NSFC申请报告-韩苏夏

国家自然科学基金申请书撰写指导西安交通高校医学院第一附属医院韩苏夏国家自然科学基金的重要性医院须要科室须要团队须要个人须要学科标记探讨实力团队建设人才培育申请书撰写前的准备细致阅读《国家自然科学基金条例》等相关文件理思路----擅长发觉临床中存在的问题，明确自己思路找问题----通过临床问题凝练出学科探讨的科学问题、假说、假设申请书撰写前的准备看文献寻方向------1年、3年、5年内大杂志、大综述，通过文献找寻科学问题、假说、假设是否成立的依据选课题--------选题最好以问题为导向，不要以技术为导向，须要留意方向性，创新性，好用性和可行性前期铺垫-----预试验结果2023/1/155标题标题是申请书的灵魂、精髓和核心，是摘要的高度概括。标题是你对评审专家说的第一句话,应体现创新点，新颖 ，吸引眼球！简洁明确，具体清晰！有新意的关键词可以刻意凸现!撰写模式一般接受“探讨方法（手段）+探讨对象+探讨目标”的模式（须要依次表达清晰），不宜过长，字数≤30留意事项创新、创新、再创新简洁明确、修辞正确、有感召力和可信度检索类似标题，避开撞车尽量不要简写2023/1/156HCV感染及其所致肝癌经基因组免疫途径防治的试验探讨宫颈癌诊断新策略：通过FRET设计的TAT－波长转换双分子信标应用的基础探讨重组慢病毒介导TAT-apoptin融蛋白治疗肝癌的试验探讨Apoptin特异性诱导肝脏肿瘤细胞凋亡的机制：MAP4K4及其下游分子扮演角色？DDRsignaling诱导Apoptin促肿瘤放射增敏治疗的探讨

标题2023/1/157基本信息申报日期精确、恰当（可向科研管理人员询问）申请人信息精确，工作时间每年不少于六个月资助类别、探讨期限和申请经费要恰当中英文关键词正确、规范2023/1/158投送学科细致分析当年的招标指南。分析自己申报课题的领域和探讨范围。对于正在进行的探讨，留意发觉有基础性工作与招标指南是可以靠得上的？即便是靠不上，也要留意联系和搭车。对于拟开展的探讨，要留意整合各类资源（平常的信息积累）。分析各个学科口的指南，找寻最恰当的学科投送。——评审人（专家心态：只有很少的份额呀10～15%，原委给谁呢？）2023/1/159摘要是敲门砖摘要是整个申请书的提纲，是申请人最终写的，却是评审专家最先看的内容，因此是申请书的重中之重，确定要反复修改，精益求精！要求：在短短的几百字内要使外行和内行评审人，感觉到摘要内容充溢着新意、撰写和阐述的条理性特殊清晰。能够引起进一步阅读的爱好。达到的目标：通过批阅摘要，了解到你所申请项目目前探讨存在的科学问题、现状，想要做什么、怎么做、探讨的目的和重要意义。2023/1/1510摘要一般撰写格式应用基础探讨目前应用存在问题是…探讨目的…选用…材料，运用…技术，接受…方法，实现…目标为……奠定基础／供应……思路2023/1/1511既往运用表达自杀基因的复制缺欠病毒治疗恶性肿瘤的探讨中，发觉复制缺欠病毒不能将治疗基因全部转导至体内全部的肿瘤细胞，而启动自杀基因只能杀死导入治疗基因的肿瘤，残存瘤细胞会快速的增殖，导致治疗的失败。本课题目的是探寻更有效、平安和特异治疗恶性肿瘤的生物学方法。我们选用鸡贫血病毒特异诱导肿瘤细胞凋亡(不损害正常细胞)的VP3(apoptin)为目的基因，运用重组慢病毒技术来增加目的基因在肝癌内的转导实力；运用信号肽和引导肽序列来实现非肿瘤细胞转导后的长期持续分泌表达；接受Ant-apoptin和TAT-apoptin融合表达方式保证治疗分子可以进入未转导重组病毒的残余瘤细胞和已经转移的瘤细胞,并确保治疗分子导入瘤细胞核内的靶部位。