实验室生物安全防护课件

实验室生物平安防护1第四节实验室生物平安防护一实验室生物平安防护类型二常用生物平安设备三个人平安防护用具四生物实验室技术标准五生物实验室的消毒与灭菌2一实验室生物平安防护类型?实验室生物平安防护的内容包括平安设备、个体防护装置和措施〔一级屏障〕；实验室的特殊设计和建立〔分区、单向气流〕要求〔二级屏障〕；严格的管理制度和标准化的操作程序及规程〔三级屏障〕?不同生物平安防护等级的实验室其具体要求各不一样。31、针对对象2、根本要求???????〔一〕BSL-1实验室如用于教学的普通微生物实验室等。检测大肠杆菌、枯草杆菌Ⅰ级微生物类别，不引起人或动物疾病的微生物建立选址方面无特殊要求不需要安装生物平安柜等防护设备应能防止昆虫和啮齿动物等进入在可以开启的窗户上安置纱窗应配备消毒设备在靠近实验室出口处设立洗手池地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水3、操作标准不需要制订特殊的平安操作规程4〔二〕BSL-2实验室1、针对对象Ⅱ级微生物，公共卫生、临床、医院的诊断实验室如麻疹病毒、沙门氏2、根本要求菌、乙型肝炎病毒、HIV血清学检测等?除满足BSL-1实验室的全部要求之外?配备高压蒸汽灭菌器、化学消毒装置等消毒灭菌设施?安装不低于II级的生物平安柜?实验室的门能自动关闭?实验室应配备洗眼装置、喷淋装置等?需制定专门的平安操作规程51、针对对象Ⅲ级微生物、新发传染病和大容量或高浓度的、具有结核分枝杆菌、牛分枝高度气溶胶扩散危险的Ⅱ级微生物〔三〕BSL-3实验室多集中在北京，上海，2004年建成我国首个移动式P3实验2、根本要求?????????除满足BSL-1、2实验室的要求之外独立建筑物或者在建筑物中自成隔离区在主实验室内设置Ⅲ级生物平安柜设置不产生蒸汽的高压灭菌锅或其他消毒装置实验室应明确划分为清洁区、半污染区和污染区安装独立的通风空调系统以控制实验室气流方向和压强梯度实验记录等资料通过机等发送至实验室外不得将任何未经消毒灭菌的材料带出实验室制定更加严格的生物平安操作标准杆菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、Q热病原体、HIV(血清学检测除外)、立克次氏体等6〔四〕BSL-4实验室1、针对对象2、根本要求魔鬼式、全封闭式实验室，全球50个，我国仅中科院武汉病毒研究所有1个，中国农科院哈尔滨兽医研究所，在建中Ⅳ级微生物。实验室隶属于国家或卫生主管机构。黄病毒、埃博拉病毒、中欧蜱传脑炎病毒?除满足BSL-1、2和3级生物平安实验室的要求之外?分平安柜型实验室和穿着正压服型实验室?平安柜型实验室中所有操作均在Ⅲ级生物平安柜中进行?正压服型实验室中工作人员必须穿着特殊的正压服式保护服装?设立在独立建筑物内，且该建筑应远离市区?制定最严格的操作标准7病源一级屏障二级屏障三级屏障P1BSL—1不会引发安康成人疾病不要求开放实验台、洗标准的微生物操手池作，无特殊操作标准BSL加：—1操作外人类病源菌，因1平安柜级、2级生物入1、限制进P2服、手套、假设实验BSL-1险警告标志2、有生物危BSL—2皮肤伤口、吸入、黏膜曝露而发需要那么采取面压灭菌锅外加：高“锐器〞平安措3、生危险部保护措施施手册，其中规定4、生物平安废物消毒和医疗观察内源性和外源性1BSL-2BSL-3BSL-2平安柜保护性级、2级生物、和进入走廊隔外加：1作外加：操P3病源，可通过气开制进入BSL—3溶胶传播，能导实验服、手套致严重后果或生、假设需要那么采，门自动关闭2、双门进入废物消毒2、所有1、控命危险取呼吸保护措、排出的空气不3涤前，实验服消3、洗施循环内负压4、实验室毒清4、有根底血对生命有高度危险的危险性病源3BSL3BSL3或外源性病源：或级生物平安柜1单独建筑或隔离外加：1、：P4致命、通过气溶物平安柜加全级、2级生区域2、有供气BSL—4衣服1、进入前换操作外加胶而致实验室感身的、供给空系统、排气系统室前淋浴2、出实验染：或未知传播气的正压防护、真空系统、消出设施的所有材3、带风险的有关病源服毒系统有关要3、其他料消毒8BSL-1BSL-2正压服型实验室BSL-3平安柜型实验室9〔五〕实验动物设施的生物平安防护实验室1、ABSL-1适用于饲养大多数经过检疫的储藏实验动物(灵长类除外)，以及专门接种了危险度Ⅰ级微生物的动物。