高中微生物的实验室培养学案及答案教案

1、课题1微生物的实验室培养【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。基础知识一、培养基概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为_培养基和 培养基。2 .营养构成：各种培养基一般都含有、和，此外还要满足微生物生长对、以及 的要求。3.培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 培养霉菌时需将培养基PH调至培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供 条件。思考1从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等

2、，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。二、无菌技术：阅读“无菌技术，讨论回答以下问题:一获得纯净培养物的关键是,具体操作如下：1.对实验操作的、操作者的和进行一O2.将用于微生物培养的和等器具讲行。3.为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在一附近进行。4.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。 二消毒和灭菌1 .消毒是指。常用的方法有、消毒法。2 .灭菌是指。常用的方法有：、灭菌。分别适用于那些用具？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？思考3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太

3、挤，目的是什么？思考4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是;随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为，并维持 ;最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止实验操作一一大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是,本实验可分成 和两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：、 o思考5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？思考6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？倒平板：待培养基冷却至C左右时在酒精灯火焰附近操作进

4、行。其过程是：在火焰旁右手拿，左手;使锥形瓶的瓶口；左手将培养皿, 右手, 立亥，盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板。思考7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考8倒平板的目的是什么？思考9假设皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？思考10配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1.平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：将 在酒精灯火焰上灼烧直至。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到的目的。将冷却的接种

5、环伸入到。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。将平板 培养。思考11取菌种前灼烧接种环的目的是什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？取菌种和划线前都要求接种环冷莉后进行，其目的是？最后灼烧接种环的目的是 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？2.稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度游，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：取盛有 mL水的无菌试管6支,编号101、102、103、10

6、4、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。思考12系列稀释操作的注意事项是什么？思考13涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，假设有菌落形成，说明什么？2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3培养12h和24h后的菌落大小七；菌落分布位置？原因？思考14在某培养基上出现了 3种特征不同的菌落是什么原因？思考15频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？典例精析 TOC o 1-5 h z 【例1】以下关

7、于微生物营养的说法，正确的是A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量c.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也能提供能量【例2】细类型二过程技术别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A.接种针、手、培养基B.高压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅类型三制备培养基【例3】以下关于面备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯c.待培养基冷却至50 r左右时进行倒平板D.待平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置【例4】下面

8、对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染B.消灭杂菌C.培养基和发酵设备都必须灭菌。.灭菌必须在接种前基础自测一、选择题、 以下有关培养基的叙述正确的是A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌不同培养基的具体配方不同，但一般都含A.碳源、磷酸盐和维生素B.氮源和维生素C.水、碳源、氮源和无机盐D.碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 获得纯净培养物的关键是A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌B接种纯种细菌C.适宜环境条件下培养

9、D.防止外来杂菌的入侵D.防止外来杂菌的入侵 以下常用的无菌操作中错误的是A.用酒精擦拭双手Bc 实验操作应在酒精灯火焰附近进行D制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是A .计算、称量、倒平板、溶化、灭菌BC .计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D 有关倒平板的操作错误的是A 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上Bc .将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D.用氯气消毒水源.玻璃器皿吸管、培养皿可用酒精擦拭.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰.等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 有关平板划线操作正确的是 有关平板划线操作正确的是A.使用已灭菌的接种

10、环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c.将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D.最后将平板倒置，放人培养箱中培养 有关稀释涂布平板法，叙述错误的是A.首先将菌液进行一系列的梯度稀释B.然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C.再放在适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 涂布平板操作需要用到A.接种环、滴管、酒精灯B.接种环、移液管、酒精灯C.涂布器、移液管、酒精灯D.涂布器、接种环、酒精灯 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37r恒温箱的目的是A.对比观察培养基有没有被微生物利用B.对比分

11、析培养基是否被杂菌污染C.没必要放人未接种的培养基D.为了下次接种时再使用11关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源11关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时是氮源C.除水以外的无机物只提供无机盐12.作为自养生物唯一碳源的是A糖类B石油 C二氧化碳.大肠杆菌的代谢类型是A自养需氧 B异氧严格厌氧.菌种保藏应控制的条件是1湿度2低温 3干燥A 14 6B 236B.凡碳源都提供能量D.无机氮源也能提供能量D花生粉饼C异养需氧 D异养兼性厌氧4有光 5隔绝空气 6适当有氧C 1 56 D 23 5以下以下物质中，不能用作酵母菌碳源的是A含碳有机物

12、B蛋白胨 C含碳无机物 D花生粉饼等天然物质平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是A利于大肠杆菌的接种A利于大肠杆菌的接种C利于培养的冷却B防止杂菌污染D防止皿盖冷却水倒流入培养基含C、H、O、N的大分子化合物可以作为()A异养微生物的氮源、能源B异养微生物的碳源、氮源C自养微生物的氮源、能源、碳源D自养微生物的氮源、能源、碳源二、非选择题 鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在 中保温1-2天看有无,如果没有 说明制作合格，反之则不合格。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手(1)、(

13、2) 、(3) 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。根据你所掌握的知识分析导致生产失败的根源是什么？由此得出研究和应用微生物的前提是防止在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么？在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？参考答案基础知识一、1.营养物质 生长繁殖 液体 固体2水.碳源 氮源无机盐PH特殊营养物质 氧气3维生素，酸性，中性或微碱性，无氧思考1：C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。二一

14、杂菌1.空间衣着手，清洁和消毒2.器皿接种用具，培养基，灭菌3.酒精灯火焰4.周围的物品二1.略 巴氏消 酒精2.略 灼烧 干热 高压蒸气思考2：防止感染实验操作者。思考3避免妨碍热空气流通。思考45有利于锅内温度升高，lOOkPa, 121C, 1530,零，容器中的液体暴沸，实验操作、一1计算称量f溶化灭菌f倒平板思考5：防止牛肉膏吸收空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。思考6】糖维生素和有机氮2： 50,锥形瓶，拔出棉塞，迅速通过火焰，打开一条缝隙，将培养基倒入培养皿，倒过来放置思考n消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培养基。思考85防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。思考9不能

15、。空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。思考105增大接种面积，保持通气并防止杂荣感染。答案。二、平板划线.稀释涂布平板1通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线，接种环，烧红。，消灭试管口杂菌。菌液中取出一环菌种。，伸入平板内划35条平行线，第一区划线末端开始向第二区域内，第五区的划线与第一区划线，倒置放在培养箱中思考11消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种：防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。2不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，9mL，灭菌。，1。，1思考12操作中试管口和移液管应在离火焰12cm处。整个操作过

16、程中使用了 1支移液管结果分析与评价1对照，培养基灭菌不彻底。2呈立色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3大小不同；菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。思考14有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。思考15临时保藏法和甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4C冰箱中，每36个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在一20C冷冻箱中。【例1】解析：此题考查学生对微生物的营养和能源的理解。对异养微生物来说，含C、H、0、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能

17、提供能量。CO2和N。是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D启示：含C、H、o、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；无机物也可提供碳源、氮源和能源。【例2】 解析：此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。答案：C启示：微生物培养过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，分别又有各种不同的方法。对实验操作的空间、操作者的衣着和手

18、，进行清洁和消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。【例3】解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。待培养基冷却至50 r，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A启示：固体培养基的制作步骤是：“计算f称量f溶化f灭菌f倒平板顺序不能颠倒。并且在制作过程特别是倒平板时彻底做到“无菌。【例4】解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物(杂菌)，所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B基础自测一、1. A 2. C 3. D 4