HPLC法分析不同工艺干燥的玄参中梓醇的含量

HPLC法分析不同工艺干燥的玄参中梓醇的含量颜春潮梁晨洪伟聂诗明(湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065)［摘要］目的：探讨干燥工艺对玄参质量的影响，分析不同工艺干燥的玄参中梓醇的含量。方法：将鲜玄参自然晾晒干燥、烘箱干燥和微波真空干燥，采用高效液相色谱法，分析不同工艺干燥玄参中梓醇的含量，色谱法条件为KromasilC-18色谱柱(250mmX4.6mm,5pm),流动相：乙腈-0.03%磷酸溶液梯度洗脱。检测波长：206nm，柱温：25°C,流速：1.0mL・min-i。结果:梓醇在0.812yg~10.150卩g范围，线性良好，有较好的重现性、稳定性和回收率；自然晒干、烘干和微波真空干燥的玄参药材梓醇含量分别为0.68%、0.54%、2.79%。结论：该含量测定法专属性好、准确、稳定可靠，微波真空用于中药玄参的干燥，梓醇等有效成分有较高的含量，且工艺简单、干燥时间短。［关键词］玄参干燥工艺梓醇HPLCAbstractObjective:ToinvestigatethenewtechnologyofapplyingtoRadixscrophulariadrying.Usingnaturaldrying,ovendryingandmicrowavevacuumdryingtodryfreshroots,studyingthecontentofCatalpolindifferentdryingtechnologiesbycomparingexperiment,whichisprovidingthebasisforthequalitycontrolofRadixscrohularia.Method:TakeHPLCtomeasurethecontentofCatalpol.Chromatographicconditions:thecolumn:C18analyticalcolumn(250mmx4.6mm，5pm),mobilephase:gradientdilutedwithacetonitrile-0.03%phosphate,detectionwavelength:206nm,columntemperature:25C,flowrate:1.0mL・min-1.Results:thecontentofCatalpolwhichisdriedbymicrowavevacuumdryingismuchhigherthandriedbynaturaldryingandovendrying.Conclusions:Radixscrophulariadriedbymicrowavevacuumdryingtechnologycannotonlyshortenthedryingtime,butalsobeneficialforreservationoftheactiveingredients.Keywords：Radixscrophularia；microwavevacuumdrying；Catalpol；HPLC玄参为玄参科植物玄参ScrophuLarianingpoenSiemsl.的干燥根。冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，晒或烘至半于，堆放3〜6天，反复数次至于燥［1］。主产于浙江、湖北、江苏、江西等省。玄参为常用中药，具有凉血滋阴，泻火解毒的功效，临床上用于热病伤阴，舌绛烦渴，温毒发斑，津伤便秘，骨蒸劳嗽，目赤，咽痛，瘰疬，白喉，臃肿疮毒［1］。玄参主要含环烯醚萜类、苯丙素苷类，尚含植物甾醇、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷、挥发油、糖类、生物碱及微量的单萜和二萜成分⑵。梓醇为其重要成分之一，【基金项目】国家中医药行业科研专项(编号：201007012)【作者简介】颜春潮【通讯作者】聂诗明，男，教授，研究方向中药制剂技术，E-mail:163nsm@163.com具有抗脑缺血损伤、抗老年性痴呆、降血糖、抗癌、抗肝炎病毒、解痉、抑制毛细血管通透性等活性⑶。有关文献报道，随着干燥时间延长，由于氧化作用，玄参梓醇的含量明显减少⑷。本文建立了玄参中梓醇的含量测定方法(HPLC法)，对鲜玄参用微波真空干燥、自然晒干和烘干法进行干燥，分析不同的干燥玄参梓醇的含量，探讨干燥方法对玄参内在质量的影响，为提高玄参药材质量提供一定的理论依据。仪器与材料DionexP680型高效液相色谱仪，KromasilC-18色谱柱(250mmX4.6mmX5pm)；JC202-1SA型数显恒温干燥箱；CNWB-ZZK微波真空干燥设备(广州万程微波设备有限公司);BS110S十万分之一分析天平(德国Sartorius)；鲜玄参采自湖北恩施建始GAP基地,2010年11月采挖，除去根茎、子芽、须根，洗去泥沙，沥干表面的水分，备用。梓醇对照品购于中国药品生物制品检定所，批号：0808-9803)；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯；水为重蒸馏水。方法与结果2.1玄参的干燥2.1.1烘干法：将鲜玄参晾晒1至2天，置于电热鼓风干燥箱中，于60°C烘至干燥。2.1.2晾晒干燥：取鲜玄参，白天晾晒，晚上堆积发汗，晾晒至干燥。