要求应用微生物学操作技术标准(GMT)。2、ABSL-2适用于专门接种了危险度Ⅱ级微生物的动物。103、ABSL-3?适用于接种危险度Ⅲ级微生物的动物，或根据危险度评估结果来确定。所有系统、操作和规程每年都需要重新检查及认证。4、ABSL-4?适用于接种危险度Ⅲ级微生物的动物，或根据危险度评估结果来确定。所有系统、操作和规程每年都需要重新检查及认证。11动物设施的防护水平的实验操作和平安设备汇总危害程度分类第四类防护水平ABSL-1实验室操作和平安设施限制出入，穿戴防护服和手套。第三类ABSL-2ABSL-1的操作内容加上,危险警告标志。可产生气溶胶的操作应使用Ⅰ级或Ⅱ级BSC。废弃物和饲养笼具在清洗前先去除污染。ABSL-2的操作内容加上,进入限制,所有操作均在BSC内进展，并穿着专用特殊防护服。ABSL-3的操作内容加上,严格限制出入,进入前更衣,配备Ⅲ级BSC或正压防护服,离开时淋浴,所有废弃物在去除出设施前需先去除污染。第二类第一类ABSL-3ABSL-412二常用生物平安设备实验室平安设备主要有生物平安柜高压灭菌器离心机负压柔性薄膜隔离装置洗眼器13一、生物平安柜biologicalsafetycabinet,BSC?〔一〕原理?〔二〕分类及特点?〔三〕使用要求?〔四〕维护校验〔一〕原理?利用高效空气过滤器对空气中微小粒子的阻留特性，结合负压环境和专门设计的气体流动模式，实现对危害性生物气溶胶的屏蔽15〔二〕分类及特点?BSCA2、有三个级别，B1、B2〕和BSC-即BSC-ⅢⅠ、BSC-Ⅱ〔A1、Ⅲ级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。16BSC-Ⅰ?BSC-Ⅰ级生物平安柜原理图ABCD?前开口可视窗排风HEPA过滤器压力排风系统特点：为人和环境提供保护，但进入空气未过滤，无法有效保护操作的标本和材料。17BSC-II?Al、A2、Bl和B2型?无菌空气经工作台面，提供个体防护，和台面物品不受污染。?可用于操作危险度Ⅱ级和Ⅲ级的感染性物质?在使用正压防护服的条件下，可用于操作Ⅳ级的感染性物质?四种类型区别：排风、气体循环、气流方向等不同A前开口；B可视窗口；C排风HEPA过滤器；D后面的压力排风系统；E送风HEPA过滤器；F风机18BSC-Ⅲ?为外置的专门的排风系统控制气流负压封闭式操作环境，由一个?操作人员通过固定在平安柜窗口的作橡胶手套，进展工作台面的操?有可灭菌的、装有风装置的传递箱HEPA过滤排?与一个双开门的接，并用它来去除进出平安柜的高压灭菌器相连所有物品的污染?适用于的实验室三级和四级。生物平安水平?用于操作危险度子Ⅲ、Ⅳ级生物因1920〔三〕使用要求1、生物平安柜的安装要求?清洁环境，远离人员、物品流动大的地方。?远离门和窗。?侧面留有30cm的间距。?预留出30-35cm空间连接收道，外接的排气口要比楼层高2米。?专用电源212、生物平安柜的使用1.正确安装全柜处于正常工作状态。，确保平安柜与外部排风系统压力平衡，保证安2.定期维护和检测，确保平安性。3.注意保洁，每天做完实验后，酒精消毒。去除所有废弃物，再用75%4.一般滤膜有50%时候，需5-10更换滤膜年使用寿命，在仪器压力表显示压力为。223、操作标准?1)操作人员:维持生物平安柜开口处气流的完整性。