这样，在确保平安性的同时也增加其治疗作用，为肝癌的基因治疗创立新方法和更有效的手段，使肿瘤的基因治疗有新突破。2023/1/1512基础探讨用……方法（手段）进行……探讨，探究/证明……问题，对阐明……机制／揭示……规律有重要意义，为……奠定基础／供应……思路如是连续项目，请简述前期结果，提出新问题摘要一般撰写格式2023/1/1513本课题组前期探讨结果证明：Apoptin——这一来源于鸡贫血病毒的小蛋白，能够特异性诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无凋亡诱导作用。MAP4K4是一种丝苏氨酸蛋白激酶，与Apoptin存在特异性结合位点。我们前期试验发觉MAP4K4在肝脏肿瘤中的表达高于肝正常组织，结合相关文献作出大胆推想：MAP4K4使Apoptin磷酸化，磷酸化后的Apoptin发生多聚化并与某些蛋白质结合，形成蛋白质复合体移位至细胞核，进入细胞核的复合体与核内的DNA结合影响DNA的有效转录合成，诱导肿瘤细胞凋亡。本课题拟通过调整MAP4K4表达水平，视察其对Apoptin特异性诱导肝肿瘤细胞凋亡的影响及相关蛋白的变更，探讨MAP4K4及其下游分子在Apoptin特异性诱导肝肿瘤细胞凋亡的作用。通过以上探讨阐明Apoptin诱导肝脏肿瘤细胞凋亡的分子机制，为探寻新的肿瘤标记物，且开展以此为靶标的肿瘤诊疗奠定理论基础。2023/1/1514立项依据（字数限制在2500字以内）探讨意义撰写模式探讨领域→主要问题→热点探讨方向热点探讨方向→尚未解决的具体科学问题→提出假设→阐述解决该问题（探讨目标）的科学贡献（理论意义或应用前景）留意事项逻辑性强，条理清晰；提出的问题精确，设想在理论上可行写成国内外探讨现状，没有提炼出探讨的意义完全没有阐述课题的基本探讨内容阐述探讨的必要性、意义和价值对科学意义的阐述不足或夸大2023/1/1515原发性肝癌(primaryhepatocelluarcarcinoma)是一种常见的恶性肿瘤,适于手术切除的病例很少，且术后复发率高达60-80%，而放疗和化疗的缓解率又很低。我国是肝癌的高发区，每年约有10万人死于肝癌，占我国恶性肿瘤死亡的其次位[1]。因此肝癌的治疗探讨是急需解决的重要课题，新的治疗药物探讨燃眉之急,而基于肿瘤起源、发展的困难性，探寻一种有效的、平安的、特异的、提高缓解率的治疗药物更是当务之急。十年前已经起先探讨运用病毒载体转导杀伤基因来治疗肝癌,此技术对体外培育的肿瘤细胞显示了志向的杀伤作用,人们对此寄以很高的期望，但运用于临床病人和在体的肝癌动物时,其疗效是不令人满足的，缘由是其基因转导效率和表达水平偏低。因此，虽然逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、单纯疱疹病毒等各种病毒载体相继被探讨者运用,但距期望的效果甚远。究其缘由,认为与重组病毒的非复制性有关。因为任何一种非复制性重组病毒,无论通过哪种运用方法，均不行能感染实体瘤组织内或已经转移的全部肿瘤细胞，自杀基因只能使转导了病毒的肿瘤细胞死亡，随着已转导病毒的肿瘤细胞死亡,治疗基因的表达也就趋于终止，未转导病毒的肿瘤细胞会快速生长使肿瘤复发。病毒的非复制性是确保其平安性的保证,虽然近来也有探讨者运用条件性复制病毒和对人类少有致病性的复制性微小病毒治疗实体瘤的探讨报告,但其平安性仍不能确保，人类将面临试验室产生的、能毁灭人类的新病毒。因此，在确保平安性的条件下,需探寻一种运用非复制重组病毒有效杀伤实体瘤的新理论和新方法。立项依据国内外探讨现状及发展动态分析包括探讨现状，存在问题，解决思路！