生物化学实验期末蚕豆病设计性实验报告课件

1、年级：xxxx级 专业：xxx 班级：xxx设计性实验报告 第x实验室 第x组时间：xxxx年xx月xx日星期x报告人：xxx组员：xxx,xxx,xxx,xxx,xxx,xxx,xxx,xxx,xxx,xxx案例分析 案例分析案例： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样（发生溶血性贫血）色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩c膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛

2、，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞 1.981012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5mol/L，结合胆红素13.7mol/L，未结合胆红素71.8mol/L，尿蛋白（+），潜血(+)，尿胆红素()，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 红细胞 1.981012/L （6.0-7.0）1012/L 血红蛋白 53g/L （170-200)g/L 血清总胆红素 85.5mol/L （3.4-17.1）mol/L 结合胆红素 13.7mol/L 03.42mol/L 未结合胆红素 71.8mol/L 013.68mol/L 尿蛋白（+） 潜血(+) 尿胆红素() 尿胆素原(+)

3、 实验室检查项目正常值患儿检查值案例分析 皮肤及巩膜黄染 黄疸发病前曾食用蚕豆其姐亦类似病史Bp：80/60mmHgP：150bpm 排尿呈酱油样溶血性贫血T：38 体温升高B:40bpm呼吸急促蚕豆病红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症1案例分析G6PD基因分析G6PD确诊试验红细胞G6PD活性测定G6PD荧光斑点试验G6PD筛选试验高铁血红蛋白还原试验特异性不高国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐 实验设计G6PD荧光斑点试验2 G6PD 实验原理：葡萄糖-6-磷酸（G6P）在G6PD作用下形成6-磷酸葡萄糖（6PGA）,同时使NADP转变为NADPH,后者在340nm波长紫外线照射下产生

4、荧光。所以将含有G6P和NADP等的混合试剂与血混匀，通过观察滤纸上有荧光出现时间可判断G6PD活性。 NADP NADPH G6P 6PGA实验原理340nm紫外线荧光实验流程G6PD荧光斑点试验 1反应液的配制：10mmol/l G6P钠盐0.1ml、7.5mmol/l NADP0.1ml、1g/dl皂素0.2ml、250mmol/l磷酸盐缓冲液（pH7.4）0.3ml，蒸馏水0.3ml混匀。其中除皂素外，均可于4下保存半月，皂素必须新鲜配制。反应混合液在室温和冰箱中均不易保存。因此最好在临用前根据用量临时混合。3.取试管，加10l全血+100l反应液，混匀，取一滴于滤纸上（第一斑点 ）作

5、为对照；2.将上液置于37水浴10min ，再取一小滴滴于滤纸上（第二斑点）实验组 ； 4.晾干后，于长波紫外灯下（365nm）观察结果并计时 。实验流程G6PD荧光斑点试验 正常人： 0min斑点无荧光，5-10min出现， 10min荧光最强 临床诊断： 轻度缺陷者：0-10min荧光很弱或不出现 中度缺陷者：10-30min出现荧光 严重缺陷者：30min内不出现荧光结果分析G6PD荧光斑点试验 G-6-PD活性测定的操作表（Zinkham法 )试管 对照管 测定管 NADP液（ml） 0.1 0.1Tris液（ml） 0.1 0.1氯化镁液（ml） 0.1 0.1蒸馏水（ml） 0.6

6、8 0.58G6P液（ml） 0.1 37预热溶血液（l） 20 20立即340nm处测吸光度，以对照管调零，37恒温，每分钟观察1次，记录吸光度的变化实验流程红细胞G6PD活性测定计算公式：G-6-PD活性（U/gHb） =A/min1000/6.221020/20 Hb(gL-1) A/min:每min吸光度的平均变化值1000/6.22:为微摩尔消光系数1020/20:总容量与溶血液的量之比； 实验流程红细胞G6PD活性测定从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果3GSH的主要作用： 保护红细胞内的含硫氢基 （-SH）血红蛋白、酶蛋白和膜 蛋白的完整性，免遭氧化 与谷胱甘肽过氧化酶共

7、同使 H2O2还原成H2O红细胞 膜破裂溶血性贫血 （面色苍白）游离Hb肾 吸收阈值血红蛋白尿/ 含铁血黄素尿G6PDNADPH+H+GSH红细胞的抗氧化能力血尿、酱油样尿液皮肤及巩膜黄染 红细胞 1.981012/L （6.0-7.0）1012/L 血红蛋白 53g/L （170-200)g/L 血清总胆红素 85.5mol/L （3.4-17.1）mol/L 结合胆红素 13.7mol/L 03.42mol/L 未结合胆红素 71.8mol/L 013.68mol/L 尿蛋白（+） 潜血(+) 尿胆红素() 尿胆素原(+) 实验室检查项目正常值患儿检查值案例分析体温升高红细胞破裂血红蛋白暴露免疫系统攻击导致患儿体温升高溶血性贫血机体缺氧 具有载氧能力的Hb含量下降呼吸急促 此外还可以用通过扩增葡G6PD基因第10，11，12，13外显子639bpDNA片段结合寡核苷酸探针斑点杂交技术、PCR/SSCP分析法、DNA序列分析、探针技术等方法检测上述基因的点突变。溶血性贫血体型瘦小缺乏营养营养物质运输不足相关参考文献1红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症OL /view/10416078