双臂应垂直缓慢进出平安柜。进入后等待约1min，再操作。必需的物品提前置于平安柜内，减少双臂进出次数。?2)生物平安柜运行:A1及A2型，不使用时可以关闭。B1和B2型始终保持空气流动以维持房间空气平衡。开场工作前和完成工作后，应运行数分钟排出污染空气。?3)物品放置:①生物平安柜前后气格栅不被阻挡;②平安柜内物品应70%酒精外表消毒;③物品应尽可能地放在工作台后部，可产生气溶胶的设备靠后部放置;④盛装生物危害性废弃物的物品，放在平安柜内某一侧，不应放在柜外面;⑤工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进展。在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进展理想的工作台摆放原那么清洁——污染区干净的物品被污染的区域废弃物托盘垃圾袋?4)紫外灯:每周对紫外灯进展清洁，防止灰尘和污垢影响杀菌效果。定期检查紫外线的强度，操作时关闭紫外灯，实验前、后开启20-30min。?5)明火:防止使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对接种环灭菌。?6)溢出物处理:发生感染性物品溢出时，在平安柜工作状态下，用有效消毒剂立即进展清理，尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进展消毒或高压灭菌。?7)保持干净:在实验完毕时，所有物品去除外表污染后移出平安柜。擦拭生物平安柜的内部外表污染。用70%酒精消毒。?8)个人防护:在进展一级和二级生物平安水平的操作时，可穿普通实验服。在进展三级和四级生物平安水平操作时，使用前面加固处理的反背式实验隔离衣。手套应套在隔离衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护操作人员的手腕。有些操作还需戴口罩和平安眼镜。?9)警报器:生物平安柜采用两种警报方式，窗式警报器提示滑动窗移到适宜的位置；气流警报器说明正常气流模式受到了干扰，立刻停顿工作，并通知实验室主管。〔四〕维护校验?在进展维护、更换过滤器、性能测试、以及气体消毒以前，应使用消毒剂和暴露内外表的污染。去除所有内部工作外表?评估内容：漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压平安柜的完整性、HEPA过滤器的泄气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进/换行测试。还可选择进展漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性的测试。27二、负压柔性薄膜隔离装置?将工作空间用透明聚氯乙烯架上，隔离装置始终维持负压。入口处的空气经一个(PVC)完全包裹起来悬挂在钢HEPA直接将空气排到建筑物外过滤器过滤，出口处经两个HEPA过滤器过滤，可?无生物平安柜的现场，采用柔性薄膜隔离装置来进展险生物体(危险度Ⅲ级或Ⅳ级)的操作高危28三?????个人平安防护用具1.实验服、隔离衣、连体衣、围裙2.护目镜、平安眼镜和面罩3.口罩及防毒面具4.手套5.鞋P3P429四生物实验室技术标准?〔一〕标本的平安操作?1.体积的标本收集容器巩固，防止意外破损。标本不得超过总明书与标本分开放置，并置于防水袋中。50%，无泄漏，外部无残留。粘贴标签，要求或说?2.器，固定标本容器并保持直立运输。标本运输使用可高压灭菌或耐受化学消毒剂的二级容?3.空间。工作人员了解标本的潜在危害和防护方法，掌握破标本处理接收大量标本的实验室应安排专门的房间或碎或泄漏容器的处理方法。内层容器需在生物平安柜内打开，并准备好消毒剂。