多肽与蛋白质类药物

Chapter3多肽与蛋白质类药物

1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽——催产素以后，20世纪50年代都集中于脑垂体所分泌的各种多肽激素的研究。60年代，研究的重点转移到控制脑垂体激素分泌的各种多肽激素的研究。70年代，神经肽的研究进入高潮。生物胚层的发育渊源关系表明，很多脑活性肽也存在于肠胃组织中，从而推动了肠胃激素研究的进展。

3.1多肽和蛋白质药物基本知识基本概念多肽类药物是以多肽激素和多肽细胞生长因子为主的一大类内源性活性成分。蛋白质药物包括蛋白质类激素、蛋白质细胞生长调节因子、血浆蛋白质类、黏蛋白、胶原蛋白、蛋白酶抑制剂等，其作用方式从对机体各系统和细胞生长的调节，扩展到被动免疫、替代疗法和抗凝血等。细胞生长调节因子——在体内和体外对效应细胞的生长、增殖和分化起调控作用的一类物质。许多生长因子在靶细胞上有特异性受体，仅微量就有较强的生理活性。3.1多肽和蛋白质药物基本知识生物技术在该类中的应用基因工程技术制造------胰岛素、干扰素、白介素、生长素、EPO等实现了工业化，发展方向为转基因动植物许多活性蛋白质、多肽都是由无活性的蛋白质前体，经过酶的加工剪切转化而来的有共同的来源，相似的结构，保留着若干彼此所特有的生物活性。研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异同与其活性的关系，将有助于设计和研制新的活性多肽药物。对蛋白质类药物进行结构修饰按来源分生化药物——来源于动植物有机体基因工程药物——来源于基因工程菌表达生产的药物习惯分法多肽生化药物、细胞生长因子、抗体药物、抗菌肽、酶类药物多肽、蛋白质类药物分类多肽类激素、多肽抗生素：消化道多肽、下丘脑多肽、脑多肽、激肽等；动、植物蛋白。

酶类与辅酶类药物：蛋白水解酶类、凝血酶及抗栓酶，辅酶Q10等。生化药物激素类及神经递质类药物：人生长激素释放抑制因子，人胰岛素，人生长激素

细胞因子类药物：人干扰素，人白细胞介素，集落刺激因子，促红细胞生成素

酶类及凝血因子类药物：单克隆抗体、疫苗、基因治疗药物、白介素、生长因子、内啡肽、反义药物、人生长激素、促红细胞生成素、肿瘤坏死因子等。基因工程药物多肽和蛋白质的物化性质1.酸碱性多肽是小分子，化学性质与氨基酸类似，含有20个以上氨基酸残基的多肽与蛋白质没有明显界限；蛋白质是呈两性解离的电解质，通常在等电点时，蛋白质的溶解度最小，不稳定，易于从溶液中沉淀析出。各种蛋白质分子都有自己的等电点。2.离子结合蛋白质存在两性，其表面带有一定量的电荷，可与阴离子或阳离子结合。很多离子与蛋白质形成不溶性的盐，可作为蛋白质的沉淀剂。多肽和蛋白质的物化性质多肽和蛋白质的物化性质3.胶体性质蛋白质分子量大，分子大小达到胶粒1～100nm范围。球状蛋白质的表面多亲水基团，具有强烈地吸引水分子作用，使蛋白质分子表面常为多层水分子所包围，称水化膜，从而阻止蛋白质颗粒的相互聚集。蛋白质分子扩散速度慢，不易透过半透膜，粘度大，在分离提纯蛋白质过程中，可利用蛋白质的这一性质除去小分子杂质——透析(dialysis)。4.变性天然蛋白质的严密结构在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失，如酶失去催化活力，激素丧失活性，称之为蛋白质的变性作用(denaturation)。变性蛋白质和天然蛋白质最明显的区别是溶解度降低变性并非是不可逆的变化，当变性程度较轻时，如去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，变性的可逆变化称为复性。多肽和蛋白质的物化性质3.2多肽和蛋白质药物的生产方法利用传统的生化提取法生产

——从动植物、微生物等直接提取

——通过培养动植物、微生物的细胞得到利用基因工程技术构建工程菌（细胞）进行生产利用原核生物或简单的真核生物如酵母菌作为工程菌（活细胞），通过将含有编码某蛋白或多肽的碱基序列插入一段DNA载体（如质粒）中，并在工程菌（或细胞）中表达，从而得到相应的多肽或蛋白质。加拿大SembioSys生物工程公司利用北美洲普遍栽培的高产油料作物——红花作为转基因植物“平台”，成功生产出“红花子来源人胰岛素”，该胰岛素顺利通过动物实验与Ⅰ～Ⅱ期临床试验，其药代动力学与药效学试验结果与美国礼来利用大肠杆菌表述胰岛素基因生产的重组DNA人胰岛素基本一样。理论上，每公顷红花田可生产出1公斤人胰岛素原料药。3.2多肽和蛋白质药物的生产方法加拿大渥太华大学生物技术研究中心的科研人员也利用另两种高产作物——烟草和水稻植株生产出了一种名为“胰岛素样生长因子”(ILGF)的新型降血糖药物。据称，ILGF的降糖效果甚至优于常规口服降糖药。如果ILGF能通过临床试验并成功上市，或将成为前景可期的国际医药市场畅销产品。3.2多肽和蛋白质药物的生产方法蛋白质、多肽提取分离常用的方法：沉淀法（盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀、结晶等）超滤法膜分离法离心分离法凝胶过滤法离子交换层析疏水相互作用色谱亲和层析等3.3多肽和蛋白质药物的分离基因工程药物分离与纯化的流程3.3.1反相高效液相色谱3.3.1反相高效液相色谱3.3.1反相高效液相色谱分离机理：①用C4～C8烷基作配基，将配基键合在固定基质上作为固定相，以水溶性有机溶剂（如甲醇、乙腈、异丙醇）加强酸作流动相（流动相极性大于固定相）。②蛋白质分子中既有亲水性基团（-OH，-NH、-COOH、SH等），也有疏水性基团（如苯环、-CH3、-CH2和-CH等）。③在水溶液中，疏水性基团避开水而亲合其他疏水性基团，即溶质分子的非极性部分在水中倾向于与水的接触面减小，促进了其与填料（疏水性配基）的亲合。④不同的蛋白质在相同流动相中由于疏水基团数量、种类以及表面分布情况不同，与填料的亲合力也不同，从而得到分离。结果：疏水性强的蛋白质亲合力大，出峰迟；

疏水性小的蛋白质就容易被洗脱。3.3.1反相高效液相色谱色谱条件①固定相：常用C4～C8链烃作为配基（键合在固体基质上）为填料。孔径25～50nm。②流动相：水溶性有机溶剂（B液）（甲醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃）＋水（A液）＋强酸（三氟醋酸、甲酸、磷酸）洗脱能力增大加酸作用：∵－SiOH==－SiO-

＋H+

蛋白质易与—SiO-结合很难洗脱，加酸抑制上述平衡向右离解。减小蛋白质的疏水性，使其保留减弱，易被洗脱。

③温度：常温色谱条件④检测：用紫外检测器，检测波长280nm和220nm。280nm检测中含有含苯环的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸的蛋白质，一般蛋白质都含有苯环，所以280nm检测是普遍使用的波长。

