毕业论文添加珍珠粉及黄芪对黄酒功效的影响

PAGEPAGE13毕业论文2014届添加珍珠粉及黄芪对黄酒功效的影响学生姓名吴学号10082120院系生命科学学院专业生物科学指导教师罗文填写日期2014年5月添加珍珠粉及中黄芪对黄酒功效的影响摘要在黄酒中加入药食两用的物料，能使中草药在黄酒酿造过程中参与糖化和发酵，产生独特的功能与风味。为开拓黄酒在女性中的消费市场，有必要研究黄酒在美容抗衰老方面的功效。本实验在黄酒酿造的过程中加入珍珠，得到抗氧化能力最好的珍珠粉浓度1%。再将此浓度的珍珠黄酒与常见中草药黄芪进行勾兑，得到珍珠黄芪黄酒。在测定它的抗氧化能力之后发现，添加了珍珠与黄芪的黄酒的抗氧化能力比单纯的黄酒的抗氧化能力要强。关键词黄酒；珍珠粉；中草药；抗氧化EffectofaddingherbspearlpowderandChinesemedicine2toYellowWineeffectABSTRACTAddingmedicinalandediblematerialsintoricewine,itcanmakeChineseherbalmedicineparticipateinsaccharificationandfermentationduringwinebrewingprocessandthenresultinspecialfunctionandflavor.Inordertoexplorericewineconsumermarketinfemalefield,itisnecessarytostudyitsfunctionofbeingbeautifulandanti-aging.Inthisexperiment,theresearcheraddedpearlsintothewineduringbrewingprocessforgetting1%concentrationofpearlpowderwhichhasthebestantioxidantcapacity.Theblendingofthispearlricewineandcommonherbsofastragaluscanbeformedpearlastragaluswine.Afterthedeterminationofitsantioxidantcapacity,theresearcherfoundthatthericewineaddingpearlsandastragalushasstrongerantioxidantabilitythanthesimplericewineKEYWORDSWine;pearlpowder;herbs;antioxidant目录中文摘要………………………..……Ⅰ英文摘要………………………Ⅱ前言…………………..11. 材料和方法 21.1. 实验材料 21.1.1 黄酒 21.1.2 珍珠 21.1.3 中草药 21.1.4 其他试剂 21.1.5 培养液和固体培养基 31.1.6 实验仪器 31.2. 实验方法 31.2.1 黄酒的制备 31.2.2 珍珠酒总抗氧化能力的测定 41.2.3 中药的勾兑 51.2.4 黄芪总氧化能力的测定 51.2.5 珍珠黄芪酒总氧化能力的测定 62. 结果与分析 72.1. 最佳珍珠粉浓度的确定 72.1.1 加入珍珠粉后酿制的黄酒基本成分检测： 72.1.2 测珍珠黄酒的分光光度值： 72.1.3 重新设置珍珠粉/糯米浓度梯度及珍珠粉的质量： 72.1.4 测珍珠黄酒的分光光度值： 82.1.5 方差分析 82.2. 测熬制好的枸杞的分光光度值： 82.3. 测以1:1体积比勾兑的黄酒的分光光度值： 82.4. 分析 93. 展望 9参考文献……………10黄酒(Chinesericewine)是我国特有的一种酿造酒，也是世界三大古酒(啤酒、黄酒和葡萄酒)之一[1]黄酒的原料主要以稻米、小麦、玉米、糯米等为原料[2]，经原料选择，精米，浸米，蒸饭、加曲、糖化、发酵、压榨、澄清、煎酒、贮存、勾兑等多道工序酿造而成的。