30?〔二〕实验室仪器和器具操作?1.移液管和移液器31?2.离心机-离心桶的装载、平衡、密封、翻开在平安柜中进展。-每次使用后要及时去除离心桶、转子和离心机腔的污染32?3.搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用?确认仪器正常运转。?建议使用聚四氟乙烯〔PTFE〕器皿。?应有防护装置，有条件在生物平安柜里，覆盖塑料罩操作。?在操作完毕后，应在生物平安柜里开启容器。?使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。33?4.冰箱?冰箱、低温冰箱和固体干冰盒要定期除霜和清扫。破裂的安瓿、冻存管等要及时去除，应配戴面部保护装置并戴手套，清扫后，进展外表消毒处理。?冰箱内容器有清楚的标签〔内容物的科学命名、贮存日期和贮存人〕，无标签及过期材料应高压灭菌后丢弃。对于冰箱内的储存物应有详细的目录。?除非有防爆措施，严禁将易燃液体保存在冰箱里，冰箱的门上应张贴这方面的本卷须知。34?5.玻璃器皿和锐器?尽可能用塑料制品代替玻璃制品。用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管?减少使用注射器和针头，必须使用时采用锐器平安装置。?严禁给用过的针头戴护套。35?6.装有冻干传染性物质安瓿开启与储存?安瓿开启：首先消毒安瓿的外外表，再用砂轮在安瓿外表面的棉塞或纤维塞中部挫一划痕，手里垫一块酒精浸透的棉花再握住安瓿，轻轻地移去安瓿顶部并将其按污染物处理。如果棉塞或纤维塞留在安瓿上，那么将其用灭菌镊子除去。向安瓿内缓慢地参加液体以重悬内容物，防止产生泡沫。?安瓿储存：不得将装有感染性物品的安瓿侵入液氮，可将感染性物质真空冷冻枯燥后超低温保存。从冷藏处取出安瓿时要进展眼睛和手的防护36?7.感染性物品操作?(1)申请单放在防水袋或信封内，不应翻开袋子。血样采集:由受过培训的人员采集，戴手套操作。检验?(2)睛和粘膜保护装置。操作中防止或尽量减少气溶胶的产生血清别离:操作人员经过严格培训，操作时戴手套、眼，不得倾倒。废弃标本管需高压灭菌。操作前应准备相应的消毒剂，用于及时处理喷溅和溢出的标本。?(3)、唾液等标本所使用的载玻片、盖玻片、染色及洗液等废涂片、盖玻片、组织及组织切片:用于显微镜观察血液弃物均经消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标本应用甲醛或多聚甲醛固定，防止冷冻切片。如果必须进展冷冻切片，应当使用平安罩，戴平安防护面罩。去除污染时，仪器温度要求升至室温。37?(4)朊蛋白〔prion〕相关组织:?朊病毒的抵抗力很强，一旦发生污染去除困难，故操作的实验室应使用专用的设备，不能共享。?所有的操作都应在生物平安柜里进展。必须穿一次性的实验室保护服〔罩衫和围裙〕和戴手套〔病理学操作者要在两层橡胶手套之间戴钢网手套〕。?使用一次性的塑料器皿取代玻璃器皿。?不应使用组织处理机，可代之以塑料的广口瓶和大口杯。?使用过的钢网手套和Kevlar手套在内的非一次性器械必须灭菌前方可再次使用。?朊蛋白对紫外线不敏感，平安柜用甲醛蒸汽处理?高效空气过滤器〔HEPA〕在撤除后应用最低达1000℃的温度燃烧。38?〔三〕个人行为要求?个人物品、服装、食品和饮料只应存放于非实验室区域内指定的专用处。?实验室内制止吸烟、喝水、吃东西。?制止在工作区内使用化装品和处理隐形眼镜。?长发应束在脑后。?在工作区内不应配戴戒指、耳环、腕表、手镯、项链和其他珠宝39五生物实验室的消毒与灭菌?〔一〕不同设备与物品的消毒方法?〔二〕消毒灭菌操作与效果监测?〔三〕实验室废弃物处理要点40?〔一〕不同设备与物品的消毒方法?1、生物平安柜—实验完毕，生物平安柜内所有物品(包括仪器设备)都应进展消毒，并从生物平安柜内取出。