220nm主要检测肽键；所以所有蛋白质普遍适用。⑤洗脱方式：梯度洗脱——逐渐增加洗脱强度。蛋白质的分离一般就需要用梯度洗脱，否则有些蛋白质已达到突跃会很快被洗脱下来，有些蛋白质还远离突跃区，实际上无法被洗脱。而有机小分子的反相色谱中未发现此种突跃现象。实际工作中梯度洗脱时间约为20～60min，B液的变化速度约为每分钟5%～15%。色谱条件30µm15µm5µmInfluenceofParticleSizeontheSeparationeffect应用最大优点：分离度最高；最大缺点：容易使蛋白质变性失活。例子：人的胶原蛋白I型α1和α2键的色谱分离3.3.2疏水相互作用色谱

概念：用适度疏水性的配基作固定相，以盐水体系作流动相，用疏水作用来分离生物大分子化合物的液相色谱法，叫疏水相互作用色谱(HydrophobicInteractionChromatography,HIC)或疏水作用色谱。

在HIC中：固定相表面有疏水性基团，（如-CH2，-CH3

，-ph等）。蛋白质分子是一个外部有亲水层包围，内部有疏水核的具有四级结构的复杂体系。蛋白质表面亲水性很强，但也有一些疏水性的基团，同时团状的蛋白质还存在疏水基团较多的裂隙。分离原理分离原理在不同的介质中裂隙的伸展和收缩程度不同，从而使疏水基团暴露的多少也不同。疏水色谱是利用盐水体系中样品组分的疏水基团和固定相的疏水配基之间疏水作用力的不同而达到分离的目的。

配基和蛋白质分子之间的吸附推动力和样品组分的洗脱机理（即：溶质在色谱中的保留行为）：“疏溶剂化理论”：蛋白质与配基的结合是由于溶质分子有一个减少其与水接触的非极性表面的倾向，它们在盐水溶液中，两个非极性的表面趋向于避开水相而互相接触。溶质和疏水配基的结合是伴随着它们非极性表面暴露在水中的面积的多少而进行的。蛋白质在盐水体系中，有一倾向产生：避开水相而吸附在固定相上。∵生物物质界面自由能比水低，与表面自由能低的固定相产生亲合力结论疏水作用色谱中，蛋白质在固定相上的保留性质是四个可变因素综合作用的结果。这四个因素是：样品分子、填料、流动相组成及性质和温度。填料由基质和键合在基质上的配基两部分组成。（基质＋配基）基质：有“软”、“硬”两类，它们必须有25～100nm的内孔径或有较大间隙的网状结构（孔径要大）。软基质：交联琼脂糖凝胶，交联葡聚糖凝胶、高分子聚合物。硬基质：主要是大孔径硅胶。配基：是一些含氮和氧原子的中等疏水性基团；

or是丁基、苯基这些疏水基团键合在一个亲水性表面。色谱条件主要有：a.具有中等疏水性表面的填料；b.盐析性盐的水溶液为流动相；c.紫外检测器检测，检测波长220或280nm；d.流动相pH值接近中性；e.由高盐浓度到低盐浓度的梯度洗脱，梯度时间20～60min；f.常温或4℃下操作。1、流动相的组成有A液和B液两种。A液：疏水性浓盐水溶液，并含有缓冲液作用的盐以稳定pH值。常用的A液为1.0～3.0mol/L(NH4)2SO4加0.01～0.05mol/L磷酸盐缓冲液；B液：稀的缓冲液，浓度与A液中的缓冲作用的盐的浓度相等。常用的B液为0.01～0.05mol/L磷酸盐缓冲液。盐有两类。盐析性盐：使蛋白质的构象稳定，会促进蛋白质自身间的疏水作用而析出，or促进蛋白质与配基之间的疏水作用而保留在柱上。不失活，溶解度减小。常用：(NH4)2SO4盐溶性盐：提高蛋白质的水溶性，同时会使蛋白质变性。如硫氰酸盐、盐酸胍等会。2、流动相的pH值：一般地pH4～8；常选pH7左右。

3、温度

一般在常温或低于常温下操作。HIC中蛋白质的保留对温度较敏感。①在HIC体系中蛋白质处在活性状态，

T↑使蛋白质的团状结构伸展，暴露出更多的疏水基团，疏水作用增强，保留值增大。

（其他色谱，T↑保留增大）②T↑传质加快，使保留减小。（对所有色谱均适用）

总之，在疏水色谱中，①比②大，∴T↑，保留增大。4、洗脱方式：梯度洗脱。（高浓度盐→低浓度盐）1、流动相的组成疏水作用色谱的应用只用于生物大分子的分离，不用于有机小分子分离。优点：1、其色谱条件温和，蛋白质活性回收率高，一般都在85%以上。2、不用有毒和昂贵的有机溶剂。3、分离性能好。4、高浓度盐的样品可以直接进疏水作用色谱柱进行分离。5、对生物工程产品的粗品可直接上样，一次完成蛋白质的初步分离、脱盐和复性三个目的。

例如：基因重组人干扰素r是一种基因工程产品，其粗品是7mol/L盐酸胍溶液。干扰素在盐酸胍溶液中处于可逆性失活状态。因盐浓度太高无法直接上其他柱，除去盐酸胍后干扰素又容易析出来。若使用疏水作用色谱柱，将此样品直接进样，既脱除了盐酸胍，又达到了复性的效果。而且一步分离后，干扰素纯度可达到90%。IFN-r粗品的HIC分离疏水作用色谱的应用疏水作用色谱与反相色谱的区别相同：蛋白质与填料之间的保留是疏水力作用的结果。区别：1）填料不同

HIC，表面中等疏水性作为配基；RPC，表面是烷基C4－8等疏水性强的为配基。2）疏水力不同HIC，疏水作用较弱；RPC，强。两色谱中洗脱液主要成分不同（正是上面的差异引起的）∴在HIC中可以加入少量有机溶剂以增强流动相的洗脱能力；在RPC中加入盐来改变蛋白质的保留值。疏水作用色谱与反相色谱的区别3.3.3体积排阻色谱将分子按大小进行分离的重要色谱技术；根据分离的对象是水溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，又可分为凝胶过滤色谱（GFC）和凝胶渗透色谱（GPC）凝胶过滤色谱一般用于分离水溶性的大分子，如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水。凝胶渗透色谱法主要用于有机溶剂中可溶的高聚物(聚苯乙烯等)相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。

1、原理凝胶过滤色谱(GelFiltrationChromatographyGFC)又称为分子排阻色谱(SizeExclusionChromatographySEC）原理见图解。

凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱2、凝胶过滤色谱的优点分离条件温和，蛋白质收率高，重现性好。分离的分子量范围广。易于操作。3、凝胶过滤色谱的缺点处理量小，时间长，效率低。凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱填料传统的填料用的是葡聚糖交联凝胶，凝胶刚性不理想流速不快，特别是前者压力和盐都会导致凝胶收缩，所以难提高流速，也不容易制备成小颗粒的高分辨率的填料。新填料将葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶混合造粒，再经过高度交联制备出流速快、重复性好、分离效果更好的新型凝胶过滤填料，如superdex系列及琼葡糖凝胶系列都是用这样的。它比普通的葡聚糖凝胶填料相比流速快，刚性好，颗粒均匀，没有非特异吸附，装填后体积不收缩，因此可以在高流速下保持很好的分离效果可以制备成平均粒径为34μm或13μm高效填料。概念：利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。3.3.4离子交换色谱离子交换树脂的结构其结构由三部分组成：不溶性的三维空间网状结构构成的树脂骨架，使树脂具有化学稳定性和机械强度；是与骨架相联的功能基团；是与功能基团带相反电荷的可移动的离子，称为活性离子，它在树脂骨架中的进进出出，就发生离子交换现象。离子交换树脂的结构-网络骨架苯乙烯系、丙烯酸系、酚醛系、环氧系离子交换树脂结构骨架：接有功能基团，本身是惰性功能基团：连接在骨架上，可与相反离子结合待交换分子：在吸附阶段可与活性离子交换，与骨架上的功能基团结合活性离子：与功能基团所带电荷相反的可移动的离子活性离子为阳离子，称阳离子交换树脂，与阳离子发生交换活性离子为阴离子，称阴离子交换树脂，与阴离子发生交换离子交换法是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换而达到分离纯化的方法。离子交换层析原理主要依赖电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离。选择适当条件可使一些溶质分子变成离子态，通过静电作用结合到离子交换剂上，而另一些物质不能被交换，这两种物质就可被分离。带同种电荷的不同离子虽都可以结合到同一介质上，但由于带电量不同，与介质的结合牢度不同，改变洗脱条件可依次被洗脱而达到分离的目的。离子交换层析原理离子交换层析原理开始吸附解吸解吸结束再生①②④⑤③样品解吸剂再生剂-----++-------离子交换色谱优点1.处理量大，操作简单。2.应用广泛。离子交换色谱缺点样品要除盐，分离效果不如亲和和疏水色谱。自学3.3.5膜蛋白色谱3.3.6高效置换色谱3.3.7贯流色谱1亲合色谱的原理AC是吸附色谱的一种。但溶质的保留是一种特异的有选择性的亲合力。填料只是有选择地对一种生物大分子或一类生物大分子有吸附，对其他物质无吸附作用洗脱时先被分离，分段洗脱或梯度洗脱再将生物大分子从填料上洗脱下来，从而达到分离目的。3.3.8亲和色谱亲合色谱的原理亲合色谱填料：是在基质上键合一个特殊的配基（配位体）制得。例如酶的底物、产物、抑制剂、辅酶、变构效应物，抗物的抗原，激素的结合蛋白等都可以作为配位体用于分离对应的酶，抗体和激素。有些配体可以用于一类化合物的吸附分离。如伴刀豆球蛋白可以特异地吸附糖蛋白；三嗪染料作配基也会对某些蛋白质有选择性吸附。配体与分离对象的作用：是一种特异的生物亲合力，是配体与被吸物之间范德华力、疏水力、静电力和其他力的综合作用的结果。这种综合作用力是有选择性的，只对一个或一类生物大分子起作用，对其他物质不起作用。故AC选择性很高。亲合色谱的原理填料（由基质、间隔臂和配体三部分组成）AC填料的基质：分两类。一类为有机聚合物，用得最多的是多糖聚合物，如纤维素，交联葡聚糖、交联琼脂糖等。还有聚丙烯酰胺也是一类常用的基质。多糖基质表面羟基密度大，易制得柱容大的填料，而且其表面羟基对蛋白质无非特异性吸附。但这类基质机械强度低，不耐高压。第二类是多孔玻璃和硅胶。这类基质机械强度高，但柱容较小，表面硅羟基的非特异性吸附难以完全克服。填料（由基质、间隔臂和配体三部分组成）实验技术1、装柱柱子有玻璃柱和不锈钢柱两种。软基质填料装在玻璃柱内，用于常压色谱。硅胶和多孔玻璃基质填料可装在不锈钢柱内用在高效液相色谱上。玻璃柱采用普通的湿法装柱，溶剂应不损害配体的活体，一般用缓冲溶液作分散剂来装柱。不锈钢柱一般采用匀浆法装柱，但装柱压力要低一些。分散剂常用亲水的醇类。实验技术2、洗脱方式AC最常用的洗脱方式是分段洗脱，还有脉冲洗脱和梯度洗脱。分段洗脱的过程是：平衡柱子(平衡液)→上样→平衡液洗涤→洗脱液洗下目标蛋白→再生→平衡→第二次上样脉冲洗脱是在平衡、上样、洗涤后，用一段少量的洗涤液让其象一条密集的脉冲带流过柱子，以洗下某个特定的蛋白。3、流动相（有平衡液和洗脱液两种）平衡液：起平衡柱子和上样后洗去不吸附的杂蛋白及其他杂质的作用。其成分是稀盐缓冲溶液。洗脱液：是使吸附在柱子上的蛋白质解吸的流动相。非特异性洗脱：利用洗脱液的组成、浓度、pH值和温度的改变使蛋白质与配体作用减弱而洗脱下来。特异性洗脱：利用一种对目标蛋白质也有亲合作用的游离配体使其与固定相上配体产生竞争作用把蛋白质拉下来的洗脱。4、共价亲合色谱是一种特殊的AC。利用一种特殊的配体，与待纯化的蛋白质形成某种不太强的共价健，将蛋白质固定在柱子上。待洗去杂蛋白后，用适当的化学方法，将被固定的蛋白质重新释放出来。硫醇—二硫化物交换色谱

——可以用来纯化许多含硫醇的蛋白质

将谷胱甘肽[N2HCH(COOH)CH2CH2CONHCN(CH2SH)CONHCH2COOH]先键合到基质上得到(结构见右)。简写为：再与二吡啶基二硫化物反应得到填料。含硫醇基的蛋白质可牢固地固定在定固定相上，必须用含硫醇基的洗脱液将其洗脱下来，柱子还得用二吡啶基二硫化物再生。硫醇—二硫化物交换色谱5、其他色谱条件上样体积流速温度蛋白质浓度的影响6、柱子的再生与保护再生：用洗脱液充分洗涤后即可再次进样。但是重复使用几次后对目标蛋白的吸附率常会降低。所以用2mol/LKCl加6mol/L尿素洗涤。保护：柱子平时应保存在4℃。柱内充满稀缓冲溶液。为了防止细菌，液体可含万分之二的叠氮化钠。应用亲合色谱应用于酶、蛋白质等生物大分子的分离纯化。例如：α淀粉酶的分离可以使硅胶为基质、淀粉为配体的亲合色谱柱来完成。以去离子水为平衡液，以0.15mol/L磷酸盐缓冲溶液，pH7.0作洗脱液，从工业粗酶中纯化α淀粉酶，活性回收率为93.6%，纯化后的比活提高了20倍。柱子寿命为600次以上。吸附容量4.6mg/g填料。色谱图见右图。α淀粉酶的亲合色谱分离3.3.9电泳分离技术电泳：带电粒子在电场作用下向着与其自身所带的电荷相反的电极的移动。电泳技术：样品以一支持物为载体，在一定的电解质溶液中，各组分在电场的作用下，以不同的速度进行迁移，从而得到分离。电泳技术分类：按支持物的不同，分为：凝胶电泳、纸上电泳和薄膜电泳等。按操作原理分为：一般电泳、等速电泳、等电聚焦电泳和免疫电泳等。对分离物的要求：在介质中必须带电。聚丙烯酰胺凝胶电泳原理：不同带电粒子在同一外加电场作用下泳动的速度是不同的，泳动度取决于带电颗粒的性质，颗粒所带净电荷越多、直径越小，越接近球形、泳动速度越大。介质pH值（蛋白质为两性电解质，有一等电点，在不同pH值下所带净电荷的符号及数量均不同，∴在电场中的泳动速率也就不同了。）电场强度（电场强度越高，粒子泳动速度越快。）离子强度（介质离子强度越大，粒子的泳动越慢。一般在0.02～0.2之间。）电渗等实验条件有关。2、凝胶的化学结构由丙烯酰胺单体聚合成长链，长链之间用N,N-甲叉双丙烯酰胺交联成多孔状结构。孔的大小可以用双丙烯酰胺的浓度来调节。浓度增大，网状结构的空隙（孔径）减小。形

