高效液相色谱法分离测定骆驼刺根状茎中的内源激素

1、高效液相色谱法分离测定骆驼 刺根状茎中的内源激素 答辩人：生科08-1班 赵曼丽1 报 告 内 容 一、研究意义二、研究内容 三、研究方法和技术路线四、研究成果五、前景与展望2研究意义 骆驼刺（Alhagi sparsifolia）属于豆科骆驼刺属植物，为多年生草本或半灌木，是重要的固沙植物。骆驼刺的幼嫩枝叶可作为家畜的饲料，同时也是一类具有开发潜力的蜜源植物和药用植物资源。骆驼刺是一种根茎型的克隆植物，借以其发达的根状茎上分布的休眠芽产生新个体而不断扩大种群。3研究对象 本实验通过在新疆古尔班通古特沙漠南缘以一个间隔子为单位进行骆驼刺根状茎野外采样的工作，再采用高效液相色谱法(HPLC)对样

2、品进行激素的分离和测定。骆驼刺骆驼刺根状茎4研究内容建立骆驼刺根状茎样品提取和纯化的方法使用高效液相色(HPLC) 对骆驼刺根状茎中的内源激素进行分离和测定5三.研究方法骆驼刺的采集和保存：2010年秋季在古尔班通古特沙漠南缘进行采样样品储存在液氮罐中并编号2011年春季及夏季在古尔班通古特沙漠南缘进行采样6 样品处理研磨醇提抽滤减压蒸发石油醚萃取水相醚相弃去水相pH调至6.4加PVP超声30 min ,抽滤滤液pH调至2.9称取样品乙酸乙酯萃取减压蒸发定容待测7样品的测定筛选色谱条件： 流动相的选择： 本实验选用甲醇水醋酸混合液为流动相，结果发现：加入一定量的醋酸可使分离得到改善；适当增加醋

3、酸含量可使内源激素在与其它成分分离的前提下峰形尖锐，减少拖尾； 柱温的选择： 柱温对色谱分析影响不显著，当柱温为25和30时，样品均能得到较好的分离效果。因此选择柱温25。 8研究结果色谱条件色谱柱：Shim-ParkC18VP- ODS；流动相：V(甲醇):V(0.75冰乙酸溶液)=45:55 检测波长：254nm流速：0.7ml/min进样量：20L 柱温：25分离测定结果如下：9标准品的图谱图1 HPLC法测定赤霉素标品图图2 HPLC法测定玉米素标品图10标准品的图谱图3 HPLC法测定生长素标品图11混标的图谱图4 HPLC法测定混合标准品图12春季样品的图谱图5 HPLC法测定春季

4、样品图13夏季样品的图谱图6 HPLC法测定夏季样品图14秋季样品的图谱图7 HPLC法测定秋季样品图15样品的图谱图8 HPLC法测定样品图16回归方程、相关系数及精密度 表1 回归方程、相关系数及精密度激素Hormones 回归方程 Regression equation相关系数 r2保留时间精密度RSD of retention time (%)峰面积精密度RSD of peak area (%)GA3y=1754990.76x-65055.490.990.051.1 ZRy=44822951.30 x-26001.06 0.990.10 2.2IAAy=8303173.69x-5163

5、8.32 0.990.45 13.0Table 1 Regression equation ,coefficient and relative standard deviation17回收率 表2 加标回收率 Table 2 Result of standard addition recovery test of hormones*Recovery=( Added -Background)/ Found100%18取得的成果1. 建立骆驼刺根状茎样品处理的方法 。2. 通过大量实验得出了骆驼刺根状茎 内源激素分离和测定的色谱条件。 3. 发表论文一篇。19参考文献：许智宏,李家洋.中国植物激素

6、研究:过去、现在和未来.植物学通报.2006,23(5):433-442李雨薇,肖浪涛.植物激素检测技术的现状和发展.生命科学仪器.2007,5(12):10-14赵锦,刘孟军,代丽,等.枣疯病病树中内源激素的变化研究.中国农业科学.2006,39(11) :2255-2260潘根生,钱利生.茶树内源激素的分离纯化与检测.检测分析.2006,(1):44-46闫师杰,郭李维,吴彩娥,等.高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素.分析化学研究简报.2010,38(6):843-847杨途熙,魏安智,郑元,等.高效液相色谱法同时分离测定仁用杏花芽中8种植物激素.分析化学研究简报.2007,35

7、(9):1359-1361郭敏敏,王清连,胡根海.利用高效液相色谱法分离和测定棉花组织培养过程中4种内源激素.生物技术通讯.2009,20(2):213-216Yi Tang, Li Wang, Chao Ma. The use of HPLC in determination of endogenous hormones in anthers of Bitter melon. Journal of Life Science. 2011,139-142Ana, E.V., J.O. Richard, F.Belen. Relationships between hormonal content

8、s and the organogenic response in Pinus pinea cotyledonsJ. Plant Physiol Biochem. 2011,(39):377-384Imtiaz,A.H., U.D.Muhammad, S.Nighat,Y.Shafqat,et al.,Direct regeneration of sugarcane plantlets: a tool to unravel genetic heterogeneityJ, Pakistan Journal of Botany.2009,41(2):498-500李甜江,李根前,贺斌,等.克隆植物中国沙棘生长对外源植物激素的响应.生态学报.2010,30(3):659-66720 据目前，针对骆驼刺的研究主要集中生物生态适应性的研究，而关于内源激素的研究尚属空白，我们目前正在展开以下研究：骆驼刺根状茎中植物内源激素的分离和测定的最适条件；在不同因素（温度、流动相极性）影响下的变化规律，最终确定出骆驼刺根状茎中植物内源激素测定的最适色谱条件；初步