原核生物基因表达调控 (3)讲稿

1、关于原核生物基因表达调控 (3)第一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/52第一节 原核生物基因表达调控的概述第二节 乳糖操纵子与负控诱导系统第三节 色氨酸操纵子与负控阻遏系统第四节 其它操纵子第五节 转录后的调控第二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/53第一节 原核生物基因表达调控的概述基因表达（gene expression)：是指DNA分子所承载的遗传信息，通过密码子 反密码子系统，转变成蛋白质或功能RNA分子的过程，称为基因表达。基因表达调控（gene regulation or gene control): 是指对基因表达过程的调节。第三张，PP

2、T共九十页，创作于2022年6月2022/9/54基因表达调控主要表现在以下几个方面：1、转录水平上的调控（transcriptional regulation);2、mRNA加工成熟水平上的调控（differential processing of RNA transcription);3、翻译水平上的调控（differential translation of mRNA)第四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/55基因调控的指挥系统：原核生物营养水平（nutritional status)环境因素( environmental factors)真核生物激素水平（hormo

3、ne level)发育阶段（developmental stage)第五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/56一、原核基因调控机制的类型与特点根据调控机制的不同： 正转录调控（positive transcription regulation）：调节基因的产物是激活蛋白（activator），起着提高结构基因转录水平的作用。负转录调控（negative transcription regulation）：调节基因的产物是阻遏蛋白（reppressor），起着阻止结构基因转录的作用。第六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/57根据作用特征：诱导（induct

4、ion）：调节因子与效应物结合后，开启基因的转录活性称为 诱导（induction）；阻遏（repression）：调节因子与效应物结合后，关闭基因的转录活性称为 阻遏（repression）。第七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/58第八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/59第九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/510调节基因产物 调节基因产物与效应物结合 基因表达基因不表达阻遏蛋白负控诱导系统 负控阻遏系统 激活蛋白正控诱导系统 正控阻遏系统 第十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/511 因子是参与大肠杆菌基因

5、表达调控最常见的蛋白质。6 种 因子： 70、 54、 38、 32、 28、 24。 除54 外，其余5种 因子在结构上均具有同源性，统称为70 家族。第十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/512TTGACATATAAT- 35- 10Startpoint16-19 bp5-9 bp70 因子识别并结合在所调控基因上游的区域CTGGNATTGCA- 24- 12Startpoint 7 - 9 bp6-8 bp54 因子识别并结合在所调控基因上游的区域第十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5131 、 特殊代谢物对基因活性的调节可诱导调节：是指一些

6、基因在某些代谢物的诱导下使其活化，由原来的关闭状态转变为开放状态。如：大肠杆菌的乳糖操纵子可阻遏调节：是指一些基因由于某些代谢物的积累，而使其由原来的开放状态转变为关闭状态。如：色氨酸操纵子二、原核基因调节的主要特点第十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/514无诱导物时，基因关闭诱导物开启基因可诱导的操纵子：是一些编码糖和氨基酸分解代谢蛋白的基因；第十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/515可阻遏的操纵子：是一些合成各种细胞代谢过程中所必须的小分子物质。第十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5162、弱化子对基因活性的调节弱化子

7、(attenuator)：是指起转录终止信号的一段核苷酸序列。trp 操纵子mRNA 前导序列结构第十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/517细胞中某一氨基酸或嘧啶的浓度发生改变氨酰 tRNA的浓度变化核糖体在转录产物RNA上的结合位置不同，使得RNA形成特定的二级结构由RNA的二级结构判断基因能否继续转录调节机理：第十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/518色氨酸含量和核糖体位置对弱化子结构的影响当色氨酸充足时，前导序列的合成正常进行，核糖体占据 1 区和部分2 区，2、3 不能有效配对；3、4 配对形成终止子的发卡结构，转录终止。Trp+ 转录终

8、止第十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/519当缺乏色氨酸时， 翻译在双色氨酸密码子处中止；核糖体仅占据 1 区，2、3 区配对；3、4 区不能形成发卡结构，转录继续。Trp- 转录继续第十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/520前导区的转录无色氨酸时，转录可持续进行有色氨酸存在时，转录在弱化子区域终止第二十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5213、降解物对基因活性的调节葡萄糖效应或降解物抑制作用：细菌培养基中在葡萄糖存在的情况下，即使加入乳糖、半乳糖等诱导物，与其对应的操纵子也不会启动，这种现象称为葡萄糖效应或降解物抑制作用。