黄酒营养丰富、酒性柔和、酒味醇厚，成为中国传统保健养生佳品。黄酒作为一种低发酵的酒类，因此，它的营养成分得以保存下来，比如，黄酒含有丰富的蛋白质，碳水化合物，维生素，无机盐及微量元素，黄酒中除了以上的营养物质，还有许多的功能性成分，比如低聚糖，酚类物质，GABA(具有增加记忆力的功能，减缓紧张，降血压等功能），生物活性肽[3][4]。随着当代生活水平的逐步提高，以及人们对自我保健意识的不断加强，人们更多地关注了低发酵、酒精浓度小、营养丰富的黄酒。因此，非常有必要开发多种新型的黄酒，在原有黄酒的口味和营养价值之上添加更多地物质以满足人们的需求。珍珠粉是用珍珠研磨的细粉。中医上被用做安神定惊、平肝明目、收敛生肌的药物。珍珠粉可以分为淡水珍珠粉、海水珍珠粉两类[5]。珍珠在中国中药上的使用已有2000多年历史。三国时的医书《名医别录》、梁代的《本草经集》、唐代的《海药本草》、宋代的《开宝本草》、明代的《本草纲目》、清代的《雷公药性赋》等19种医药古籍，都对珍珠的疗效有明确的记载[6]。珍珠含有丰富的蛋白质（水解后可得到18种氨基酸，其中7种是人体必需氨基酸）,比如门冬氨酸能治疗肝炎、肝硬化、肝昏；迷苏氨酸是多种酶类的构成成分；丝氨酸能增强机体免疫功能；谷氨酸能治疗耳鸣、耳聋、中耳炎、过敏性皮炎、鼻炎、失眠；而含量最多的甘氨酸（0.4580g/100h珍珠粉美容、促进皮肤胶原细胞再生[7]。内服珍珠粉增强免疫、补充钙质、葆春延衰、改善睡眠、治疗溃疡、养肝明目、辅助降压,外用珍珠粉功效：一、美白，自然白皙透出来；二、控油，还肌肤一片素净；三、祛痘，只要青春不要痘；四、去黑头，让毛孔自在呼吸；五、淡斑，净白回归美丽重现，《本草纲目》早就明确指出：“珍珠，除黑黯”[8]。黄芪是我国使用的最古老的中草药之一，根据《中国药典》记载：黄芪具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌和利水退肿等功效；临床用于脾肺气虚、中气下陷、表虚自汗、气血不足、痈疽难溃、久溃不敛、气虚血滞、浮肿尿少、半身不遂和痹痛麻木等症,近年研究表明，黄芪主要含黄芪多糖、黄芪皂苷和黄酮类成分；具有增强免疫系统功能、抗心肌缺血、双向调节血压、保护血管内皮细胞、保肝、抗肿瘤、清除自由基和抗衰老等作用[9-11]。黄芪具有很多化学成分，总体而言包括三大类：多糖类成分，皂苷类成分，黄酮类成分，除此之外，还有许多微量元素与游离的氨基酸。所以，黄芪有很多的功效，比如增强免疫，保护心脑血管，抗肿瘤等作用。经查阅，在1999年，人们将酶解珍珠原液、枸杞提取液和蜂蜜为主要原料，已优质啤酒为载体，经科学配方和严谨的工艺操作，生产出具有免疫调节人体功能的一种新型保啤酒[12]。而在中国，中药黄酒历史悠久，但是现在鲜少有人将珍珠，中药和黄酒三物质结合起来研究既具营养价值，又能美容养颜的珍珠中药黄酒。因此将黄酒，珍珠粉，中草药这三大保健物质结合起来，以研究其在抗衰老方面能否有更大的作用。本实验主要研究在黄酒中添加珍珠粉和黄芪,酿造之后检测黄酒的各项理化指标，从而找出三者最好的混合比例。材料和方法实验材料黄酒珍珠1000目珍珠。中草药黄芪其他试剂总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒培养液和固体培养基实验仪器（1）热恒温水浴锅；（2）电子分析天平（3）722分光光度计（4）低温冰箱（用于保存各种试剂、样品等）。（5）移液管实验方法黄酒的制备具体制作流程如下[13-14]：1.原料选择：黄酒的酿造一般选用的是大米或者糯米，也有用黑米、黍米和玉米的。本实验所用的原料为经过处理的糯米，糯米2250g，所需的米粒要洁白饱满，颗粒大小整齐。2.米的精白：这一步主要用来处理糯米。3.浸米：其目的是使淀粉吸水，糯米吸胀，有利于酿造，缩短时间。