撰写要点从探讨领域切入，引出当前的热点探讨方向从探讨方向绽开，阐明在该方向上存在的问题围绕存在的问题，提出该方面的空白点、未知数和难点展示我们解决问题的理论依据或试验依据适时适量地提示我们的前期工作必要时对拟接受的技术方法进行介绍和分析精确提炼出本项目的探讨设想近年来，体外增殖鸡贫血病毒(chickenanemiavirus,CAV)的探讨结果表明：CAV仅在转化的鸡细胞系复制，而且依靠转化细胞的特定细胞组分来完成自己的复制，这一生物学特征也在人源细胞系的试验中得到证明。分子病毒学探讨表明：CAV的VP3蛋白（又称Apoptin）和VP2蛋白协同作用,变更细胞线粒体的膜电位使线粒体释放细胞色素C和凋亡诱导因子，导致宿主细胞的快速凋亡[2,3]。体外合成或基因工程表达的CAVApoptin特异的引起多种人源性恶性肿瘤细胞的凋亡[3,4],但对正常二倍体体细胞无作用[5,6]。这种对细胞的选择性凋亡方式，说明Apoptin在将来肿瘤治疗中具有迷人的巨大应用前景[7],这种特异性杀伤肿瘤细胞和恶性转化细胞,不损害正常细胞的蛋白质和相关肽的发觉为运用重组病毒治疗肿瘤带来了转机。进一步的探讨表明，Apoptin的肿瘤细胞特异性与其在细胞中的亚细胞定位有关，在转化或肿瘤细胞中，Apoptin定位于细胞核，而在正常细胞中定位于细胞质。Apoptin的磷酸化确定其核定位，在肿瘤细胞中，Apoptin被磷酸化，磷酸化的Apoptin进入细胞核，并诱导细胞凋亡。而且Apoptin的表达水平是诱导凋亡有效性的重要取决条件[8]。因此，我们运用重组慢病毒技术来表达这类蛋白质和肽物质,以提高Apoptin的基因转导效率并使其能够持续高表达。当重组病毒注射到实体瘤之后,它既能感染肿瘤细胞又能感染实体瘤中的非肿瘤细胞,在感染了重组病毒的肿瘤细胞死亡之后,非肿瘤细胞不会因为表达这些蛋白出现任何损害,它在一个较长的时间内可以持续表达杀伤肿瘤细胞的分子。同时一些探讨揭示，有效的诱导肿瘤细胞凋亡既须要Apopotin的高表达也须要其核定位[9,10]。虽然在Apoptin的分子结构中存在核定位信号[11,12,13],但在人和动物的实体瘤内,如肝癌,实现以上条件还有很大技术困难[14,15]。若我们能通过分泌表达原理,在表达分子的氨基或氨基端融合一种具有蛋白质转导结构域(PTD)的肽,非肿瘤细胞内的表达分子就会自由进入残存的肿瘤细胞或转移的肿瘤细胞起到持续性追杀肿瘤的目的，这样蛋白质转导结构域(PTD)就增加了Ant-Apoptin或TAT-Apoptin向细胞和细胞核内的转导。上述思想在确保重组病毒平安性的条件下,提高并持续性增加了杀伤肿瘤的蛋白质和肽的表达，在理论上具有迷人的前景，为治疗实体瘤找到了平安,特异和有效的生物治疗方法。重组慢病毒载体是近年来运用的转导效率高的病毒载体,在改造HIV的病毒的复制元件并提高了平安性后,运用泡沫口炎病毒衣壳蛋白作为重组病毒的衣壳,大大提高了转导效率,同时感染分裂和非分裂细胞。蛋白质转导结构域(PTD)是近年来发觉的一种非受体依靠和非能量依靠的新转导理论和方法[16,17]。探讨最多的是果蝇Antennapediahomeodomainprotein(Ant)和HIV的TAT,它们能够携带核酸,蛋白和肽自由的通过细胞膜和核膜[18,19]。依据这个理论，我们已经成功的表达了P53的羧基肽-Ant融合肽，其诱导了肿瘤细胞的坏死和凋亡。本课题设计运用改造病毒载体的目的不但是为了提高转导效率,而且在表达盒中设计了可分泌表达的信号肽-引导肽元件。接受Ant和TAT-Apoptin融合表达技术[20,21,22],目的是促进Apoptin进入肿瘤细胞核并促使已表达的Apoptin无阻碍的进入毗邻的甚至已经转移的肿瘤细胞[23,24]。