成

凝

胶

的

反

应

式①具有很高的分辨率。大小不同的分子在通过网状结构的凝胶的空隙泳动时受到的阻力不同，大分子物质受到的阻力比小分子的大。这样就使聚丙烯酰胺凝胶电泳兼有分子筛和电泳的双重功能，提高了分辨力。②凝胶空隙的大小可调节，以适应不同分子量的样品。③聚丙烯酰胺凝胶电泳中电渗现象很小。④凝胶机械强度较好，弹性大，易保存。⑤丙烯酰胺纯度高，不会污染样品。3、丙烯酰胺凝胶电泳的优点4、连续与不连续平板凝胶电泳凝胶电泳分为：连续和不连续两类。连续电泳：是指整个电泳系统所用的缓冲液、pH值和凝胶组成都相同。不连续电泳：是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓冲液、pH值和凝胶。优点：稀的蛋白质样品在电泳过程中被浓缩，提高了分辨力。聚丙烯酰胺凝胶电泳常用的是平板电泳仪。装置见下图连续(a)与不连续(b)平板凝胶电泳示意图SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳原理：是一个在缓冲液中加有SDS，并且样品事先用含SDS的溶液作解离处理的电泳体系。当蛋白质在过量的SDS溶液中加热时，天然蛋白质的球形状态就变成线形。变性后的蛋白质，几乎是定量地1克蛋白质结合1.4gSDS，使蛋白质的亚基多肽带上了大量的负电荷。在电场中这种电荷密度相等的粒子严格按照其分子的大小具有不同的流动度。样品按多肽分子量的大小分离，研究人员可以用已知分子量的样品作对照测定未知物的肽链大小。凝胶电泳的应用广泛用于分离蛋白质、酶和核酸等生物大分子及其他带电的有机物。①生物大分子的分离及分子量测定样品组分在电泳中按照其带电情况和分子大小不同而有不同的迁移率，在胶板上得到分离。在SDS不连续凝胶电泳中，样品组分按分子量大小排列，分子量的对数与迁移率之间有一个线性关系。因此在电泳时加入标准分子量的蛋白质标准样，可以测定未知样的分子量。②样品组分的回收凝胶电泳可以作μg级样品的分离制备。回收样品组分的方法有：扩散洗脱和电泳洗脱。聚焦电泳（等电点聚焦）用于分离具有不同等电点的物质。不同蛋白质有不同的等电点。当蛋白质或多肽放在一个通直流电而产生的一个pH梯度的体系中时，不同的蛋白质在电场作用下会向不同的方向移动，并聚焦在相应于其等电点的pH位置处，即为等电聚焦，或叫聚焦电泳。等电聚焦的特点分辨率高。可以将等电点相差0.01～0.02pH单位的蛋白质分离开。不管蛋白质样品加在什么部位，由聚焦作用使其总是聚焦到等电点处，所以很稀的样品也可以进行分离。这一点是其优于一般电泳和色谱的地方。分离是依据等电点不同而进行的，所以重现性很好。用于蛋白质及多肽的分析及等电点的测定，也可以用于分离和制备。一般电泳中随着时间加长和泳动距离的加大，物质区带因扩散作用而加宽。等电聚焦中不存在这个问题。缺点：样品溶液要求无盐。样品组分分别聚焦在其等电点处，所以对于一些在其等电点处不溶或变性的蛋白质此方法不适用。

等电聚焦的特点3.4蛋白质的分析鉴定3.4.1质谱分析原理：质谱仪是利用电磁学的原理，使带电的样品离子按质荷比进行分离的装置。离子电离后经过加速进入磁场中。其动能与加速电压及电荷Z有关。根据质量分析器的工作原理，可将质谱仪分为动态和静态仪器两大类，分离生物大分子多采用电喷质谱法，属于动态质谱仪。基本原理是生物大分子在很高的电场下电离。样品溶液以很低的流速，在高的电场下使生物分子从毛细管中流出來。3.4.2核磁共振核磁共振波谱是将具有磁矩的核放入磁场后，用适宜的频率的电磁波照射，它们就会吸收能量，发生原子核能级的跃迁，同时产生核磁共振信号，得到核磁共振波谱。在生物学方面主要研究生物大分子的结构和分子量。到目前为止，采用1H2D-NMR（二维NMR）能解决的最大蛋白质分子量在10000Da左右。如果采用杂核多维NMR技术，能解决的最大蛋白质分子量大在25000Da左右。作业多肽及蛋白质类药物的分离方法有哪些?列表对比各方法的优缺点。谢谢谢谢安全阀基本知识如果压力容器(设备/管线等)压力超过设计压力…1.尽可能避免超压现象堵塞(BLOCKED)火灾(FIRE)热泄放(THERMALRELIEF)如何避免事故的发生?2.使用安全泄压设施爆破片安全阀如何避免事故的发生?01安全阀的作用就是过压保护!一切有过压可能的设施都需要安全阀的保护!这里的压力可以在200KG以上,也可以在1KG以下!设定压力(setpressure)安全阀起跳压力背压(backpressure)安全阀出口压力超压(overpressure)表示安全阀开启后至全开期间入口积聚的压力.几个压力概念弹簧式先导式重力板式先导+重力板典型应用电站锅炉典型应用长输管线典型应用罐区安全阀的主要类型02不同类型安全阀的优缺点结构简单,可靠性高适用范围广价格经济对介质不过分挑剔弹簧式安全阀的优点预漏--由于阀座密封力随介质压力的升高而降低,所以会有预漏现象--在未达到安全阀设定点前,就有少量介质泄出.100%SEATINGFORCE75502505075100%SETPRESSURE弹簧式安全阀的缺点过大的入口压力降会造成阀门的频跳,缩短阀门使用寿命.ChatterDiscGuideDiscHolderNozzle弹簧式安全阀的缺点弹簧式安全阀的缺点=10090807060500102030405010%OVERPRESSURE%BUILT-UPBACKPRESSURE%RATEDCAPACITY普通产品平衡背压能力差.在普通产品基础上加装波纹管,使其平衡背压的能力有所增强.能够使阀芯内件与高温/腐蚀性介质相隔离.平衡波纹管弹簧式安全阀的优点优异的阀座密封性能,阀座密封力随介质操作压力的升高而升高,可使系统在较高运行压力下高效能地工作.ResilientSeatP1P1P2先导式安全阀的优点平衡背压能力优秀有突开型/调节型两种动作特性可远传取压先导式安全阀的优点对介质比较挑剃,不适用于较脏/较粘稠的介质,此类介质会堵塞引压管及导阀内腔.成本较高.先导式安全阀的缺点重力板式产品的优点目前低压储罐呼吸阀/紧急泄放阀的主力产品.结构简单.价格经济.重力板式产品的缺点不可现场调节设定值.阀座密封性差,并有较严重的预漏.受背压影响大.需要很高的超压以达到全开.不适用于深冷/粘稠工况.几个常用规范ASMEsectionI-动力锅炉(FiredVessel)ASMEsectionVIII-非受火容器(UnfiredVessel)API2000-低压安全阀设计(LowpressurePRV)API520-火灾工况计算与选型(FireSizing)API526-阀门尺寸(ValveDimension)API527-阀座密封(SeatTightness)介质状态(气/液/气液双相).气态介质的分子量&Cp/Cv值.液态介质的比重/黏度.安全阀泄放量要求.设定压力.背压.泄放温度安全阀不以连接尺寸作为选型报价依据!如何提供高质量的询价?弹簧安全阀的结构弹簧安全阀起跳曲线弹簧安全阀结构弹簧安全阀结构导压管活塞密封活塞导向不平衡移动副(活塞)导管导阀弹性阀座P1P1P2先导式安全阀结构先导式安全阀的工作原理频跳安全阀的频跳是一种阀门高频反复开启关闭的现象。安全阀频跳时，一般来说密封面只打开其全启高度的几分只一或十几分之一，然后迅速回座并再次起跳。频跳时，阀瓣和喷嘴的密封面不断高频撞击会造成密封面的严重损伤。如果频跳现象进一步加剧还有可能造成阀体内部其他部分甚至系统的损伤。安全阀工作不正常的因素频跳后果1、导向平面由于反复高频磨擦造成表面划伤或局部材料疲劳实效。2、密封面由于高频碰撞造成损伤。3、由于高频振颤造成弹簧实效。4、由频跳所带来的阀门及管道振颤可能会破坏焊接材料和系统上其他设备。5、由于安全阀在频跳时无法达到需要的排放量，系统压力有可能继续升压并超过最大允许工作压力。安全阀工作不正常的因素A、系统压力在通过阀门与系统之间的连接管时压力下降超过3%。当阀门处于关闭状态时，阀门入口处的压力是相对稳定的。阀门入口压力与系统压力相同。当系统压力达到安全阀的起跳压力时，阀门迅速打开并开始泄压。但是由于阀门与系统之间的连接管设计不当，造成连接管内局部压力下降过快超过3%，是阀门入口处压力迅速下降到回座压力而导致阀门关闭。因此安全阀开启后没有达到完全排放，系统压力仍然很高，所以阀门会再次起跳并重复上述过程，既发生频跳。导致频跳的原因导致接管压降高于3%的原因1、阀门与系统间的连接管内径小于阀门入口管内径。2、存在严重的涡流现象。3、连接管过长而且没有作相应的补偿（使用内径较大的管道）。4、连接管过于复杂（拐弯过多甚至在该管上开口用作它途。在一般情况下安全阀入口处不允许安装其他阀门。）导致频跳的原因B、阀门的调节环位置设置不当。安全阀拥有喷嘴环和导向环。这两个环的位置直接影响安全阀的起跳和回座过程。如果喷嘴环的位置过低或导向环的位置过高，则阀门起跳后介质的作用力无法在阀瓣座和调节环所构成的空间内产生足够的托举力使阀门保持排放状态，从而导致阀门迅速回座。但是系统压力仍然保持较高水平，因此回座后阀门会很快再次起跳。导致频跳的原因C、安全阀的额定排量远远大于所需排量。

