如何做好动物实验

如何做好动物实验第1页/共62页

一、实验动物的选择“I’msoproud!Allofmykidsaregoingintoresearch”实验动物选择恰当与否关系到课题质量的高低、经费开支的多少、研究途径正确与否以及实验方法的简单与繁琐问题，甚至会影响到课题的成败及研究结果正确性。第2页/共62页1、选用与人体结构、功能、代谢和疾病特征相似的动物进化程度愈高，结构、功能、代谢等愈接近人类，根据实验目的选择。非人灵长类动物

是最接近于人类

的动物，如，猕猴。基本原则第3页/共62页2、尽量选用符合国家标准的实验动物基本原则第4页/共62页3、选用解剖、生理特点符合实验目

的要求的动物适当使用能降低实验操作难度，实验更顺利。开胸和心脏实验----适宜选用兔做实验；观察药物对排卵的影响，进行避孕药研究-----适宜选用兔、猫；肝外科实验研究------适宜选用大鼠；胆囊功能研究------不能选用大鼠；基本原则第5页/共62页发热、解热和检查致热源实验-----适宜选用兔做实验；变态反应、Vc缺乏症研究----适宜选用豚鼠；犬、猴、猫的呕吐反应敏感，大鼠无呕吐反应；基本原则4、充分利用不同品系实验动物的某些特殊反应第6页/共62页5、选用与实验要求适应的实验动物规格年龄----年龄不同，其生物学特性往往不同,一般选性成熟后的青壮年动物。太小的动物的生理功能未达到成年水平。太老的动物的各器官老化，代谢功能下降，只在老年医学研究中使用；体重----在正常营养状态和饲养条件下，体重与年龄有一定的相关性；性别----许多实验证明，同一品种（系）不同性别的动物对外界刺激的反应不一致。基本原则第7页/共62页二、动物实验设计对于任何研究课题，实验设计都是成功的关键。涉及动物实验的更是如此。第8页/共62页步骤和内容1、查阅文献，根据初始想法或前期研究基础的新思路广泛查阅文献。明确研究问题的背景明确相关研究使用的方法明确选择的动物模型排除不必要的重复研究这个阶段应考虑3R，通过文献查阅了解替代动物实验的方法是否可行、引起动物疼痛的操作已经得到评估认可并提供证据。第9页/共62页2、提出假设观察和记录信息分析和归类信息提出假设第10页/共62页3、实验设计研究方案，细心计划所有操作并记录在案。方案应包括可控实验变量的实验操作、适合测定的变量参数、获得样品和产生实验数据的最适方法。（确定所有实物、数据的收集和测定的时间安排表）实验操作包括动物模型持续的时间（慢性研究），模型预期疾病和或转归的进程（决定测定的最适时间点），参加人员的时间和分工，实验花费。（明确已知和潜在的危害因子，适当预防措施）第11页/共62页实验单元研究的实体是实验单元，可以是一个动物个体，也可以是一组动物群体。第12页/共62页实验组别的动物只数是实验设计的重要环节。