4.蒸饭。5.落罐发酵：蒸熟的米饭置于发酵罐A、B、C、D中，再加水、酒曲、酒母，并按照下列表格中的数据在发酵罐B、C、D中分别加入了11.26g，22.5g，45.01g混合均匀（其中A组为对照组，不加珍珠粉），温度控制在24~26℃。落罐10~12小时后进入主发酵阶段，温度控制在30~31℃，主发酵一般要3~5天完成。发酵罐珍珠粉浓度比（珍珠粉/糯米）理论值（单位：g）实际称重（单位：g）A对照B0.5%11.2511.26C1%22.522.5D2%4545.016.后发酵：经过主发酵后，控制温度在15~18℃，发酵20~30天左右。7.压榨、澄清、消毒8．检测：总糖含量，酒精浓度，酸度，钙离子浓度珍珠酒总抗氧化能力的测定（1）试剂的配置：试剂二的应用配置：每支粉剂加双蒸馏水120ml充分溶解（粉试剂较难溶解，如需加快溶解，可以在37摄氏度水浴中溶解）试剂三应用配置：用前取贮备液用稀释液以1：19稀:1，现用现配。试剂五测试前37摄氏度水浴溶解直至澄清透亮为止。（2）操作步骤：1.取十支试管，分别标号1,2.1,2.2,2.3,3.1,3.2，3.3,4.1,4.2,4.32.用1000微升移液枪分别吸取1ml的试剂一加入10支试管中。3.用100微升移液枪吸取0.1ml的黄酒样品A加入1号试管中。4.用100微升移液枪分别吸取0.1ml的黄酒样品B加入2.1号试管，2.2号试管和2.3号试管中。5.用100微升移液枪分别吸取0.1ml的黄酒样品C加入3.1号试管，3.2号试管和3.3号试管中。6.用100微升移液枪分别吸取0.1ml的黄酒样品D加入4.1号试管，4.2号试管和4.3号试管中。7.用1000微升移液枪分别吸取2ml的试剂二应用液加入10支试管中。8.用500微升移液枪分别吸取0.5ml的试剂三应用液加入10支试管中。9.充分混匀后，将10支试管放入大烧杯中，在37℃的水浴锅中加热30分钟。10.水浴加热30分钟后，用100微升移液枪分别吸取0.1ml的试剂四加入10支试管中。11.用100微升移液枪吸取0.1ml的黄酒样品A加入1号试管中。12.充分混匀，放置10分钟后，以蒸馏水做为对照组，用722型分光光度计520nm测量10支试管的吸光光度并记录数据。13.根据计算公式计算总抗氧化能力：总抗氧化能力（单位/毫升黄酒）=（测定OD值-对照OD值）÷0.01÷30×反应液总量÷取样量×样本测试前稀释倍数。14.确定该浓度梯度中总抗氧化能力最强的黄酒样品对应的珍珠粉浓度后，以此浓度为界，确定一个更精确的浓度梯度，重复上述实验步骤，直至找到最佳的珍珠粉浓度。中药的勾兑1.在确定最佳珍珠粉浓度的基础上，用该浓度比酿制黄酒待用。2.称取6克黄芪加入烧杯中，加入300克蒸馏水，在电炉上熬制30分钟后冷却待用。黄芪总氧化能力的测定1.取4支干燥洁净的试管，分别标为1,2,3,4。2.取出试剂二，往干燥洁净的小烧杯中加入120ml蒸馏水，加入1支粉剂，放入37℃水浴锅中加热搅拌溶解直至全部溶解。3.取出试剂五，用37℃水浴锅溶解直至澄清。4.用500微升移液枪吸取250微升的黄色贮备液加入干燥洁净的小烧杯中，然后用1000微升移液枪吸取4750微升的稀释液加入小烧杯中，混合稀释。5.用1000微升移液枪分别吸取1ml的试剂一加入4支试管中。6.用100微升移液枪分别吸取0.1ml的熬制好的枸杞加入2,3,4号试管中。7.用1000微升移液枪分别吸取2ml的试剂二应用液加入4支试管中。8.用500微升移液枪分别吸取0.5ml的试剂三应用液加入4支试管中。9.充分混匀后，将4支试管放入烧杯中，在37℃水浴锅中加热30分钟。10.加热半个小时后，用100微升移液枪分别吸取0.1ml的试剂四加入四支试管中。11.用100微升移液枪吸取0.1ml的熬制好的枸杞加入1号试管中。12.充分混匀，放置10分钟后，以蒸馏水做为对照组，用722型分光光度计520nm测量10支试管的吸光光度并记录数据。