由于所选的安全阀的喉径面积远远大于所需，安全阀排放时过大的排量导致压力容器内局部压力下降过快，而系统本身的超压状态没有得到缓解，使安全阀不得不再次起跳频跳的原因阀门拒跳：当系统压力达到安全阀的起跳压力时，阀门不起跳的现象。安全阀工作不正常的因素1、阀门整定压力过高。2、阀门内落入大量杂质从而使阀办座和导套间卡死或摩擦力过大。3、弹簧之间夹入杂物使弹簧无法被正常压缩。4、阀门安装不当，使阀门垂直度超过极限范围（正负两度）从而使阀杆组件在起跳过程中受阻。5、排气管道没有被可靠支撑或由于管道受热膨胀移位从而对阀体产生扭转力，导致阀体内机构发生偏心而卡死。安全阀拒跳的原因阀门不回座或回座比过大：安全阀正常起跳后长时间无法回座，阀门保持排放状态的现象。安全阀工作不正常的因素1、阀门上下调整环的位置设置不当。2、排气管道设计不当造成排气不畅，由于排气管道过小、拐弯过多或被堵塞，使排放的蒸汽无法迅速排出而在排气管和阀体内积累，这时背压会作用在阀门内部机构上并产生抑制阀门关闭的趋势。3、阀门内落入大量杂质从而使阀瓣座和导套之间卡死后摩擦力过大。安全阀不回座或回座比过大的因素：4、弹簧之间夹入杂物从而使弹簧被正常压缩后无法恢复。5、由于对阀门排放时的排放反力计算不足，从而在排放时阀体受力扭曲损坏内部零件导致卡死。6、阀杆螺母（位于阀杆顶端）的定位销脱落。在阀门排放时由于振动使该螺母下滑使阀杆组件回落受阻。安全阀不回座或回座比过大的因素：7、由于弹簧压紧螺栓的锁紧螺母松脱，在阀门排放时由于振动时弹簧压紧螺栓松动上滑导致阀门的设定起跳值不断减小。

8、阀门安装不当，使阀门垂直度超过极限范围（正负两度）从而使阀杆组件在回落过程中受阻。

9、阀门的密封面中有杂质，造成阀门无法正常关闭。

10、锁紧螺母没有锁紧，由于管道震动下环向上运动，上平面高于密封面，阀门回座时无法密封安全阀不回座或回座比过大的因素：谢谢观看癌基因与抑癌基因oncogene&tumorsuppressorgene24135基因突变概述.癌基因和抗癌基因的概念.癌基因的分类.癌基因产物的作用.癌基因激活的机理主要内容疾病：

——是人体某一层面或各层面形态和功能（包括其物质基础——代谢）的异常，归根结底是某些特定蛋白质结构或功能的变异，而这些蛋白质又是细胞核中相应基因借助细胞受体和细胞中信号转导分子接收信号后作出应答（表达）的产物。TranscriptionTranslationReplicationDNARNAProtein中心法规Whatisgene?基因：

—是遗传信息的载体

—是一段特定的DNA序列（片段）

—是编码RNA或蛋白质的一段DNA片段

—是由编码序列和调控序列组成的一段DNA片段基因主宰生物体的命运：微效基因的变异——生物体对生存环境的敏感度变化关键关键基因的变异——生物体疾病——死亡所以才有：“人类所有疾病均可视为基因病”之说注：如果外伤如烧伤、骨折等也算疾病的话，外伤应该无法归入基因病的行列。Genopathy问：两个不相干的人，如果他们患得同一疾病，致病基因是否相同？再问：同卵双生的孪生兄弟，他们患病的机会是否一样，命运是否相同？┯┯┯┯

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┷┷┷┷增添缺失替换DNA分子(复制)中发生碱基对的______、______

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的改变。替换增添缺失基因结构基因变异的概念：英语句子中的一个字母的改变，可能导致句子的意思发生怎样的变化？可能导致句子的意思不变、变化不大或完全改变THECATSATONTHEMATTHECATSITONTHEMATTHEHATSATONTHEMATTHECATONTHEMAT同理：替换、增添、缺失碱基对，可能会使性状不变、变化不大或完全改变。基因的结构改变,一定会引起性状的改变??原句：1.基因多态性与致病突变基因变异与疾病的关系2.单基因病、多基因病3.疾病易感基因

基因多态性polymorphism是指DNA序列在群体中的变异性（差异性）在人群中的发生概率>1%（SNP&CNP)<1%的变异概率叫做突变基因多态性特定的基因多态性与疾病相关时，可用致病突变加以描述SNP:散在单个碱基的不同，单个碱基的缺失、插入和置换。

CNP:DNA片段拷贝数变异，包括缺失、插入和重复等。同义突变、错义突变、无义突变、移码突变

致病突变生殖细胞基因突变将突变的遗传信息传给下一代(代代相传),即遗传性疾病。体细胞基因突变局部形成突变细胞群（肿瘤）。受精卵分裂基因突变的原因物理因素化学因素生物因素基因突变的原因（诱发因素）紫外线、辐射等碱基类似物5BU/叠氮胸苷等病毒和某些细菌等自发突变DNA复制过程中碱基配对出现误差。UV使相邻的胸腺嘧啶产生胸腺嘧啶二聚体,DNA复制时二聚体对应链空缺，碱基随机添补发生突变。胸腺嘧啶二聚体胸腺嘧啶胸腺嘧啶紫外线诱变物理诱变(physicalinduction)

