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1、实验测定核酸含量紫外分光光度法(精)实验测定核酸含量紫外分光光度法(精)4/4实验测定核酸含量紫外分光光度法(精)!?!?!ExperimentReport?生化实验?!?!级班?!学号?!SubjectSpecialtyGradeNameDate实验测定核酸含量紫外分光光度法.实验目的：学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法，熟习紫外分光光度计的基本源理和使用方法。二.实验原理：DNA和RNA都拥有紫外汲取的性质，它们的紫外汲取顶峰在260nm处。其紫外汲取特色是因为它们含有的嘌呤环和嘧啶环中的共轭双键系统的特色所决定的。蛋白质分子中含有Trp、Phe、Tyr等有共轭双键系统的氨基酸

2、，因此对紫外光在280nm处有汲取顶峰，而在260nm处的汲取仅为核酸的1/10。纯核酸260nm与280nm汲取的比值RNA应为2.0，DNA为1.8以上。核酸分子中不论DNA仍是RNA，主链构造单调，表现磷酸-核糖（脱氧核糖）的重复。由此经过测定核酸分子中磷的含量便能够基本确立核酸的含量。从而求出摩尔磷消光系数（P）来表示溶液中的核酸含量：(P=A260nm/CL注：A260nm：为260nm处光汲取值；C：为每升溶液中磷的摩尔数；L：为比色杯内径因为C=每升溶液的重量（W）/30.98，所以(P=30.98A260nm/WL天然DNA的（P）为6600；RNA的（P）为77007800。

3、磷在DNA中占9.9%，在RNA中占9.5%。1g/mlDNA溶液的光汲取值为0.020，1g/mlRNA溶液的光汲取值为0.022。所以在260nm处测的未知样的光汲取值即可求出其含量。平常以A值为1相当于50g/ml双螺旋DNA，或40g/ml单链DNA（或RNA），或20g/ml寡核苷酸计算。这个方法既迅速，又相当正确，并且不会浪费样品。三.仪器使用：752型紫外可见分光光度计：在指定波长下，将机器预热20min，以参比液作空白，开盖调理透光率T值为0%；盖盖调理透光率T值为100%，变换功能键至后，测定样品光汲取值。.操作步骤：1.用盖玻片刮取DNA细末，精准称取nmg左右DNA粗制品

4、溶于n10ml的蒸馏水中（1mgDNA粗制品溶于10ml蒸馏水）。2.在260nm波长下，以蒸馏水作空白，开盖调理透光率T值为0%；盖盖调理透光率T值为100%，变换功能键后，测定其光汲取值A值。五.结果计算：!?!?!ExperimentReport?生化实验?!?!级班?!学号?!SubjectSpecialtyGradeNameDate1.比消光系数法测定核酸含量DNA浓度(g/ml=(A260nm/0.020稀L释倍数DNA浓度(g/ml=注：A260nm：为260nm波长下的光汲取值0.020：为1g/mlDNA在260nm波长下的光汲取值L：为比色杯内径，在本试验值为1cm稀释倍数：本试验样品未经稀释，值为12.核酸的百分含量DNA

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