—用有效氯2000mg/L的含氯消毒剂溶液擦拭台面、内壁和前后面玻璃，保持完全湿润30～60分钟。—开启紫外线灯照射30～60分钟。—然后用清水与干净的抹布擦净，以防消毒液腐蚀。—消毒完毕，逐一关闭送风和通风设备。—更换过滤器〔网〕前用甲醛进展熏蒸消毒，然后轻轻取下过滤器〔网〕装入专用密闭包装与容器内，容器外外表消毒后由专车运至指定单位燃烧处理。41?2、仪器设备—局部轻度污染。用；贵重或精细仪器用有效氯1000-2000mg/L擦拭，保持湿润30-60毒完毕用清水与干净的布擦净；紧急时对非芽孢污染仪器设备用2%戊二醛擦拭30-60分钟〔按制造商说明〕，消分钟乙醇溶液擦拭三遍。75%—离心管未密闭、试管破裂等液体外溢时。用，保持湿润至少60分钟〔按制造商说明〕。2%戊二醛擦拭离心机内部—有内腔的或严重污染的仪器设备〔如受细胞、培养液、体液或血液等污染〕，整机装入专用密闭包装与容器内，容器外外表消毒后由专车运至指定单位用环氧乙烷消毒。—需操作不同的病原微生物前、设备维修前、出现重大污染或意外暴露事故后，应用甲醛或过氧乙酸熏蒸消毒。42?3、感染性材料与器材—使用后丢入专用密闭收集袋与容器内，连同包装与容器一起经压力蒸汽121℃作用20-30分钟。—大的容器外表用有效氯2000mg/L含氯消毒液消毒，保持完全湿润60分钟；如遇细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至5000mg/L作用60分钟。?4、物体外表—用有效氯1000-2000mg/L含氯消毒液擦拭消毒，保持完全湿润30～60分钟后用清水去除消毒液残留；如有细胞、培养液、体液或血液等污染，有效氯含量加大至5000mg/L作用60分钟。43?5、防护用品—除防护眼镜与呼吸器外均使用一次性防护用品。—每次实验完毕后离开实验室前，脱下防护用品进展消毒，有明显污染时随时消毒。—一次性防护用品使用后丢入专用密闭收集袋内，经压力蒸汽121℃作用20-30分钟。—防护眼镜在2000mg/L有效氯溶液中浸泡60分钟。—呼吸器用毒后更换呼吸过滤局部。环氧乙烷消毒或按制造商提供的方法消毒，消44?6、检验记录—应通过机、计算机等手段发送至实验室外。—污染的检验原始记录等送出实验室前用压力用蒸汽121℃作包装后外送专业单位进展20分钟，快排枯燥；大量的检验原始记录等可采用密封辐照或环氧乙烷消毒。?7、污水消毒—所有实验污水必须经过消毒处理并到达标准前方可排放；—污水排放标准参照国家标准〔GB18466-2005〕执行。?医疗机构水污染排放标准?45?8、手的消毒—消毒方法。用肥皂流水洗手乙醇、1～2分钟，擦干后用75%手消毒剂消毒手部3000-5000mg/L干将手吹干或用消毒纸巾、纱布或毛巾擦干。1～3分钟，然后用清水冲洗，用自动有效碘溶液或经卫生部批准的—本卷须知。水龙头、皂液与手消毒液均应采用非手触方式。46?〔二〕消毒灭菌操作与效果监测?1、压力蒸汽灭菌器?物理监测：每次消毒用留点温度计作温度监测并记录作用时间，代表物理参数。?化学监测：-每包外用化学指示胶带监测，是否经过灭菌处理；-大包或难消毒物品包，中央用包内化学指示剂监测，根据颜色变化判断是否到达灭菌条件。?生物监测：每月用生物指示剂监测，嗜热脂肪芽孢杆菌〔ATCC7953)生物指示剂，监测后应置56℃培养24～48h后观察。47?-*操作方法：2、紫外线杀菌灯无人条件下用悬吊式或移动式照射，度70μW/cm2，每m3不少于，照射时间≥30W，1m处辐照强30-。分钟*本卷须知：*保持紫外线灯外表清洁，每两周用酒精棉球擦拭一次室内保持清洁枯燥，减少尘埃和水雾，温度低于20℃或*紫外线辐照强度低于高于40℃、相对湿度大于70%60%应及时更换。时应适当延长照射时间；-消毒效果监测：*每3-6