5溴尿嘧啶(5BU)与T类似，多为酮式构型。间期细胞用酮式5BU处理，5BU能插入DNA取代T与A配对；插入DNA后异构成烯醇式5BU与G配对。两次DNA复制后,使A/T转换成G/C，发生碱基转换,产生基因突变。化学诱变(chemicalinduction)碱基类似物(baseanalogues)诱变AT5-BUA5-BUAAT5-BU5-BU(烯醇式)

(酮式)GGC1.生物变异的根本来源，为生物进化提供了最初的原始材料,能使生物的性状出现差别，以适应不同的外界环境，是生物进化的重要因素之一。2.致病突变是导致人类遗传病的病变基础。基因突变的意义概述：肿瘤细胞恶性增殖特性（一）肿瘤细胞失去了生长调节的反馈抑制正常细胞受损,一旦恢复原状，细胞就会停止增殖，但是肿瘤细胞不受这一反馈机制抑制。（二）肿瘤细胞失去了细胞分裂的接触抑制。正常细胞体外培养，相邻细胞相接触，长在一起，细胞就会停止增殖，而肿瘤细胞生长满培养皿后，细胞可以重叠起生长。（三）肿瘤细胞表现出比正常细胞更低的营养要求。（四）肿瘤细胞生长有一种自分泌作用，自己分泌生长需要的生长因子和调控信号,促进自身的恶性增殖。Whatisoncogene?癌基因——是基因组内正常存在的基因，其编码产物通常作为正调控信号，促进细胞的增殖和生长。癌基因的突变或表达异常是细胞恶性转化（癌变）的重要原因。——凡是能编码生长因子、生长因子受体、细胞内信号转导分子以及与生长有关的转录调节因子等的基因。如何发现癌基因的呢?11910年，洛克菲勒研究院一个年轻的研究员Rous发现，鸡肉瘤细胞裂解物在通过除菌滤器以后，注射到正常鸡体内，可以引起肉瘤，首次提出鸡肉瘤可能是由病毒引起的。0.2m孔径细菌过不去但病毒可以通过从病毒癌基因到细胞原癌基因的研究历程：Roussarcomavirus,RSVthefirstcancer-causingretrovirus1958年，Stewart和Eddy分离出一种病毒，注射到小鼠体内可以引起肝脏、肾脏、乳腺、胸腺、肾上腺等多种组织器官的肿瘤，因而把这种病毒称为多瘤病毒。50年代末、60年代初，癌病毒研究成了一个极具想像力的研究领域，主流科学家开始进入癌病毒研究领域polyomavirus这期间，Temin发现RSV有不同亚型，且引起细胞恶变程度不同，推测RNA病毒将其遗传信息传递给了正常细胞的DNA。这与Crick提出的中心法则是相违背的让事实屈从于理论还是坚持基于实验的结果？VSTemin发现逆转录酶，1975年获诺贝尔奖TeminCrickTemin的实验设计：实验设计简单而巧妙：将合成DNA所需的“原料”，即A、T、C、G四种脱氧核苷酸，与破坏了外壳的RSV一起在体外40℃的条件下温育一段时间结果在试管里获得了一种新合成的大分子，它不能被RNA酶破坏，但却可以被DNA酶所分解，证明这种新合成的大分子是DNA用RNA酶预先破坏RSV的RNA，再重复上述的试验，则不能获得这种大分子，说明这个DNA大分子是以RSV的RNA为模板合成的1969年，一个日本学者里子水谷来到Temin的实验室，这是一个非常擅长实验的年轻科学家。按Temin的设想，他们开始寻找RSV中存在“逆转录酶”的证据DNA

RNA

ProteinTranscriptionTranslationReplicationReplicationRe-Transcription修正中心法规据说，1975年Temin因发现逆转录酶而获诺贝尔奖时，Bishop懊恼不已，因为早在1969年他就认为Temin的RNADNA的“前病毒理论”有可能是正确的，并且也进行了一些实验，但不久由于资深同事的规劝而放弃了这方面的努力。但Bishop马上意识到：逆转录酶的发现为逆转录病毒致癌的研究提供了一条新途径。一个RSV，三个诺贝尔奖！！！1989年，UCSF的Bishop和Varmus根据逆转录病毒的复制机制发现了细胞癌基因，并获诺贝尔奖。Cellularoncogene启示：Perutz说:“科学创造如同艺术创造一样，都不可能通过精心组织而产生”Bishop说:“许多人引以为豪的是一天工作16小时，工作安排要以分秒计……可是工作狂是思考的大敌，而思考则是科学发现的关键”Perutzsharedthe1962NobelPrizeforChemistrywithJohnKendrew,fortheirstudiesofthestructuresofhemoglobinandglobularproteins科学的本质和艺术一样，都需要直觉和想像力请给自己一些思考的时间吧！癌基因的分类目前对癌基因尚无统一分类的方法，一般有下面3种分类方法：一、按结构特点分（6）类（一）src癌基因家族（二）ras癌基因家族（三）sis癌基因家族（四）myc癌基因家族（五）myb癌基因家族（六）其它：如fos，erb－A等。三、按细胞增殖调控蛋白特性分成（4）类（一）生长因子（二）受体类（三）细胞内信号转换器（四）细胞核因子二、按产物功能分（8）类（一）生长因子类（二）酪氨酸蛋白激酶（三）膜相关G蛋白（四）受体，无蛋白激酶活性（五）胞质丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（六）胞质调控因子（七）核反式调控因子（八）其它:db1、bcl－2癌基因产物参与信号转导

胞外信号作用于膜表面受体→胞内信使物质的生成便意味着胞外信号跨膜传递的完成。胞内信使至少有：cAMP（环磷酸腺苷）IP3（三磷酸肌醇）PG（前列腺素）cGMP（环磷酸鸟苷）DG（二酰基甘油）Ca2＋（钙离子）CAM（钙调素）主要机制是通过蛋白激酶活化引起底物蛋白一连串磷酸化的生物信号反应过程,跨膜机制涉及到：（一）质膜上cAMP信使系统（二）质膜上肌醇脂质系统这两个系统都是由受体鸟苷酸调节蛋白（GTP-regulatoryprotein，G蛋白）和效应酶（腺苷酸环化酶磷脂酶等）组成，有相似的信号转导过程：即受体活化后引起GTP与不同G蛋白结合活化和抑制效应酶从而影响胞内信使产生而发生不同的调控效应。（三）受体操纵的离子通道系统（四）受体酪氨酸蛋白激酶的转导

（一）获得性基因病

(acquiredgeneticdisease)例如：病毒感染激活原癌基因癌基因活化的机制

（二）染色体易位和重排使无活性的原癌基因转位至强启动子或增强子附近而被活化。与基因脆性位点相关。（三）基因扩增（四）点突变三、癌基因的产物与功能（一）癌基因产物作用的一般特点1.目前发现c-onc均为结构基因.2.癌基因产物可分布在膜质核也可分泌至胞外.（二）癌基因产物分类1.细胞外生长因子：TGF-b2.跨膜生长因子受体:MAPK3.细胞内信号转导分子:Gprotein/Ras4.核内转录因子

（三）癌基因产物的协同作用实验证明，用ras或myc分别转染细胞，可使细胞长期增殖，但不能转化成癌细胞，在裸鼠体内也不能形成肿瘤。但用ras+myc同时转染细胞，则使细胞转化成癌细胞。说明：致癌至少需要2种或以上的onc协同作用，2种onc在2条通路上发挥作用，由于细胞增殖调控是多因子，多阶段影响的结果。而影响增殖分化的onc达几十种之多，所以大多数人认为：癌发生是多阶段多步骤的。Whatistumorsuppressorgene?肿瘤抑制基因（抗癌基因、抑癌基因）——是调节细胞正常生长和增殖的基因。当这些基因不能表达，或其产物失去活性时，细胞就会异常生长和增殖，最终导致细胞癌变。反之，若导入或激活它则可抑制细胞的恶性表型。——癌基因与抑癌基因相互制约，维持细胞增殖正负调节信号的相对稳定。影响1岁的儿童“二次打击”学说两个等位基因同时突变视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma）RB基因变异(13号染色体)