9、葡萄糖抑制腺苷酸环化酶的活性导致环腺苷酸的合成减少环腺苷酸代谢物激活蛋白复合物复合物结合在启动子区域是乳糖、半乳糖等糖类mRNA转录所必需的。第二十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5224、细菌的应急反应 是指细菌在供给物全面匮乏的情况下，难以找到代用物，所作出的一种反应，帮助细菌渡过难关。应急反应的机理：空载的 tRNA激活焦磷酸转移酶鸟苷四磷酸 ppGpp鸟苷五磷酸 pppGpp大量合成关闭一些基因打开一些基因第二十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/523 1、原核基因调控机制的类型与特点 正转录调控 负转录调控 诱导 阻遏2、原核基因调节的主

10、要特点 a 、特殊代谢物对基因表达的调节 b、弱化子对基因活性的调节 c、降解物对基因活性的调节 d、细菌的应急反应小 结第二十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/524-半乳糖苷酶透过酶转乙酰酶阻遏物第二节 乳糖操纵子与负控诱导系统第二十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/525 阻遏蛋白基因（I）属于组成型的调控，是经常表达的，因此，lac操纵子通常是处于关闭状态的。 lac 操纵子的结构阻遏蛋白基因（I）启动区（P）操纵区（O）CAP-cAMP 结合部位三个结构基因ZYA第二十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/526一、酶的诱

11、导 lac 体系受调控的证据E. coli 在不含乳糖的培养基生长时，-半乳糖苷酶含量极低；当加入乳糖或半乳糖后，则迅速升高。两种含硫的乳糖类似物：异丙基巯基半乳糖苷（IPTG）巯甲基半乳糖苷（TMG）第二十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/527诱导物（inducer）：如果某物质能促使细胞产生一特定的酶，该物质就叫做诱导物；安慰诱导物（gratuitous inducers）：可诱导酶的合成，但不被所诱导的酶降解的物质称为安慰诱导物。IPTG（异丙基巯基半乳糖苷）是lac 基因的安慰诱导物。辅阻遏物（corepressor）如果某物质能阻止细胞产生一特定的酶，该物质就

12、叫做辅阻遏物。第二十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/528二、乳糖操纵子的模型及其影响因子 操纵子模型： 一个或几个结构基因与一个调节基因、一个操纵区组成一个操纵单元。这个单元称为操纵子（operon）。-半乳糖苷酶透过酶转乙酰酶阻遏物第二十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/529 操纵区位于启动子与结构基因之间，与启动子部分重叠，阻遏物结合于操作区时，即阻止RNA 聚合酶起始转录。第二十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/530乳糖操纵子控制模型的主要内容：操纵区位于启动子与结构基因之间，不能单独起始结构基因的表达；操纵区是一

13、小段DNA序列，是阻遏物结合位点；操纵与启动子部分重叠，当阻遏物与操纵区结合时，即阻止RNA 聚合酶起始转录；诱导物通过与阻遏物结合，改变其三维构象，使之不能与操纵区结合，从而激发mRNA的合成。一条多顺反子mRNA编码Z、Y、A基因；第三十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/531第三十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/532调节基因阻遏蛋白产生结合操纵区相邻启动区乳糖操纵子中调节基因的作用过程：乳糖操纵子中诱导物的作用机理：诱导物作用的对象是阻遏蛋白。阻碍RNA聚合酶与启动子区的正常结合结构基因转录成 mRNA并合成蛋白质抑制第三十二张，PPT共九十

14、页，创作于2022年6月2022/9/533（一）、lac 操纵子的本底水平表达诱导物的形成需要有-半乳糖苷酶的存在；诱导物作用需要跨膜，跨膜需要透过酶的存在；透过酶的产生又需要诱导物的存在；-半乳糖苷酶的产生又需要诱导物的存在； 在非诱导的状态下仍有少量的 lac mRNA合成，这种合成被称为本底水平的组成型合成（background level constitutive synthesis)。第三十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/534（二）、大肠杆菌对乳糖的反应乳糖本底水平透过酶进入细菌细胞结合阻遏蛋白阻遏蛋白失活， -半乳糖苷酶和透过酶表达细胞吸收大量乳糖去向葡