当重组病毒感染肿瘤细胞后除了能杀死该细胞之外,它分泌的目的蛋白可以杀死毗邻的肿瘤细胞;更重要的是当肿瘤内的非肿瘤细胞,如间质细胞、免疫活性细胞和血管上皮细胞转导了重组病毒后，表达的Ant-Apoptin和TAT-Apoptin不损害这些非肿瘤细胞,它们可以长期存活并许久表达可分泌的目的蛋白,对实体瘤内的残存肿瘤细胞和已经转移的肿瘤细胞,起到长期持续的杀伤作用。这在以前的肿瘤基因治疗探讨中是无法完成的。我们期望该课题的探讨能够为肿瘤的基因治疗进入临床开拓新道路。本课题的探讨是探寻有效的、平安的和特异的治疗恶性肿瘤的生物学方法。我们选用了鸡贫血病毒的VP3,Apoptin蛋白作为治疗肿瘤的特异分子,运用重组慢病毒技术来增加目的基因在实体瘤内的转导实力,运用信号肽和引导肽序列来实现非肿瘤细胞转导后的长期持续分泌表达.接受Ant-Apoptin和TAT-Apoptin融合表达方式,保证治疗分子可以进入未转导重组病毒的残余肿瘤细胞和已经转移的肿瘤细胞,并确保治疗分子导入肿瘤细胞核内的靶部位。通过以上设计来实现对肝癌等实体瘤平安有效的特异性治疗。立项依据国内外探讨现状及发展动态分析留意事项层层绽开、强调分析综合；着重找出别人探讨的不足或缺陷综述不全面，忽视了重要进展，提出的问题别人已解决围绕课题的思路进行综述，层次清晰，观点显明逻辑思路不清晰，没有围绕一个中心问题进行综述探讨现状和分析精确客观论述既要充分又要简练简洁移植或夸大，可行性差文献类别要全：以国外文献为主，也要引用国内同行知名专家的文献；引文信息要全；文献年头要新：主要是近五年的文献，最好能有申报当年的最新文献。撰写模式作者姓名、题目、具体出处(包括期刊名、年份、卷期、页码等)，20～30条；新，精，准！留意事项正文中重要的论点均要有文献标注引文信息，格式规范统一，与正文相对应尽可能引用最新的英文文献（近三年占到2/3左右）和顶级期刊文献常见问题：过于陈旧；参考文献不够全面；格式不统一立项依据研究目标探讨目标撰写要点指探讨要达到的目的（最终结果），是对标题进一步的具体化，是探讨对象、探讨方法、成果和应用的高度概括。不能够转写成为探讨内容中阶段性成果的排列。通常运用一、两句话表达清晰。一般撰写格式明确……关系，揭示……规律，阐明……原理（机制），建立……方法等。探寻一种治疗肝癌等实体瘤平安的、有效的、特异的生物学方法,为实体瘤的基因治疗带来新突破研究目标研究内容探讨内容是指围绕探讨目标拟开展的试验探讨。内容要适当：确保探讨周期内完成；为目标服务：与探讨目标相辅相成；要重点阐述：留意与技术路途区分。撰写要求围绕探讨目标逐次绽开探讨内容层次分明探讨方法恰当，可操作性强，具有可行性留意事项内容要适当，确保探讨周期内完成内容要适当，确保探讨周期内完成内容过多，探讨周期难以完成为目标服务，阐述重点内容分散，不能集中阐明探讨目标；与探讨方案混淆，排列试验步骤问题精确，方法科学、先进克隆CAVVP3的基因克隆：从患病鸡的外周血淋巴细胞内分别DNA,运用PCR方法建立CAVVP3/apoptin克隆,测序证明(已完成)。构建具有信号肽-引导肽-TAT(Ant)-apoptin表达盒：在已经构建的NT4信号肽-引导肽-ADNF重组载体中运用酶切获得NT4信号肽-引导肽-cDNA片段,合成TAT(Ant)渗透肽cDNA片段,通过HindIII同apoptin基因连接构建TAT(Ant)-appotin融合基因片段,通过常规分子生物方法构建NT4信号肽-引导肽-TAT(Ant)-apoptin表达盒。