(1)脱磷酸化Rb蛋白（活性）与转录因子E2F结合，抑制基因的转录活性(2)磷酸化Rb蛋白（失活）与E2F解离，释放E2F(3)E2F启动基因转录(4)细胞进入增生阶段(G1S)因此，Rb蛋白在控制细胞生长方面发挥重要作用一旦Rb基因突变可使细胞进入过度增生状态RB基因的功能等位基因(allele)例如：花颜色基因位于一对同源染色体的同一位置上、控制相对性状的两个的基因叫等位基因(allele)一对相同的等位基因称纯合等位基因

一对不同的等位基因称杂合等位基因

显性基因隐性基因完全显性不完全显性共显性问：女性的两条X染色体基因应如何表达？拓展知识：X染色体基因中，有65%完全处于“休眠”状态，20%仅在部分女性身上“休眠”，15%则完全逃离“休眠”状态一旦其中一条X染色体被损坏，还可以由另一条X染色体来纠正男性却只有一条X染色体，一旦它遭到破坏，男性就会患上血友病、色盲以及肌肉萎缩症等各种遗传病以前人们一直认为，在女性的两条X染色体中，有一条染色体是完全不起作用或是处于“休眠”状态的在Y染色体中，目前仍在“工作”的基因只剩下不到100个X染色体中“工作”的基因>1000个有一个这样的故事：20年前一次意外事故，三个工人遭受钴60（Co60)放射性核素的照射结果：一名工人不久死亡一名工人几年后死于白血病最后一名工人20年后患糖尿病就诊你知道医生在为病人检查时发现了什么吗？锁骨骨折肋骨串珠样X光片发现广泛性骨质缺损骨髓检查——浆细胞比例为30%左右（正常为0.6-1.3%）(多发性骨髓瘤）因此，多基因病涉及遗传因素和环境因素物理因素化学因素生物因素自发因素2.多基因病(polygenicdisease)：性状或疾病的遗传方式取决于两个以上微效基因的累加作用，同时还受环境因素的影响，因此这类性状也称为复杂性状或复杂疾病（complexdisease）也叫：“复杂性状疾病”近视(myopia)高血压(hypertension)糖尿病(diabetes)精神分裂症(schizophrenia)哮喘(asthma)肿瘤或癌

(tumororcancer)多基因病的遗传要点数量性状的遗传基础是两对以上基因。这些基因之间没有显,隐性的区别,而是共显性。每个基因对表型的影响很小,称为微效基因。微效基因具有累加效应,即一个基因对表型作用很小,但若干个基因共同作用,可对表型产生明显影响。不仅遗传因素起作用,环境因素具有明显作用。例如：结肠癌（Coloncancer)相关基因：NGX6，SOX7，ITGB1，HSPA9B，MAPK8，PAG，

RANGAP1，SRC和CDC2等。相关信号通路：ras/MEK/ERK，JNK，Rb/E2F，PI3K/AKT及受体相互作用相关通路，免疫反应相关通路以及细胞黏附相关通路等。①早期原发癌生长②肿瘤血管形成③肿瘤细胞脱落并侵入基质④进入脉管系统⑤癌栓形成⑥继发组织器官定位生长⑦转移癌继续扩散例如：糖尿病(diabetes)依赖胰岛素型糖尿病在位于第6号染色体上可能包含至少一个对I型糖尿病敏感的基因在人类基因组中，大约10个位点现在被发现似乎对I型糖尿病敏感其中：1)11号染色体位点IDDM2上的基因

2)葡萄糖激酶基因高血压(hypertension)目前最受关注的是ATP2B1基因编码一种膜蛋白，具有钙泵特性能将高浓度细胞内钙泵出细胞外。精神神经性疾病精神分裂症基因表达改变/诱导增强家族史家暴基因本质：基因组变异惊吓—？—基因突变——精神病多基因病的遗传：易患性(liability)易感性(susceptibility)发病阈值(threshold)易患性(liability)——在多基因病发生中，遗传因素和环境因素共同作用决定一个个体患某种遗传病的可能性。possibility遗传因素(hereditaryfactors)环境因素(environmentalfactor)易感性(susceptibility)——特指由遗传因素决定的患病风险，仅代表个体所含有的遗传因素，易感性完全由基因决定。——在一定的环境条件下，易感性高低可代表易患性高低。riskwithdisease发病阈值(threshold)——当一个个体易患性高到一定限度就可能发病——这种由易患性所导致的多基因病发病最低限度称为发病阈值minimum例如：三核苷酸拷贝数变异CGG(精氨酸)重复：——重复5-54次，正常——重复6-230次，携带者（敏感体质）——重复230-4000次，发病

如：脆性X染色体综合征智力低下患者细胞在缺乏胸腺嘧啶或叶酸的环境中培养时往往出现X-染色体发生断裂男性发病1/1200-2500，女性发病1/1650-5000FragileXsyndrome阈值效应举例：长脸，耳外凸智力低下语言障碍对外界反应迟钝Copynumbervariation问：为什么是三核苷酸重复而不是4、5个？提示：三核苷酸处于阅读框架内，不容易破坏原有基因的开放阅读框架(ORF)4、5个核苷酸不在ORF内，变化容易对原有基因造成很大的影响，一般不容易积累保留癌蛋白抗原癌基因抑癌基因P53蛋白积聚，细胞周期变化P53等位基因丢失、点突变肿瘤形成肿瘤促进因子细胞表型变化相关基因作用P53基因阻滞细胞周期：G1和G2/M期

促进细胞调亡：bax/bcl2

维持基因组稳定：核酸内切酶活性

抑制肿瘤血管生成：Smad4P53基因可否用于治疗癌症？P53基因功能基因治疗：是指以改变人类遗传物质为基础的生物医学治疗。通过将人的正常基因或有治疗作用的DNA导入人体靶细胞，去纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用。抑癌基因P53载体P53基因治疗第三节分析文体特征和表现手法2大考点书法大家启功自传赏析中学生，副教授。博不精，专不透。名虽扬，实不够。高不成，低不就。瘫偏‘左’，派曾‘右’。面微圆，皮欠厚。妻已亡，并无后。丧犹新，病照旧。六十六，非不寿。八宝山，渐相凑。计平生，谥曰陋。身与名，一起臭。【赏析】寓幽默于“三字经”，名利淡薄，人生洒脱，真乃大师心态。1.实用类文本都有其鲜明的文体特征，传记的文体特征体现为作品的真实性和生动性。传记的表现手法主要有以下几个方面：人物表现的手法、结构技巧、语言艺术和修辞手法。2.在实际考查中，对传记中段落作用、细节描写、人物陪衬以及环境描写设题较多，对于材料的选择与组织也常有涉及。3.考生复习时要善于借鉴小说和散文的知识和经验，同时抓住传记的主旨、构思以及语言特征来解答问题。传记的文体特点是真实性和文学性。其中，真实性是传记的第一特征，写作时不允许任意虚构。但传记不同于一般的枯燥的历史记录，它具有文学性，它通过作者的选择、剪辑、组接，倾注了爱憎的情感；它需要用艺术的手法加以表现，以达到传神的目的。考点一分析文体特征从哪些方面分析传记的文体特征？一、选材方面1.人物的时代性和代表性。传记里的人物都是某时代某领域较