每一实验组的动物数量一般可通过预期各组检结果差异的可能程度统计而定。

一个标准笼所能容纳动物的数量也是确定因素第13页/共62页对照消除外来变量或可能未知的变量阳性对照阴性对照空白对照媒介物对照比拟物对照第14页/共62页随机化,动物分组时必须随机分配动物标号，随机抽取利用随机数字表或计算机随机程序第15页/共62页设计中还应注意的问题实验人员的培训和资格认可预实验，验证设计合理性、完善操作步骤、练习实验技术、检验仪器设备、估计变量参数测定的误差。实验室和饲养管理条件第16页/共62页三、动物实验技术动物实验：是用实验动物作人的替身进行各种生命科学实验的过程。动物实验技术是实施动物实验的重要手段第17页/共62页1、仪器设备的准备根据实验方案和要求准备相应的仪器。并检查仪器的功能是否符合，是否能正常运行；检查仪器所需的耗材是否够用。2、器械物品的准备根据实验的步骤准备器械物品。需仔细阅读试验步骤，认真准备器械物品，不要遗漏，尤其是细小物品，以免影响试验的正常进行。3、试品的准备在实验前试品的准备非常重要，试品的准备和实验动物的订购在时间上必须统一，否则会因试品已准备而无实验室或动物，造成试验延期；或者动物已备好却没有试品造成动物浪费和经费损失。动物实验前的准备第18页/共62页4、实验动物的购入根据实验设计，在实验前预订实验动物，预定时将动物的种、系、日龄、体重、性别、数量等规格写清楚。接收动物时向生产供应单位索取实验动物的质量合格证明，根据实验时间的长短，同时购入适量的饲料和垫料。如果从外地购买动物，应考虑运输中的各种因素对实验动物的影响，并察看运输检疫证明；从国外引进实验动物时，必须到动物进口检疫局办理相关手续，隔离检疫期较长（2个月），应充分考虑时间对动物的影响。第19页/共62页实验动物质量合格证明第20页/共62页5、实验动物的一般检查首先要根据实验要求检查实验动物的种、系、日龄记录是否符合，再次要对实验动物的体重、性别、数量进行一一核对，最后要查看实验动物的被毛、饮食状况、用药史、病史、免疫情况。第21页/共62页6、实验动物的背景资料复合实验前需核对实验动物质量合格证明、近期微生物和寄生虫检测报告、近期遗传检测报告，如果是国家保护动物，需查看野生动物保护机构的批准文件。第22页/共62页运输会对动物产生应激可能诱发处于亚临床感染状态的动物感染发作7、隔离检疫和安定检疫就是将新接收的动物与设施中原有的动物隔离，直至确定该新进动物的健康和可能的微生物状况。第23页/共62页。

有效的检疫计划能够最大限度的降低外来病原体引入既定群体的风险。有效的检疫程序特别有助于限制人员暴露在非人灵长类所携带的人畜共患病感染中。第24页/共62页。将啮齿类或其它动物移出动物设施用于实验（如影像学或行为学实验）时，根据动物群体的健康状况，并且遵照已有的动物生物安全计划，需要将移出的动物与原群体分开饲养。第25页/共62页稳定期，不管动物是否需要被隔离，新进动物在使用前，都应有一段生理、心理和营养条件的稳定期。稳定期根据动物运输的方式和时间、种类和预定用途而定。第26页/共62页动物实验基本技术1、辨别雌雄根据排泄孔和生殖孔的距离辨别。距离近的为雌性，距离远的为雄性第27页/共62页2、标记方法（1）染色法：染料有：苦味酸（黄）、碱性品红（红）、亚甲兰（兰）、龙胆紫（紫）（2）耳标法：第28页/共62页（3）挂牌法（4）

剪毛法（5）

烙印法（6）

电子芯片（玻璃管标签）植入法第29页/共62页3、实验动物的抓取与固定

在采集样品、更换笼具、转移动物时，必须要抓取并保定动物。学习抓取与保定动物的目的是为了便于操作、保证实验人员安全、防止动物意外损伤。实验人员在进行动物实验时，必须正确抓取动物，禁止对动物采取突然、粗暴的方法，以免被动物咬伤或造成动物伤亡和应激反应。在抓取与固定时，首先应慢慢友好地接近动物，注意观察动物的表情，等动物安静下来时抓取，抓取动作应准确、迅速、熟练、温柔。必要时实验人员应戴上防护用具。第30页/共62页小鼠的抓取与固定第31页/共62页