13.根据计算公式计算总抗氧化能力。珍珠黄芪酒总氧化能力的测定1.取四支干燥洁净的试管，分别标号1,2,3,4。2.用500微升移液枪分别吸取0.5ml的黄芪和0.5ml的珍珠酒，充分混匀后待用。3.用1000微升移液枪分别吸取1ml的试剂一加入4支试管中。4.用100微升移液枪分别吸取0.1ml的勾兑好的黄酒加入2,3,4号试管中。5.用1000微升移液枪分别吸取2ml的试剂二应用液加入4支试管中。6.用500微升移液枪分别吸取0.5ml的试剂三应用液加入4支试管中。7..充分混匀后，将4支试管放入烧杯中，在37℃水浴锅中加热30分钟。8.加热半个小时后，用100微升移液枪分别吸取0.1ml的试剂四加入四支试管中。9.用100微升移液枪吸取0.1ml的勾兑好的黄酒加入1号试管中。10.充分混匀，放置10分钟后，以未勾兑的珍珠黄酒做为对照组，用722型分光光度计520nm测量10支试管的吸光光度并记录数据。11.根据计算公式计算总抗氧化能力，并判断勾兑后的黄酒其总氧化能力是否有所提高。

结果最佳珍珠粉浓度的确定加入珍珠粉后酿制的黄酒基本成分检测：编号总糖含量酒精浓度酸度氧化钙含量A5.2516.13.554.7B7.25C5.7516.82.01.6D5.5017.21.981.1测珍珠黄酒的分光光度值：分光光度值1号2号3号4号00.1990.5080.57500.4640.5090.57600.4860.4960.584组别吸光度平均值T-AOC单位数2号0.47558.583333号0.50433362.201114号0.57833371.32778重新设置珍珠粉/糯米浓度梯度及珍珠粉的质量：发酵罐珍珠粉浓度比（珍珠粉/糯米）理论值（单位：g）实际称重（单位：g）A对照B0.01%0.2250.2285C0.05%1.1251.1242D0.1%2.252.2401测珍珠黄酒的分光光度值：12340.1020.1680.2280.1340.1030.1590.2300.1460.0970.2300.1940.142组别吸光度平均值T-AOC单位数2号0.1718.6744443号0.21733314.388894号0.1406674.933333方差分析处理样本数均值标准差处理130.10070.0032处理230.1710.0137处理330.21730.0202处理430.14070.0061方差分析表：变异来源平方和自由度均方F值显著水平处理间0.021830.007345.050处理内0.001380.0002总变异0.023111字母标记表示结果：处理均值5%显著水平1%极显著水平处理30.21733aA处理20.171bB处理40.14067bBC处理10.0231cC测熬制好的枸杞的分光光度值：编号1234分光光度值00.0720.0840.073组别吸光度值T-AOC单位数20.0728.8830.08410.3640.0739.00测以1:1体积比勾兑的黄酒的分光光度值：编号1234分管光度值00.0760.1010.097组别吸光度值T-AOC单位数20.0769.6230.10112.4540.09711.96讨论1.在测定黄酒的一般指标（包括总糖含量，酒精浓度，酸度，钙离子浓度）时，发现酒精的浓度升高了，但增加量不是很大，这可能是因为：一方面珍珠含有少量的有机质，这一部分的有机物参与了酒精发酵，但是珍珠中的其他成分抑制了酒精的发酵，所以增量不大，真实原因还有待考察。酸度明显下降，这是因为珍珠的主要成分碳酸钙中和了一部分的酸，而钙离子也发生了明显的变化，含量大大增加，这也是由于珍珠的主要成分碳酸钙。但是，钙的含量超过了国家的标准，说明加入的珍珠浓度过高，并且从第一次的总抗氧化能力来看，2.1组的总抗氧化能力的测定时发生了错误，所以除去第二组的数据，发现三组的差别并不是很大的，说明珍珠粉的浓度过大。