维生素类药物的分析

关于维生素类药物的分析第1页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。人体不能合成维生素。第2页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

VitA、D2、D3、

E、K1

等脂溶性水溶性

VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸分类：第3页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:第一节维生素A的分析全反式第4页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三维生素A325.5100%全反式新维生素Aa32875%2－顺新维生素Ab320.524%4－顺新维生素Ac310.515%2，4－顺异维生素Aa32321%6－顺异维生素Ab32424%2，6－顺

相对生物效价顺反异构（一）结构：具有共轭多烯侧链的环己烯一、结构与性质第5页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三VitA2VitA3共轭多烯侧链易发生脱氢、脱水、聚合反应鲸醇第6页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三环氧化物VitA醛VitA酸第7页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三CHCl3（二）性质1.溶解性：易溶于有机溶剂和植物油等，不溶于水2.不稳定性3.紫外吸收特性4.与三氯化锑呈色第8页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（一）三氯化锑反应条件：无水、无醇CHCl3二、鉴别试验SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失第9页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三蓝色紫红第10页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三BP（2008）λmax为326nm一个吸收峰UV法（二）λmax为350～390nm三个吸收峰第11页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三去水VitA（VitA3）↓VitA第12页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第13页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值BP

对照品法显色剂三氯化锑TLC法（三）第14页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三立体异构体氧化产物及光照产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）UV法（三点校正法）（一）含量测定三、第15页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三点校正法1.前提条件：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。第16页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三测定对象：VitA醋酸酯第一法等波长差法第二法等吸收比法(皂化法)测定对象：VitA醇2.波长的选择：（1）1VitA的max（如VitA酯328nm）（2）23

分别在1的两侧各选一点第17页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第18页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第二步：求3、测定法（1）基本步骤:

第一步：A选择，A328测定或A328校正第三步求效价第19页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第四步：求标示量％A*D*换算因数*W＝W*100*标示量×100％第20页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三换算因数：单位E数值所相当的效价数（由纯品计算而得）第21页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第22页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第23页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

判断是否在326～329nm之间改用第二法是否

求算并与规定值比较1、维生素A醋酸酯-第一法（等波长差法）A值的选择：第24页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

规定值差值

判断差值是否超过第25页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三03%－15%－3%第二法第二法

计算A328（校正）

用A328计算有超过0.02无超过f第26页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

VitAD胶丸中VitA的含量测定

精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300：0.354A316

：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中维生素A的含量？第27页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299

+0.01－0.010+0.02+0.04－－－－－=====第28页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第29页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三水溶性脂溶性2、维生素A醇-等吸收比法（皂化法、6/7A法第30页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定

计算是否0.730.73第31页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三03%－3%f第32页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（二）高效液相色谱法色谱柱：硅胶；流动相：正己烷-异丙醇（997：3）检测波长：325nm流速:1.2ml/min内标：VA醋酸酯第33页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三氯化锑比色法（三）优点：简便快速λmax618nm～620nm缺点：呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性标准曲线法第34页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵盐)第二节维生素B1的分析HClCl-一、结构与性质（一）结构第35页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三1.溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。3.UV共轭双键λmax=246nm二、性质2.硫色素反应4.与生物碱沉淀试剂反应5.氯化物的特性第36页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三专属性反应二、鉴别试验（一）硫色素荧光反应第37页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第38页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三硫色素，蓝色荧光＋2H第39页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应第40页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三S元素反应（三）其他反应H+Cl-第41页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三、含量测定冰醋酸+醋酐，电位法指示终点（一）非水溶液滴定法第42页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三UV法（二）=421A=ECL片剂、注射剂第43页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三NaOH（三）硫色素荧光法原理1.第44页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇SdAb对照液供试液dSbAC样´--=×C标特点3、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）专属性强，氧化产物及代谢产物不干扰，可用于制剂分析，体液分析等。第45页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第三节维生素C的分析L－抗坏血酸结构与性质一、（一）结构二烯醇内酯两个手性碳（C4,C5）第46页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（二）性质1.溶解性：易溶于水水溶液呈酸性2.酸性：一元酸，C3－OH的pKa=4.17，C2－OH的pKa=11.573.旋光性：手性C（C4、C5）4.还原性5.水解反应：6.具糖的性质：具糖类的性质与反应7.UV特征**第47页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三有活性有活性无活性二烯醇结构-还原反应第48页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验二、第49页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（一）与AgNO3反应（二）与2，6-二氯靛酚反应氧化型还原型第50页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三与碱性酒石酸铜反应USP与KMnO4反应（三）与其他氧化剂反应四、薄层色谱法:Rf值第51页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（蓝色）50℃(吡咯)（五）糖类的反应第52页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三BP0.01mol/LHCl（六）UV第53页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三、杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查（二）铁、铜离子的检查维生素C原料药片剂注射剂维生素C原料药糠醛缩合呈色原子吸收法（三）草酸的检查：氯化钙第54页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三指示剂淀粉（一）碘量法四、含量测定原理：利用Vc强的还原性H+第55页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。2、方法原料药第56页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（2）酸性环境稀醋酸

（1）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定

赶走水中O2减少O2的干扰3、讨论第57页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三4.附加剂干扰的排除片剂——过滤注射剂