大鼠的抓取与固定第32页/共62页

家兔的抓取与固定第33页/共62页第34页/共62页犬的抓取与固定第35页/共62页猴的抓取与固定第36页/共62页小型猪的抓取与固定第37页/共62页4、麻醉疼痛与止痛痛：因组织伤害导致真实的或潜在的官感上的不愉快。止痛：用药物或其他方法使动物没有痛的感觉“Well,thatexplainsthepain!”GaryLarson~1985第38页/共62页动物会否有疼痛？没有直接的证据行为反应在人类能引起疼痛的类推给动物第39页/共62页为何要处理疼痛法规及道德的理由动物利益有利于研究成果快速回复正常的生理功能较高的生活率对生理状态的影响减少第40页/共62页疼痛存在：抓取固定实验操作实验后恢复第41页/共62页麻醉概述麻醉：显著抑制感觉意识和运动反射，使感觉处于迟钝状态，是可控制或有可逆性。镇痛：短暂地消除或降低痛苦的感觉麻醉一般分为全身麻醉和局部麻醉。全身麻醉分四期：随意兴奋期、不随意兴奋期、外科麻醉期、延髓麻痹期第42页/共62页实验动物的麻醉方法和麻醉药平衡-复合镇痛，种属差异，个体差异性情，脂肪，病史，营养及健康状况药物剂量与浓度，动物大小，年龄，健康状况，操作需要，严密监控麻醉前的准备：减轻压力，精确剂量，禁食，麻醉方案，术前用药/麻醉诱导/维持注意手术合并症术后监控疼痛及痛苦，麻醉后兴奋，关怀第43页/共62页根据动物体重、麻醉剂量、麻醉药浓度计算麻醉药用量记录给药、进入兴奋期、麻醉期的时间。

第44页/共62页小鼠常用麻醉药的剂量及注射途径动物给药途径盐酸氯胺酮戊巴比妥硫喷妥钠水合氯醛小鼠i.vi.Pi.m22～4435502550400单位：mg/kgi.v－静脉注射；i.p－腹腔注射；i.m－肌肉注射第45页/共62页大鼠常用麻醉药的剂量及注射途径动物给药途径盐酸氯胺酮戊巴比妥硫喷妥钠水合氯醛乌拉坦大鼠i.Vi.Pi.m22～44255020404001100单位：mg/kgi.v－静脉注射；i.p－腹腔注射；i.m－肌肉注射第46页/共62页5、供试品的给予方法（1）经口给药自动口服给药灌胃给药第47页/共62页（2）注射法给药皮下注射皮内注射

第48页/共62页肌肉注射

第49页/共62页腹腔注射第50页/共62页静脉注射尾静脉注射大鼠、沙鼠、豚鼠后肢浅背侧足中静脉注射兔耳缘静脉注射第51页/共62页犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射猴前臂桡侧皮静脉、下肢隐静脉猪的耳静脉第52页/共62页脑内注射：额部椎管内注射：第七腰椎间隙关节腔注射第53页/共62页6、各种检验标本的采集方法采血①尾尖采血：大小鼠②眼眶静脉丛采血：大小鼠、沙鼠③眼眶动静脉采血：小鼠④腹腔静脉采血⑤心脏采血⑥兔耳缘静脉采血⑦颈静脉采血：兔、犬、猴、小型猪第54页/共62页采尿①代谢笼法②导尿法③压迫膀胱法采粪①代谢笼法：大小鼠、兔②压迫肛门③自然排出的粪便：犬、猴、小型猪第55页/共62页7、安乐死“安乐死”（euthanasia)源自希腊文，由安逸（eu）和死（thanatos)两个词素构成，安乐死的原始定义是“安详无痛的死亡”它是一种非自然的，由外力所造成的死亡。实验动物的安乐死是指在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间内无痛苦的死亡。不会由刺激产生的肉体疼痛及由于刺激引起精神上的痛苦、恐怖、不安及抑郁。第56页/共62页安乐死注意事项：死亡时尽可能减少惊恐、疼痛。使其在最短时间内失去意识迅速死亡。方法可靠。对操作人员安全。采用的方法要与研究的要求和目的一致。对观察者和操作者的情绪影响最小。对环境污染的影响最小。需要的机械设备简单，价廉，易操作。处死动物的地点应远离并与动物房分开。第57页/共62页安乐死的方法化学药物：巴比妥酸盐类、无爆炸性吸入

麻醉剂类（CO2气体）物理学方法：颈椎脱臼法、断头法和击晕

穿刺法CO2第58页/共62页8、病理解剖取材技术背景资料记录实验动物种类、年龄、性别、原编号、体重等剖检时间、地点、安乐死方法、解剖者其它：剖检前禁食时间（一般12小时）第59页/共62页取材基本要求：通常选