构建表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒：运用常规分子生物学方法将NT4信号肽-引导肽-TAT(Ant)-apoptin表达盒插入到慢病毒重组载体pLenti6/V5-D-TOPO载体中,同pLp/VSVG和pLP1和pLP2四质粒共转染293细胞,Blasticidin筛查阳性转化克隆,增殖后收获表达目的基因的重组病毒。构建表达TAT(Ant)-EGFP报告基因的重组慢病毒：运用常规分子生物学方法将NT4信号肽-引导肽-TAT(Ant)-EGFP表达盒插入到慢病毒重组载体pLenti6/V5-D-TOPO载体中,同pLp/VSVG和pLP1和pLP2四质粒共转染293细胞,Blasticidin筛查阳性转化克隆,增殖后收获表达报告基因的重组病毒。表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒对肝癌细胞的体外治疗作用：培育P53缺失,P53变异和具有野生性P53的肝癌细胞,感染表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒和表达TAT(Ant)-EGFP报告基因的重组慢病毒,视察转导效率和使肿瘤凋亡实力。表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒对裸鼠移植瘤和转移肿瘤的治疗作用：接种肝癌细胞到裸鼠皮下,制备移植瘤和移植后转移瘤动物模型,肿瘤注射表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒,通过病理学检测视察对肿瘤治疗作用和对转移病灶的治疗作用。表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒诱导肿瘤凋亡的特异性和平安性：分别人包皮成纤维细胞和脐静脉血管内皮细胞,体外培育和转导表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒,视察目的基因的表达和对非肿瘤细胞的影响.将表达TAT(Ant)-apoptin的重组慢病毒和表达TAT(Ant)-EGFP报告基因的重组慢病毒注射到小鼠肝脏,病理学检查目的基因的表达和对正常肝细胞的影响。拟解决的关键科学问题什么是关键科学问题？关键科学问题--是指探讨过程中对达到预期目标有重要影响的某些探讨内容或因素，以及为达预期目标所必需驾驭的关键技术或探讨手段，包括课题设计中具体的关键科学问题和技术问题。提炼１－２个，为什么？意义何在？撰写模式自己探讨的领域的关键科学问题→本探讨逻辑思路→意义→已具备的科学发觉、硬件和软件条件→最关键问题的解决方案留意事项：找准关键问题，并提出解决方法；特殊留意必要时供应试验失败候选方案不会总结，未能抓住关键问题或抓得不准；过于简洁；和其他部分重复研究方案探讨方案是指课题实施中具体的、可执行的工作方案和流程，应对该部分予以强有力的支持和说明，使评审专家感到试验设计得合理、可行，能够获得良好试验结果。撰写要求：以探讨项目的需求为前提，尽量接受最适合的方法和手段，并将其操作步骤和关键环节体现在技术路途当中。常见问题过于简洁：在方案中只有方法名称而无具体步骤。过于繁杂：大量排列一些常规的试验方法。研究方法探讨方法撰写要点探讨方法（拟实行的探讨方案及可行性分析）。主要指在探讨的过程中，所应用到（接受）的方法学问题包括：有关试验方法、手段、技术路途和方案、关键技术等，均应赐予强有力的支持和说明，使评审人感到试验设计的合理、可行、能够获得良好的试验结果。此段描述不好的缺陷是让人感觉到试验不行行或者根本完不成课题的试验。