15、萄糖半乳糖异构乳糖结合阻遏蛋白当阻遏蛋白的浓度超过异构乳糖的浓度，细胞重新建立阻遏状态，导致 lac mRNA 的合成被抑制。本底水平-半乳糖苷酶葡萄糖-1,6-半乳糖诱导物第三十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/535（三）、阻遏物 lac I 基因产物及功能 Lac 操纵子阻遏物 mRNA 是由弱启动子控制下组成型合成的，该阻遏蛋白具有4个相同的亚基，每个亚基均含347个氨基酸残基。lacI 基因为组成型，通过启动子的上升突变体可获得较多的阻遏蛋白；-半乳糖苷酶透过酶转乙酰酶阻遏物第三十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/536调节基因 lacI

16、的突变也可导致乳糖操纵子基因的组成型表达。第三十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/537操纵区 lacO 的突变（lacO c）可导致乳糖操纵子基因的组成型表达。第三十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/538（四）、葡萄糖对 lac 操纵子的影响 在葡萄糖存在时，E. coli 优先利用葡萄糖；此时即使培养基中含有乳糖，乳糖操纵子蛋白仍然含量很低。 这是通过阻止乳糖操纵子表达来完成的，这种效应称为降解物抑制（catabolite repression）。第三十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/539葡萄糖葡萄糖-6-磷酸甘油某些

17、代谢产物抑制活性腺苷酸环化酶ATPcAMPCrp基因编码代谢物激活蛋白 CAPcAMP-CAP 葡萄糖对其它糖的代谢抑制，是通过对cAMP的抑制完成的。（五）、cAMP与代谢物激活蛋白第三十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/540 代谢物活化蛋白：CAP（ Catabolite gene activator protein ； cAMP receptor protein ）是一些启动子起始转录必需的正调控因子。 CAP 只有与 cAMP 结合后才能与其结合区域结合。第四十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/541CAP的结合部位 CAP结合部位不太固定，

18、方向也可以不同。半乳糖操纵子乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子第四十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/542三、lac operon 的其它问题 lac operon的功能是在正负两个调控体系的协调作用下实现的。阻遏蛋白封闭转录时，CAP不发挥作用；如没有CAP加强转录，即使阻遏蛋白从operator上解聚仍无转录活性； CAP组成型合成，所以cAMPCAP复合物取决于cAMP含量; 第四十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/543腺苷酸环化酶位于细胞膜上，其活性与葡萄糖运输的酶有关，因此cAMPCAP调控乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等糖类代谢有关的酶;降解物敏感型操

19、纵元：只要有葡萄糖存在，这些操纵元就不表达。第四十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5442. A基因及其生理功能 编码 -半乳糖苷乙酰基转移酶，使半乳糖苷乙酰化。该酶不参与乳糖代谢！ 生理意义：在细胞中有许多能被半乳糖苷酶降解的半乳糖苷类物质，其分解产物不能进一步代谢，积累，抑制细胞生长。半乳糖苷乙酰化后，即无毒。所以lacA虽不在乳糖降解中起作用，但可抑制有害物质的积累。第四十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5453. lac基因产物数量， 1：0.5：0.2 不同酶的数量差异，是由于在翻译水平上的调节。 方式有二: 核糖体脱离: 多顺反子的差

20、别性翻译; 内切酶作用: 在lac mRNA分子内部，a基因比z基因更易受内切酶作用.第四十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/546第四十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/547Summary of lac operon regulationGlucosecAMPLactoseTranscription of lac mRNAHighLowPresentlow rate of expressionHighLowAbsentessentially noneLowHighAbsentessentially noneLowHighPresenthigh r

21、ate of expression第四十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/548 生物细胞中的氨基酸合成， 也受操纵元的调节。细胞需要某种氨基酸时，其基因即表达，不需要时基因关闭，达到经济的原则。第三节 色氨酸操纵子与负控阻遏系统第四十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/549trp操纵子的组成邻氨基苯甲酸合成酶吲哚甘油磷酸合成酶色氨酸合成酶邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶第四十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/550 trpR, 阻遏蛋白 P，-40+18 O, -21+1 L, +1+162 结构基因一、 trp操纵子的结构大肠肝菌

