养殖池塘小型底栖动物简易分离方法

1、养殖池塘小型底栖动物分离方法研究研究对象生活史的全部或大部分时间生活于水体底部的水生动物能通过500m孔径筛网但不能通过42m孔径筛网的动物为小型底栖动物（meiofauna）自由生活的线虫 (Nematoda) 桡足类 (Copepoda, 主要 为猛水蚤Harpacticoida) 寡毛类(Oligochaeta)多毛类(Polychaeta)缓步动物 (Tardigrada)介形类 (Ostracoda)涡虫 (Turbellaria)腹毛虫 (Gastrotricha)颚咽动物 (Gnotostomulida)有甲动物(Loricefera)须虾类 (Mystacocarida) 螨类

2、 (Halacarida)动吻虫 (Kinorhyncha)主要类群(FENCHEL 1978; COULL, 1988)研究意义沉积物中有机碎屑的开发者和底栖微藻及细菌的主要消耗者与细菌, 原生动物等微型生物组成底栖小/微食物网 是许多经济鱼、虾和贝类幼体的优质饵料, 保持水质稳定，提高物质转化效率，促进能量传递 物种多样性高, 个体数量,分布广泛, 个体微小、繁殖率高,生命周期短, 对微尺度环境改变反应快速, 是环境污染监测的重要生物指标早期研究阶段 (1900-1950)研究简史系统分类的加速发展和群落定性描述（20世纪50年代初-60年代中期）生态生理实验和生态系统动力学研究的起端（6

3、0年代后期70年代）实验生物海洋学研究（80年代以来）Kowalevsky (1901)Giard(1904) Cobb (1920)Remane (1927, 1933)Mare (1942) 国际小型底栖动物学家协会的成立小型底栖动物研究指南McIntyre (1969)Fenchel et al., （1970）评价生态系统，环境改变的指示者 Lorenzen（1994）小型底栖动物导论小型底栖动物学成为独立的成熟的前沿学科研究的中心养殖池塘国内研究动态起步晚 20 世纪 70-80 年代郭玉清，张志南，慕芳红等人以陆架海域为主，启动于渤海，在黄海、东海、南海陆续展开以分类学和多样性调查

4、为主养殖池塘小型底栖动物研究于子山, 张志南. 虾池小型底栖动物的数量研究,1994翟雪梅, 张志南. 虾池生态系能流结构分析, 1998郭玉清, 叶兆弘. 虾池小型底栖动物类群组成和数量分布,2008小型底栖动物分离方法手工直接挑选法淘洗法、移注法、冰浮法、耗氧法和密度梯度法等将硅溶胶应用于分离（De Jonge et al., 1977）用Ludox 作为介质的离心分离方法（NICHOLS, 1979）硅胶液密度梯度离心技术是最有效的提取方法（McIntyre & Warwick 1984 ; Giere, 1993）硅胶液密度梯度离心技术所有进行分离小型底栖生物的技术, 都依赖于沉积物和

5、小型底栖动物间密度的差异底栖样品比重2.52.8，小型底栖动物比重1.15，硅胶溶液1.21.3高速离心机Ludox HS 40 550元/L由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的铝酸盐溶胶 (Percoll)优点精确分离率高通用标准缺点成本高仪器需求高不利于推广硅胶液密度梯度离心技术所有进行分离小型底栖生物的技术, 都依赖于沉积物和小型底栖动物间密度的差异底栖样品比重2.52.8，小型底栖动物比重1.15，硅胶溶液1.21.3高速离心机Ludox HS 40 550元/L由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的铝酸盐溶胶 (Percoll)目标和措施简易分离法分离液成本NaCl溶液蔗糖溶液简化操作

6、步骤用搅拌沉淀代替高速离心降低仪器要求不使用高速离心机保证分离效果使用人工底泥进行校正测试预实验调查虾塘中小型底栖动物的类群和丰度确认使用福尔马林固定的必要性确定蔗糖溶液和NaCl溶液的浓度简易分离法研究以克氏原螯虾养殖池塘里常见的水蚯蚓和线虫为小型底栖动物的代表，比较纯水、饱和蔗糖溶液、饱和NaCl溶液和硅胶溶液对小型底栖动物的分离比率分别取50条水蚯蚓和100条线虫经5%福尔马林固定，虎红染色剂染色后混入10ml未经染色的底泥土中，制成一份待测样品向待测样品中加入200ml分离液，并快速搅拌20s，静止5s待粗沙粒沉淀，倒出上层清液，在体式显微镜下记录清液中染色的水蚯蚓和线虫的数量，计算分

7、离比率分离液分为水、饱和蔗糖溶液和饱和食盐溶液三组，每组设置5个重复对照组使用硅胶溶液Ludox HS40作为分离液，使用密度梯度离心法数据分析LSD (LEAST-SIGNIFICANT DIFFERENCE) 最小显著差数法DUNCAN (DUNCANS MULTIPLE RANGE TEST) 新复极差法（SSR）实验结果实验结果饱和NaCl溶液饱和蔗糖溶液纯净水Ludox HS 40水蚯蚓61.2%82%3.2%94.4%线虫84%47%6.6%93.8%水蚯蚓分离率：Ludox HS 40 饱和蔗糖溶液 饱和盐溶液 纯净水线虫分离率： Ludox HS 40 饱和盐溶液 饱和蔗糖溶液 纯净水分差分析表明四种不同分离液的分离率均有显著差异讨论器材简单，分离液易获得，操作简单，时间短使用饱和蔗糖溶液分离水蚯蚓，使用饱和NaCl溶液分离线虫，分离率可以达到80%以上此方法可用于日常养殖生产中对池塘底