2.1.3微波真空干燥：取鲜玄参，置于微波真空干燥器中，于60C，真实度为-0.090Mp〜-0.100Mp下干燥。2.2玄参中梓醇的测定2.2.1色谱条件色谱柱：KromasilC-18色谱柱(250mmX4.6mmX5pm)；流动相：乙腈(A)-0.03%磷酸溶液(B),按表1进行线性梯度洗脱。检测波长206nm,柱温25C，进样量为20mL，流速l.OmL・min-1对照品、样品HPLC色谱见图1。供试品在梓醇对照峰位置有较好的分离。表1流动相线性比例时间.‘iniii流动相A(%)流动相B(%)时间;min流动相A(%)流动相B(%)*103-^1097-^9025--3050-^8050-^2010--2010-^3390-^6730-8020-2533->5067-^5035--3780-^320-^972.2.2溶液的制备

对照品溶液的制备：精密称取减压干燥至恒重的梓醇对照品10.15mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容，作储备液备用。供试品溶液的制备：分别对微波真空干燥玄参、晾晒干燥玄参、烘干玄参照中国药典一部附录水分测定法，测定水分，并计算样品含水量，精密称取相当干燥品约0.5g的药材（粉或薄片），置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，静置1h,加热回流30min,补足溶剂，即得，临用前过0.22pm滤膜。1-4.898Amin1-0.01.3 2.5 3.85.06.3min1-0.01.3 2.5 3.85.06.3||||||||||]・・・・]・・・・]・・・・]・・・・]00 13 25A•梓醇对照品亍电.烘箱干燥玄参 75C.自然晒干玄参 D.微波真空干燥玄参图1•梓醇对照品及三种工艺干燥玄参的梓醇HPLC图谱2.2.3线性关系考察：精密吸取梓醇对照品储备液，配制浓度为0.0406mg•mL-10.1015mgmL-i、0.2030mg•mL-i、0.2538mg•mL-i、0.5075mg•mL-i,分别吸取20pL,注入液相色谱仪，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）,绘制标准曲线，得回归方程Y=1.6538X+0.8678,r=0.9997（n=5）,表明梓醇在0.812卩g〜10.150卩g,进样量与峰面积呈良好的线性关系。2.2.4精密度试验：取“2.2.1”项下的对照品储备液，精密吸取配制成浓度为0.2030mgmL-i,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果峰面积的RSD为1.62%，表明仪器精密度良好。2.2.5稳定性试验： 精密吸取同一批玄参供试品溶液，分别于1、3、6、8、10、24h，按“2.1”项下色谱条件进样，峰面积RSD为0.32%,表明供试液至少在24h内很稳定。2.2.6重复性实验：取同一批样品，按“2.2.2”项下方法，平行制备供试液6份，按“2.1”项下色谱条件测定，按“2.1”项下色谱条件，测定梓醇的含量，RSD为3.69%。2.2.7加样回收试验：称取已知含量5.360mg•g-i烘箱干燥玄参样品6份，每份0.5g，精密称定，置50mL的容量瓶中，每份精密加入梓醇对照品溶液，按'2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备，并按“221”色谱条件测定并计算回收率。结果平均回收率为93.57%,RSD为2.65%。2.3不同工艺干燥玄参的梓醇含量按“2.2.2”项下方法制备供试液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算梓醇含量，结果见表1。自然晒干、烘箱干燥和微波真空干燥玄参的梓醇含量分别为0.68%、0.54%、2.79%。表1不同工艺干燥玄参的梓醇含量玄参样品梓醇/%自然晒干玄参0.68烘箱干燥玄参0.54微波真空干燥玄参2.793.结论与讨论3.1本实验测定玄参中梓醇含量采用的HPLC法，方法专属性好、准确、稳定可靠，可用于玄参中梓醇的含量测定。3.2测定结果表明，三种不同方法干燥的玄参药材，梓醇的含量以微波真空干燥最高，晾晒干燥次之，烘箱干燥含量最低。3.3由图1所示，玄参中梓醇的出峰时间在5min左右，微波真空干燥玄参与烘箱干燥、晾晒干燥玄参的图谱比较，在5.8min处多出一色谱峰。王宏洁等⑸对梓醇成分进行的实验，梓醇在酸、碱条件下极不稳定，室温放置30分钟后测量，含量降低了50%以上，放置3小时之后均未检测到。100°C加热75分钟，全部变成黑色沉淀物。有文献对玄参中环烯醚萜苷类成分含量进行研究，结果表明，氧气对梓醇的成分影响显著，易使之发生氧化反应而降低含量，或产生其他不明物质[2]。本实验结果表明，微波真空干燥玄参的梓醇含量为2.79%,显著高于自然晒干和烘干的玄参。若以该活性成分为评价指标，则微波真空干燥更能保证玄参的质量。参考文献：中国药典•一部[S]•中国医药科技出版社2010:108胡瑛瑛，黄真•玄参的化学成分及药理作用研究进展 .[J].浙江中医药大学学报，2008,32(3):268-270祝慧凤，万东，张芬•地黄活性成分梓醇的药理研究进展[OL].中国科技论文在