22、中的 trp 操纵子第五十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/551trp操纵子的结构操纵区启动子区（P）操纵子（O）弱化子区（a）结构基因E : 邻氨基苯甲酸合成酶（与G基因为融合基因）C : 吲哚甘油磷酸合成酶B : 色氨酸合成酶亚基 D : 邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶A : 色氨酸合成酶亚基 前导区 (L)第五十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/552二、Trp operon 的阻遏系统1、Trp R 四聚体第五十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/553阻遏蛋白trp 有活性的阻遏物trp O 不转录第五十三张，PPT共九十页

23、，创作于2022年6月2022/9/5542、阻遏蛋白的结合位点 trpO -21 +1，反向重复序列trpP -40 +18活性阻遏物与trpO 的结合，RNA pol与启动子的结合发生竞争。第五十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5553、阻遏系统 主管转录是否启动， 在Trp含量高时， mRNA起始合成，但不能自动延伸，一般在trpE之前终止转录。 粗调开关弱化的mRNA第五十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/556 色氨酸操纵子: 由与色氨酸合成相关的 基因及其调控序列组成。当缺乏色氨酸时，trp 操纵子基因表达；当外源色氨酸含量较高时，操纵

24、子中的基因受到阻遏。trp操纵子的阻遏系统 色氨酸调节（trpR） 基因突变会引起 trp mRNA的组成型合成。只有在色氨酸存在的情况下，阻遏蛋白与之结合形成有活性的阻遏物，与操纵区结合关闭trp mRNA的转录。第五十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/557三、弱化子对基因表达的调节 阻遏发生时，转录的起始频率下降到 1/70，但 trp 酶系统活性却下降到 1/600。弱化作用（attenuation）：是指控制一些细菌操纵子转录终止的调节。弱化子（attenuator）：是指弱化所发生的终止子序列，并且这种终止是被调节的，这段序列就称为弱化子。1、弱化子（atte

25、nuator）第五十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5582、前导区：在 trp mRNA 5 端 trpE 基因的起始密码子前有一个长162 bp 的 mRNA片段，被称为前导区。 前导肽：由前导序列指导合成的含有14个氨基酸残基的肽称为前导肽。 前导序列结构特点：第10和11位两个密码子为色氨酸密码子。第五十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/559 弱化子，衰减子， 前导RNA，140bp第五十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/560弱化子，衰减子，第六十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/561 前导肽

26、14aa第六十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5623、trp mRNA 前导序列结构第六十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/563trp 缺乏tRNAtrp也少 核糖体通过两个trp 密码子的速度慢，占据前导序列的trp 1区2区与3区配对，不能形成终止子结构结构基因转录4、转录的弱化作用第六十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/564trp 浓度高前导肽中trp 合成速度快前导肽一直合成至其末端 核糖体占据1区和2区3区与4区配对，形成终止子结构，使转录终止第六十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/565

27、弱化子对转录调控的关键空间结构，10th and 11th codons encode trp residues (rare AA)时间，核糖体停顿在2个Trp 密码子上时，产生延迟， 此时4区未转录出来第六十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/566R P O leading seq. E D C B Atrp+为什么需要阻遏体系？ 当大量Trp 存在时，阻遏系统起作用。阻遏物与之结合，阻止先导mRNA合成。 经济Negativerepressible operon可以被最终合成产物所阻遏四、 阻遏作用与弱化作用的协调第六十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月202

28、2/9/567R P O leading seq. E D C B A少量trp+不足以结合 O 位点为什么需要弱化系统？ 当trp浓度低时，阻遏物从有活性变为无活性，速度极慢，不能很快引发trp 合成。因此需要一个能快速作出反应的系统，以保持培养基中适当的Trp水平。第六十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/568大肠肝菌中共有5个基因参与色氨酸生物合成，构成色氨酸操纵子。其中trp G-D，trp C-F为融合基因，翻译出的多肽具有双重功能。有两个启动子，一个位于操纵子5，一个位于trp G-D编码区。大肠肝菌色氨酸操纵子受到由色氨酸激活的负阻遏蛋白的调节作用。一旦转录

