免疫组化结果判断及常见问题的分析

现在是1页\一共有43页\编辑于星期六肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。现在是2页\一共有43页\编辑于星期六

panCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。现在是3页\一共有43页\编辑于星期六一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。现在是4页\一共有43页\编辑于星期六免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER现在是5页\一共有43页\编辑于星期六现在是6页\一共有43页\编辑于星期六现在是7页\一共有43页\编辑于星期六现在是8页\一共有43页\编辑于星期六现在是9页\一共有43页\编辑于星期六现在是10页\一共有43页\编辑于星期六合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判现在是11页\一共有43页\编辑于星期六C-erbB-2优良中差现在是12页\一共有43页\编辑于星期六4321ER现在是13页\一共有43页\编辑于星期六子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR现在是14页\一共有43页\编辑于星期六编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断现在是15页\一共有43页\编辑于星期六PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析现在是16页\一共有43页\编辑于星期六P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）现在是17页\一共有43页\编辑于星期六PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性现在是18页\一共有43页\编辑于星期六胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。现在是19页\一共有43页\编辑于星期六CD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。现在是20页\一共有43页\编辑于星期六K-rasVEGF现在是21页\一共有43页\编辑于星期六附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

现在是22页\一共有43页\编辑于星期六2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

现在是23页\一共有43页\编辑于星期六

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

现在是24页\一共有43页\编辑于星期六现在是25页\一共有43页\编辑于星期六四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥现在是26页\一共有43页\编辑于星期六内源性生物素—肾小管现在是27页\一共有43页\编辑于星期六内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌现在是28页\一共有43页\编辑于星期六蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色现在是29页\一共有43页\编辑于星期六嗜酸性粒细胞中细胞色素显色现在是30页\一共有43页\编辑于星期六吞噬细胞内

含铁血黄素

现在是31页\一共有43页\编辑于星期六坏死组织着色：AE1/AE3现在是32页\一共有43页\编辑于星期六坏死组织着色现在是33页\一共有43页\编辑于星期六交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色现在是34页\一共有43页\编辑于星期六黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色现在是35页\一共有43页\编辑于星期六灶状着色：机械原因着色现在是36页\一共有43页\编辑于星期六CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色现在是37页\一共有43页\编辑于星期六全片着色现在是38页\一共有43页\编辑于星期六边缘着色现在是39页\一共有43页\编辑于星期六“阴阳脸”着色现在是40页\一共有43页\编辑于星期六气泡现在是41页\一共有43页\编辑于星期六非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3