凉燥致病机制的实验研究

1、凉燥致病机制的实验研究【关键词】凉燥致病机制Keyrds：l-Dry;Pathgeniehanis1材料与方法1.1动物无特定病原体级SPF昆明种小鼠216只，体重181g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，答应证号：SXK鄂2022-2022。1.2仪器与试剂1.3菌株金黄色葡萄球菌标准菌株(AT25923，北京天坛生物制品公司)。1.4方法1.4.1动物模型及分组1.4.2病理组织学观察断颈处死小鼠，常规取气管1.5，右肺组织中4010g/只、背部皮肤0.50.5及左足垫皮肤，HE染色、镜检。1.4.3气管上皮纤毛运动实验iliaveentfTrahealEpitheliu,in/：按

2、文献方法2。1.4.4气道液黏多糖Respiratryseretinfuplysahride,RS,g/l测定：咔唑比色法，参考文献方法2。1.4.5气道液IgGIgG-R检测常规气管插管，取灌洗液别离上清，按酶联免疫吸附试验ELISA试剂盒说明书检测。以包被液作空白对照，PBSpH7.410%小牛血清作阴性对照。每份样品检测3次，记录标本均值与阴性对照P/N倍数之平均值。1.4.6血液流变学检测3受血液流变仪对血量标本的限制，每组取9只小鼠眼球血合为1份标本进展测试，3份/组。肝素抗凝管取眼球血，4h内测定血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数。1.4.7细菌攻击实验1.4.8气管细胞凋亡

3、检测第14天取气管切片，按脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法TUNEL试剂盒程序操作。结果判断：气管上皮细胞核内出现棕黄色颗粒为TUNEL染色阳性。镜下随机计数200个细胞，计算：细胞凋亡率(%)=凋亡细胞数200100%1.4.9气管细胞bl-2基因，bax基因表达检测第14天常规取气管标本切片、按试剂盒说明书操作。结果判断：气管上皮细胞浆内出现棕黄色颗粒为bl-2或bax表达阳性。镜下计数500个细胞，计算：阳性指数PI=阳性细胞数记数细胞数100%1.4.10统计学处理实验数据以s表示，采用SPSS13.0软件，资料之间比拟用ANVA分析，显着性检验采用多个样本均数间q检验Nea

4、n-Keuls法；各组第7天与第14天比拟用t检验，P0.05认为差异有统计学意义，检验水准为双侧=0.05。2结果2.1气管、肺构造观察常温常湿组第7、第14天气管上皮构造完好、纤毛整齐，气管腺体、细支气管与肺泡未见异常，背部皮肤构造完好，毛球数多，新生毛干数丰富且层次明晰，足垫皮肤汗腺丰富。常温燥组第14天部分气管纤毛倒伏、黏连，肺泡轻度淤血，皮肤未见异常；凉燥组第14天气管上皮鳞状化生，气管纤毛多呈灶状缺损，20%气管浆液腺上皮黏液腺化生，肺部淤血、水肿明显，均较第7天严重；背部皮肤无明显异常，但足垫部皮肤腺体明显减少与皮下结缔组织增生。2.3凉燥对小鼠血液流变学的影响见表3。与常温常湿

5、组比拟，凉燥组血液流变学指标改变无显著性。表3凉燥对小鼠血液黏度的影响(略)2.4凉燥相兼细菌攻击对小鼠肺细菌数BQ、呼吸道液黏多糖RS与IgG-R的影响见表4。表4细菌攻击对凉燥小鼠BQ、RS与IgG-R的影响略2.5凉燥对气管细胞凋亡与bl-2基因、bax基因表达的影响见表5。表5凉燥对小鼠气管上皮细胞bl-2、bax基因表达与细胞凋亡的影响(略)3讨论按表1条件处理，病理检查可见凉燥组第14天气管上皮鳞状化生与炎性细胞浸润，气管纤毛多呈灶状缺损，肺泡充血、水肿明显，说明凉燥伤肺、伤津，肺失其濡养而致组织细胞构造受损；20%气管浆液腺上皮黏液腺化生，提示与凉燥肺津生成障碍相关；足垫皮肤汗腺

6、明显减少与结缔组织增生等，说明肺宣输失司、皮毛腠理失之濡润，合以卫表不固，致“燥气先伤于华盖。本结果为凉燥致病提供组织学证据。气道液内含黏蛋白主为黏多糖和蛋白质，覆盖于黏膜外表形成黏液毯，是气道的重要保护性屏障之一；RS与气道液分泌呈正相关，其主要作用是潮湿气道黏膜、保护上皮的纤毛运动。与常温常湿组比拟，凉燥组第7天RS减少，显示凉燥早期气道液分泌严重减少而具“干之特点。值得注意的是凉燥组第14天RS明显增多P0.01，其机理可能是凉燥之邪的凉气可伤肺阳而致肺津不化、凝聚成痰饮，故气道液明显增加。气道纤毛受“凉凝之气道液刺激而病理性运动加快。凉燥组细菌攻击后RS明显减少，也提示生物病原攻击可加

7、重气道分泌障碍与“正气受损5。IgG-R是气道重要免疫防御成分之一，凉燥组第714天以及细菌攻击后RS增高，与机体的保护性反响有关。凉燥相兼细菌攻击，外那么卫滞邪郁，内那么津少气虚，抗邪无力那么病邪入里；肺津不化那么凝成痰饮，细菌及其毒素可加重肺津生成障碍与宣输失司更甚，加之气道部分御邪屏障受损那么对生物病原攻击的敏感性增高，但故凉燥组肺细菌数是常温常湿组的7.1倍，结果提示凉燥病机之一与损伤气道分泌与“纤毛-黏液毯有关。凉燥组血液黏度变化不明显，但红细胞刚性指数增高，提示血液运行障碍，其机理有待研究。bl-2属于低丰度表达基因，编码的bl-2/bax家族蛋白如bl-2/bax二聚体为抑制细胞

8、凋亡构型，bax/bax二聚体可诱导细胞凋亡。结果显示，常温常湿组与凉燥组气管细胞凋亡率均较低0.3%，但凉燥组气管bl-2阳性细胞多见于气管纤毛缺损或鳞状上皮化生处，提示与凉燥致病机制相关。结果说明，凉燥主要病机可能是：凉燥伤津，凉燥之邪的凉气可伤肺阳而致肺津不化，凝集成痰饮，合以宣输失司，皮毛腠理失养而致卫表不固；肺津生成锐减，气道“纤毛-黏液毯生物防御屏障受损，合以对生物病原攻击敏感性增加等综合因素致玻凉燥致气管细胞bl-2基因表达下调与凉燥致病机制的相关性值得研究。【参考文献】1丁建中，张六通，邱幸凡，等.外燥对小鼠气管上皮纤毛运动与呼吸道液分泌的影响J.中医杂志，2022，488：607.2徐叔云，卞如濂，陈修.药理学实验方法，第3版.北京：人民卫生出版社，2002：1360.3童一秋.医院体检化