——抗氧剂

——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5第58页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a第59页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三(二)2，6-二氯靛酚滴定法1、原理2、方法自身指示终点法第60页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（2）快速滴定2min内（1）酸性环境HPO3-HAc

稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定（定量过量）（测剩余染料）3、讨论第61页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（4）缺点

需经常标定贮存≤一周不稳定专属性强，多用于含Vc的制剂和食品的分析（5）优点第62页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（三）高效液相色谱法血浆中维生素C的测定(稳定性）标准溶液包括样品预处理过程均需加入偏磷酸，偏磷酸同时可用于血样中的蛋白沉淀；当天取血当天测定；处理好的样品亦需冰箱保存第63页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第四节维生素D的分析一、结构与性质（一）结构维生素D2(麦角骨化醇)维生素D3(胆骨化醇)第64页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三1.性状：无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味。2.溶解性：宜溶于有机溶剂，在植物油中略溶，在水中不溶。3.不稳定性：含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。（二）性质第65页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三4．旋光性维生素D26个手性碳原子维生素D35个手性碳原子5．显色反应：甾类化合物氯仿溶液黄色红色紫色绿色6．紫外吸收特性：无水乙醇265nm

醋酐硫酸第66页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三二、鉴别试验

（一）显色反应1．与醋酐-浓硫酸反应

氯仿溶液黄色红色紫色绿色醋酐硫酸2．与三氯化锑反应本品1,2-二氯乙烷

三氯化锑试液

橙红色

粉红色第67页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三3．其它显色反应

维生素D

三氯化铁

橙黄色

二氯丙醇乙酰氯绿色（二）比旋度鉴别无水乙醇溶液

维生素D2

比旋度为＋102.5°至＋107.5°维生素D3

比旋度为＋105°至＋112°第68页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（三）其它鉴别方法薄层色谱法、HPLC法制备衍生物测熔点紫外、红外吸收光谱

（四）维生素D2、D3的区别反应维生素D2

维生素D3

96%乙醇

10ml取0.1ml

乙醇1ml和85%硫酸5ml

红色λmax570nm

黄色

λmax495nm

第69页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查维生素D290%乙醇溶液

洋地黄皂苷溶液不得发生浑浊或沉淀第70页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（二）前维生素D的光照产物第71页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三四、含量测定正相高效液相色谱法（一）维生素D测定法

含量以单位表示每单位相当于维生素D0.025μg注意：计算的是维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量第72页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三测定在半暗室及避免氧化的情况下进行第一法：无干扰杂质第二法：有VA及其他杂质干扰第三法：用第二法时，前VD峰受杂质干扰仅VD峰可分离第73页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三

第一法内标物：邻苯二甲酸二甲酯色谱条件及系统适用性试验：填充剂：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）检测波长：254nm无干扰杂质第74页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三维生素D3△光照前维生素D3反式维生素D3维生素D3速甾醇D3与维生素D3的比保留时间分离度＞1.0

＞1.0溶液组成先后进样5次，维生素D3峰面积的RSD≤2.0%0.50.61.01.1系统适用性试验第75页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三校正因子测定：维生素D的校正因子:f1=Asmi/Aims前维生素D折算成维生素D的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量测定：计算维生素D及前维生素D折算成维生素D的总量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第76页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第二法第一步：皂化提取供试品OH-加热回流冷却乙醚提取乙醚提取液挥干乙醚残渣甲醇溶解供试溶液A有VA及其他杂质干扰第77页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第二步：分离收集供试品溶液ARP-HPLC维生素D前维生素D维生素A及其他杂质叠峰分离收集供试品溶液B维生素D及前维生素D第三步：按第一法进行含量测定（内标法）挥干内标的正己烷溶液溶解第78页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三第三法第一步：皂化提取同第二法得供试品溶液A第二步：供试品溶液ARP-HPLC维生素D前维生素D维生素A及其他杂质叠峰分离供试品溶液C收集挥干异辛烷溶解90℃、1.5h挥干正己烷溶解前维生素D维生素D第三步：用第一法色谱条件按外标法计算含量用第二法时，前VD峰受杂质干扰第79页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三苯并－二氢吡喃醇第五节维生素E的分析

一、结构与性质（一）结构第80页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***第81页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三生物效价右旋体：消旋体=1.4：10dl－α－生育酚醋酸酯第82页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（二）性质1、溶解性：易溶于有机溶剂，不溶于水4、UV2、水解性：酯键易水解△3、氧化性第83页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三75℃15′（一）硝酸反应橙红色二、鉴别试验第84页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂第85页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三三氯化铁－联吡啶反应△[O]（二）第86页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三生育酚对-生育醌红色Fe3+[O]第87页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三λmax=284nmλmin=254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）第88页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三薄层板硅胶G展开剂环己烷-乙醚（4：1）显色剂硫酸（105℃5′）TLC法（四）（五）其他鉴别方法

红外、气相色谱法第89页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三（二）生育酚

三、杂质检查

1.原理：游离生育酚还原性，硫酸铈滴定2.试剂：硫酸铈滴定液（0.01mol/L）

指示剂：二苯胺（亮黄→灰紫）（一）酸度：游离醋酸第90页，讲稿共98页，2023年5月2日，星期三四、含量测定GC法（一）GC特点1、选择性好灵