法用琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段，专用试剂盒回收扩增片段3综合性2-3必开6PCR回收产物与载体的连接学习基因片段与载体连接的原理与方法，掌握相关操作技术使用T4-DNA连接酶，采用T-A载体直接克隆法进行连接反应3设计性2-3必开7连接产物转化及蓝白斑筛选学习大肠杆菌转化过程，掌握蓝白斑筛选

5、实验原理与方法连接产物转化感受态细菌，涂LB培养基，培养、观察菌落色泽3设计性2-3必开8重组子扩增及PCR鉴定对转化得到的重组子进行鉴定，进一步熟悉PCR操作过程挑取白色菌落，采用direct PCR技术鉴定目的重组子3综合性2-3选开9质粒提取及电泳检测学习质粒提取原理、操作步骤、琼脂糖凝胶电泳配制提取溶液，碱解法提取目的重组子，琼脂糖凝胶电泳检测3综合性2-3必开10重组子酶切鉴定学习酶切鉴定的基本原理及实验操作选用限制性内切酶，对目的重组子进行酶切、鉴定3设计性2-3选开四、本课程考核方式及成绩评定方法实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸，实验报告的内容应包括：实验目的，实验的基本原理，实验所用的仪器设备及试剂，实验操作程序，实验结果与分析，实验应注意事项等内容。考核可采取闭卷、开卷、实验操作等形式，或多种形式相结合，对学生的实验及学习情况做出全面科学的评价。成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据平时实验完成情况、实验报告撰写情况等给予综合评定。1、学习与实验态度 （20%）2、实验技能与操作 (35%)3、解答问题 （10%） 4、实验报告 （35%