FACSAriaⅡ流式细胞仪上样准备

1、FACSAriaII流式细胞仪上样准备一）上样时需要准备的物品漂白水3-5L75%酒精5L无菌PBS或生理盐水5-10L（二）FACSAriaH分选时需自备的质控品Accudropbeads（分选时液滴延迟校准）：货号345249，货期需4周如需分选要提前订购。注：做分选时需自备，如无自备亦可上样，但不保证分选效果。三）上样时，样品的准备保证细胞活性：需4C冰上保存保证样品为单个细胞，不黏连：反复吹打，用尼龙膜过滤分选时，需再次培养的，收集管内需装至少1/2培养基。建立实验模板在软件界面左侧Browser面板下，依次点击NewFolder、Experiment、Specimen（均可重命名），

2、单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube,点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色。13L刃沖于啲;91TEDDL恫TdJtJKK由；CW肝曲“3h_JSd+ti-；Q匸|h-ubn9-kUE4rtWtjniI芒种斗.OEM.iyQrtO蘇1irtthQf匚弓口吐*閉iikihal二曰如FbtdtlK-mn_PDIQ.-J.AxtrnnabJt-x在软件Cytometer面板上，点击Parameters选项卡，选择实验所需荧光通道（按Ctrl键可多选），并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型（log/lin）、信号脉冲类型（H/A/W）,在右侧worksheet页面中，画出实验所

3、需模板：选择点图（双参数）或直方图（单参数），在图中选择参数，并建立所需“门”（多边形、矩形、十字象限形、线形，根据实验情况而定）。利用鼠标右键ShowPopulations选项建立图之间的联系。%-lLQ1Q2Q3Q斗ShowPopillatiuiiHier：rchyCtrl+GCreateEt；mtieti匚三ViewCtrl+RShowFopillationz1ShowGateBringtoFront*Sernit口BackOrderFopijlatiotlebyCoijrLtDuplic:mteCtrl+DPasteCtrl+VXCutCtrl+X庭|CopjrCtrl+CDelete

4、DeleteAllEvents至此，一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上，点击上样面板的load，此时AcquireData自动被激活或手动点击采集控制面板上的Acqiredata按钮，仪器开始获取样本数据。翳AcquisitionDashboardXActiveTubeWellThresholdRateTube0010evt/sBasicControlsNextTube3LoadAcquisition吕就upStoppingGate：StorageGate:AllEventsAllEventsVEventsToDisplav：ElapsedTime00:00:001000

5、06就V:1000evtVEventsToRecord:BB界-TAcqutsitionStatusPro匚矽edEvents*ThresholdCount:ElectronicAbortRate；ElectronicAbortCount:5.调整Cytometer面板中各通道电压，使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置。调整阈值(Threshold),去除碎片和噪音信号。调整上样速度(FlowRate)。6.在FSC/SSC中调整门的位置、大小和形状，使之圈住感兴趣细胞群。调节荧光通道的电压，使荧光信号位于合适的位置。LEghocytes-引16+血却印4門塑Lyrriphocytes-3

6、/16+56/45/4/19/3I1111|III11|II1111|III11|I1D21010d10SCD3FITC-ArsoCD4PE-Cy7-A7.在鼠标右键中打开数据显示，观察实验的实时结果。ShuwFupill：mtiunsSc：ilhtuFopiil注tiunShowGateBringt口FruntSendt口EackOrderFupillatiun弓byC口untIhipliceCtrl+D.PasteCtrl+V、CutCtrl+XCopyCtrl+CDeleDeleTube:3/16+56/45/4/19/3PopulationEvents%Parent%TotalAllE

7、vents10,000IIIIIIII100.0.P11,86910710.78.实验条件调整完毕后，在上样面板中设置EventsToRecord等参数，点击RecordData，开始保存数据。ActiveTube/WellThresholdRate0evtRecordDataAcquisition5&tiip.AllEventsEventsTo口就QFdStoppingTime侶电0:10000evtAcquisttioriDashboardCurrentActivtyAcquiitioriStatusStoppingGateEventsElapsedTimeTube001oevtls00:00:00+JNextTube切Load!.Acqiare