同时留意试验设计的范围，太大使人感到不易完成，太小使人感到份量不够。技术路线技术路途撰写要点事实上是完成课题的试验流程图。针对探讨目标、探讨内容、探讨方法等所制定的合理、可行的路径，这个路径使评阅人能够清晰的看明白。描述时确定要与前面的探讨目的、探讨内容、探讨目标等内容有亲密的关联，这几个环节亲密相关相互连接。达到探讨目标明确、探讨内容充溢、探讨范围合理、试验设计较为完善、技术路途可行。可行性分析可行性分析--考察课题组是否有实力和条件完成所申请的课题。从思路、技术、条件和人员角度，运用中性词，给出具体理由,能够劝服评审专家！撰写模式对试验方案设计的理论分析探讨手段方法分析预试验结果分析对相关条件的分析留意事项理论可行性、条件可行性、探讨基础可行性不知道从何处起先分析；不知道哪些问题可以体现课题设计的可行性简洁让人怀疑的探讨内容和方案须要特殊说明举例：理论上具有可行性：……有前期试验结果支持：……良好的探讨工作基础：……专业互补的课题组成员：……技术成熟：……试验设备有保障：……可行性分析特色与创新特色与创新即在本项目探讨领域中申请者与国内外同行所不同。应从对包括项目的立论依据、探讨内容、探讨方法与手段、技术路途及其试验方案上的探讨与创新点进行概括、提炼并集中反映出来。学术思想（理论）的创新资源创新技术或者方法学的创新创新点可以体现近期的探讨成果，更要突出深化和持续探讨的必要性。本项目的特色与创新之处的撰写要点假设创新——通过试验、临床过程，提出……探讨的假设，期望通过……手段和方法证明……假设？思路创新——与既往探讨不同的设计思路，期望通过……方法和手段证明……是思路创新？技术或者方法创新——接受何种试验方法，试验技术解决项目中……关键问题。资源创新——疾病家系、血清库、标本库、数据库等。特色与创新一般写作格式本探讨的特色是从……方面入手，对………的问题进行探讨，期望阐明……，揭示……机制。这些探讨在国内外鲜有报告。此外，通过……的探讨，为临床的应用供应……试验基础。特色与创新年度计划年度探讨支配撰写要点留意要客观、合理的划分年度支配进展，以体现所制定的目标能够完成。留意论文撰写篇数和质量，包括：SCI、MI、EI、国内统计源或者核心期刊、国内外学术会议等。年度探讨支配撰写要点人才培育（探讨团队、博士、硕士探讨生培育），一般面上项目，培育1～2名博士或者2～3名硕士，不要太多。一般预留出6个月的时间进行总结。此段撰写的目标基本上是依据课题的探讨内容、探讨方法和技术路途所制定的方案进行。切记探讨内容、范围、工作量的限制，撰写的太大、太多不易完成。年度计划预期研究成果预期探讨成果撰写要点理论成果——在某一理论方面有所建树、创新。应用成果——在某项关键技术、方法学上获得创新。预期探讨成果与“探讨特色和创新”基本上应当一样。预期探讨结果也还包括：拟组织的国内、外重要学术沟通活动、国际合作项目、沟通支配、发表学术论文等。预期结果要考虑对基础和好用双重的价值，假如能够建立一套实物体系是最佳的结果。一般发表论文和申请专利结题比较简洁。好标记是SCI收录的杂志。最终结题状况是基金委专家们最关切的事情。预期研究成果举例：理论成果：建立/丰富/补充/填补……技术方法：建立/完善……专利成果：可望获得……论文专著：SCI论文（具体数）、学术著作（具体数）人才培育：青年科技骨干、博硕探讨生预期研究成果研究基础工作基础包括申报者个人、团队或学校相关工作基础、人员和设备资源。学术积累，方法和技术建立(特殊是关键技术),预试验结果！撰写模式项目的理论基础、前期工作发觉的问题、预试验探讨结果所在单位的探讨工作的积累；技术平台的建立和必备设备的来源有关的技术方法的阅历；探讨人员梯队