因此，第二次，降低了珍珠的浓度。经过调整，用0.01%，0.05%，0.1%的珍珠粉浓度，再次测定了珍珠黄酒的浓度总抗氧化能力，通过方差分析，发现浓度为0.05%的珍珠酒，有显著性差异，因此，第三组珍珠粉浓度的黄酒的抗氧化能力是最好的。2.本实验的目的是研究黄芪珍珠酒的抗氧化能力的最佳比。衰老的自由基学说是DenhamHatman，认为衰老过程中的退行性变化是由于细胞正常代谢过程中产生的自由基的有害作用造成的，目前，自由基理论在机体衰老中的作用已受到人们的高度重视，所谓自由基又称游离基，就是具有未配对的原子、原子团、分子或离子叫自由基，自由基的化学性质活泼，有极强的氧化反应能力，可使各种生物膜的不饱和脂肪酸发生过氧化，形成过氧化脂质，这些产物具有一定毒性，能使蛋白质分子内和分子间发生交联，发生去氢、加成、裂解等反应，从而引起DNA的双螺旋交联出现错误或无法分裂，一些酶的活性改变研究表明，许多重要具有抗氧化能力，可作为外源性补充，有机体服用后可增强自身的抗氧化能力，通过阅读文献我们发现：黄芪有一定的增强免疫和抗衰老的能力。通过黄芪多糖对衰老小鼠胸腺和脾脏指数的影响实验表明黄芪多糖能显著提高衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏指数；明显降低MAD量；提高CAT活性；显著提高SOD活性[15]。3.对熬制好的黄芪的总抗氧化能力进行测定，以及将黄芪与珍珠黄酒进行勾兑，从数据上发现总抗氧化能力得到改善，但是效果并不是很好，说明黄芪有一定的抗氧化效果，但是不明显，我认为原因可能有以下几个方面：①黄芪本身的抗氧化能力并不是中药中的佼佼者。研究者将中国常见的40种中药的体外抗氧化能力进行比较后发现：花生壳、丹参、女贞子和荷叶等提取物具有较强的自由基清除能力，其清除率均达到了95%以上。而黄芪则只有75%。②提取物不同。本实验是将黄芪进行水煮冷却后直接与珍珠黄酒进行勾兑，不同中药的抗氧化性之所以相差如此之大，是因为含有的抗氧化物质不同，而对于同一种中药，不同部位的抗氧化能力也是不同的，如①看，花生壳、丹参、女贞子和荷叶的抗氧化能力之所以好是因为它们主要含有多酚类化合物。而据目前研究，黄芪的抗氧化能力主要归功于它的多糖类物质，但是本实验中，我们并未提取黄芪的多糖类物质，也没有将黄芪进行发酵。③加入中药的时间，据研究，将中药加入黄酒中一般分为三个时间，分别为蒸煮时，冲缸时，还有一个是在后发酵中，经研究，在后发酵的时候还原能力最强，即抗氧化能力最强。在冲缸时效果一般，这是因为如果在蒸煮时添加，在冷淋过程中，中药中的一部分水溶性抗氧化物质会流失，因此效果差，而在冲缸和后发酵的过程中添加，通过长时间的后发酵和主发酵，可以很好地将中药中的抗氧化物质溶于黄酒中。但是在本实验中，只是将黄芪和珍珠黄酒进行勾兑而已，发挥不出效果[16]。4.但是，本次试验得到的黄芪珍珠黄酒与纯黄酒相比还是具有一定的抗氧化能力的，并且它与市面上仅有珍珠中药啤酒相比有以下两个方面的优点：一方面，珍珠粉中含有水溶性蛋白之外，还有人体需要但是又不能合成的8种氨基酸在内的17种氨基酸，人体所需的9种微量物质与淡水生物所特有的活性物质[12]。另一方面，从两种载体自身的营养价值而言，啤酒还有维生素B和少量营养素，但是脾气还有大量的发热量（在发酵过程中产生，易被人体吸收），但是，黄酒不同，黄酒本身营养丰富，易于身体。5.从上述的实验中看到，加入黄芪的珍珠黄酒的总抗氧化能力增加，但是效果不是很明显，所以要投入生产，或者使之具有更大的价值，还需要挖掘其他具有很大抗氧化能力的中药。比如可以选择丹参，女贞子或者是对女性有利的枸杞，这三种中药的抗氧化能力要远远大于黄芪，或者如果要将黄芪加入酒中，可以使用黄芪的提取物，可采用碱醇提取黄芪多糖，方法如下：准确称取黄芪饮片，黄芪与5%乙醇按1:10的量，在OH12(碳酸钠调节)、温度为90℃的条件下提取2次，每次一个半小时，过滤，合并滤液，浓缩