29、越过前导区，开始结构基因的转录，又会受弱化子的调控，感受无负载的tRNATrp的变化。使转录机器在前导区附近停止或继续结构基因的转录。第六十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/569结构基因gal E : 异构酶gal T : 半乳糖 - 磷酸尿嘧啶核苷转移酶gal K : 半乳糖激酶作用：半乳糖葡萄糖 1 磷酸第四节 其他操纵子一、 半乳糖（gal ）操纵子第六十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/570 无外源葡萄糖时，细菌也可利用半乳糖。gal 操纵子的调控与乳糖操纵子基本相同，但稍有差别： 双启动子; 双操纵区,一个在P区上游 67 73 ，另一

30、个在结构基因gal E 内部 调节基因距离结构基因很远； 在有外源葡萄糖时，仍然可以被低水平诱导。第七十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/571S2 S1转录方向-101、 cAMP CAP 对 gal 启动子的作用 S1 起始依赖于 cAMP-CAP，只有当葡萄糖不存在时才可转录，需要有半乳糖、CAP和较高浓度的cAMP; S2 起始不依赖于 cAMP-CAP，只有当葡萄糖存在时才可转录。第七十一张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/5722、双启动子的生理功能半乳糖作为惟一碳源供细胞生长半乳糖差向异构酶的作用UDP - 葡萄糖UDP - 半乳糖不依赖于c

31、AMP-CAP启动子S2依赖于 cAMP-CAP 启动子S1是大肠肝菌细胞壁合成的前体第七十二张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/573二、ara 操纵子阿拉伯糖降解araB : 核酮糖激酶araA：L-阿拉伯糖异构酶araD：L-核酮糖-5-磷酸-4-差向异构酶Operator 2Operator 1regulate genearaBADCRP 结合位点第七十三张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/574araC 与 araBAD相邻，但转录方向相反。araC 与 araBAD 的结构C 蛋白有三个结合位点：O1, O2, IC 基因为自我调节基因：缺乏 C

32、 蛋白时，araC表达；当C蛋白含量升高时，抑制 araC 的表达。具有正、负调节作用。第七十四张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/575（1）当葡萄糖水平较高、阿拉伯糖水平较低时，C蛋白与操纵区O2及araI诱导因子结合区上半区结合，形成DNA回转结构，araBAD 基因不表达；（2）当体系中有阿拉伯糖、无葡萄糖时，Ara C 与阿拉伯糖相结合，改变构象成为激活蛋白， Ara C 同源体分别与araO1和araI区结合。RNA聚合酶在Ara C 蛋白和CRP- cAMP的作用下，起始BAD 基因表达。第七十五张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/576第五节

33、 转录水平上的其它调控方式一、因子的调节作用 不同因子的选择；因子本身活性的调节；二、组蛋白类似蛋白的调节作用 在细菌细胞中存在的用来维持DNA高级结构的非特异性DNA结合蛋白，称为组蛋白类似蛋白。第七十六张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/577三、转录调控因子的作用 转录调控因子：指与基因的启动子区结合，对基因的转录起激活或抑制作用的DNA结合蛋白称为转录调控因子。四、抗终止因子的调节作用 抗终止因子是能够在特定位点阻止转录终止的一类蛋白质。这种调节作用主要见于噬菌体和少数细菌中。参与大肠肝菌抗终止作用的蛋白是Nus蛋白。第七十七张，PPT共九十页，创作于2022年6月2

34、022/9/578第七节 转录后调控一、翻译起始的调控（1）起始密码子AUG，GUG，UUG，AUU，这些不常见起始密码子翻译起始效率较低；（2）SD序列的结构及其与起始密码子AUG之间的距离，SD序列与AUG之间的距离一般为410个核苷酸为佳，9个核苷酸最佳。第七十八张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/579（3） mRNA 的二级结构 30S亚基与mRNA结合，要求mRNA 5，端有一定的空间结构，核苷酸序列的变化会改变mRNA的二级结构，影响核糖体与mRNA的结合，从而造成蛋白质合成效率的差异。第七十九张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/580二、mRNA稳定性对转录水平的影响 细胞内无用的mRNA均被核酸酶水解。大肠肝菌CsrAB调节系统。CsrABCsrA为RNA结合蛋白CsrB 为非编码的RNA分子结合mRNA分子降解速度加快结合导致第八十张，PPT共九十页，创作于2022年6月2022/9/581三、调节蛋白的调控作用 调节蛋白的表达本身也受到调控。四、反义RNA的调节