突出的人物。2.选材的真实性和典型性。传记的材料比较翔实，作者从传主

的繁杂经历中选取典型的事例，来表现传主的人格特点，有

较强的说服力。3.传记的材料可以是重大事件，也可以是日常生活小事。[知能构建]二、组材方面1.从时序角度思考。通过抓时间词语，可以迅速理清文章脉络，

把握人物的生活经历及思想演变过程。2.从详略方面思考。组材是与主题密切相关的。对中心有用的，

与主题特别密切的材料，是主要内容，则需浓墨重彩地渲染，

要详细写；与主题关系不很密切的材料，是次要内容，则轻

描淡写，甚至一笔带过。三、句段作用和标题效果类别作用或效果开头段内容：开篇点题，渲染气氛，奠定基调，表明情感。结构：总领下文，统摄全篇；与下文某处文字呼应，为下文做铺垫或埋下伏笔；与结尾呼应。中间段内容：如果比较短，它的作用一般是总结上文，照应下文；如果比较长，它的作用一般是扩展思路，丰富内涵，具体展示，深化主题。结构：过渡，承上启下，为下文埋下伏笔、铺垫蓄势。结尾段内容：点明中心，深化主题，画龙点睛，升华感情、卒章显志，启发思考。结构：照应开头；呼应前文；使结构首尾圆合。标题①突出了叙述评议的对象。②设置悬念，激发读者的阅读兴趣。③表现了传主的精神或品质。④点明了主旨，表达了作者的情感。⑤运用修辞，使文章内涵丰富，意蕴深刻，增加了文章的厚度与深度。四、语言特色角度分析鉴赏传记的类别自传采用第一人称，语言或幽默调侃或自然亲切；他传采用第三人称，语言或朴实自然或文采斐然。语意和句式句子中的关键词所包含的情感、态度等，整句与散句、推测与肯定、议论与抒情、祈使与反问等特殊句式，往往有着不同一般的表现力。这些都是分析语言的切入点。修辞的角度修辞一般是用来加强语言的表现力的。抓住修辞特点，就能从语言的表达效果上加以体味。语言风格含蓄与明快、文雅与通俗、生动与朴实、富丽与素淡、简洁与繁复等。1.(2015·新课标全国卷Ⅰ)阅读下面的文字，完成后面的题目。[即学即练]朱东润自传1896年我出生在江苏泰兴一个失业店员的家庭，早年生活艰苦，所受的教育也存在着一定的波折。21岁我到梧州担任广西第二中学的外语教师，23岁调任南通师范学校教师。1929年4月间，我到武汉大学担任外语讲师，从此我就成为大学教师。那时武汉大学的文学院长是闻一多教授，他看到中文系的教师实在太复杂，总想来一些变动。用近年的说法，这叫作掺沙子。我的命运是作为沙子而到中文系开课的。大约是1939年吧，一所内迁的大学的中文系在学年开始，出现了传记研究这一个课，其下注明本年开韩柳文。传记文学也好，韩柳文学也不妨，但是怎么会在传记研究这个总题下面开韩柳文呢？在当时的大学里，出现的怪事不少，可是这一项多少和我的兴趣有关，这就决定了我对于传记文学献身的意图。《四库全书总目》有传记类，指出《晏子春秋》为传之祖，《孔子三朝记》为记之祖，这是三百年前的看法，现在用不上了。有人说《史记》《汉书》为传记之祖，这个也用不上。《史》《汉》有互见法，对于一个人的评价，常常需要通读全书多卷，才能得其大略。可是在传记文学里，一个传主只有一本书，必须在这本书里把对他的评价全部交代。是不是古人所作的传、行状、神道碑这一类的作品对于近代传记文学的写作有什么帮助呢？也不尽然。古代文人的这类作品，主要是对于死者的歌颂，对于近代传记文学是没有什么用处的。这些作品，毕竟不是传记文学。除了史家和文人的作品以外，是不是还有值得提出的呢？有的，这便是所谓别传。别传的名称，可能不是作者的自称而是后人认为有别于正史，因此称为“别传”。有些简单一些，也可称为传叙。这类作品写得都很生动，没有那些阿谀奉承之辞，而且是信笔直书，对于传主的错误和缺陷，都是全部奉陈。是不是可以从国外吸收传记文学的写作方法呢？当然可以，而且有此必要。但是不能没有一个抉择。罗马时代的勃路塔克是最好的了，但是他的时代和我们相去太远，而且他的那部大作，所着重的是相互比较而很少对于传主的刻画，因此我们只能看到一个大略而看不到入情入理的细致的分析。英国的《约翰逊博士传》是传记文学中的不朽名作，英国人把它推重到极高的地位。这部书的细致是到了一个登峰造极的地位，但是的确也难免有些琐碎。而且由于约翰逊并不处于当时的政治中心，其人也并不能代表英国的一般人物，所以这部作品不是我们必须模仿的范本。是不是我国已经翻译过来的《维多利亚女王传》可以作为范本呢？应当说是可以，由于作者着墨无多，处处显得“颊上三毫”的风神。可是中国文人相传的做法，正是走的一样的道路，所以无论近代人怎么推崇这部作品，总还不免令人有“穿新鞋走老路”的戒心。国内外的作品读过一些，也读过法国评论家莫洛亚的传记文学理论，是不是对于传记文学就算有些认识呢？不算，在自己没有动手创作之前，就不能算是认识。这时是1940年左右，中国正在艰苦抗战，我只身独处，住在四川乐山的郊区，每周得进城到学校上课，生活也很艰苦。家乡已经陷落了，妻室儿女，一家八口，正在死亡线上挣扎。我决心把研读的各种传记作为范本，自己也写出一本来。我写谁呢？我考虑了好久，最后决定写明代的张居正。第一，因为他能把一个充满内忧外患的国家拯救出来，为垂亡的明王朝延长了七十年的寿命。第二，因为他不顾个人的安危和世人的唾骂，终于完成历史赋予他的使命。他不是没有缺点的，但是无论他有多大的缺点，他是唯一能够拯救那个时代的人物。(有删改)【相关链接】①自传和传人，本是性质类似的著述，除了因为作者立场的不同，因而有必要的区别以外，原来没有很大的差异。但是在西洋文学里，常会发生分类的麻烦。我们则传叙二字连用指明同类的文学。同时因为古代的用法，传人曰传，自叙曰叙，这种分别的观念，是一种原有的观念，所以传叙文学，包括叙、传在内，丝毫不感觉牵强。(朱东润《关于传叙文学的几个名词》)②朱先生确是有儒家风度的学者，一身正气，因此他所选择的传主对象，差不多都是关心国计民生的有为之士。他强调关切现实，拯救危亡，尊崇气节与品格。这都是可以理解的。(傅璇琮《理性的思索和情感的倾注——读朱东润先生史传文学随想》)★作为带有学术性质的自传，本文有什么特点？请简要回答。答：________________________________________________解析本题考查分析文本的文体基本特征和语言特色。解答时，要在阅读的基础上，了解文章的文体特征、内容的侧重点、内容表达的特征。本文作为一篇带有学术性质的自传，突出特点之一就是偏重学术经历，介绍了自己的传记文学观及其形成过程。文章的开头与结尾，将自己的生平与学术结合起来，尤其是为张居正写传原因的解说，结合当时的社会背景和自己家庭的情况，更是呈现出学术背后的家国情怀。在行文方面，语言平易自然，穿插“怎么会在传记研究这个总题下面开韩柳文呢？”“我写谁呢？”等口语，语言平白如话，就像面对面闲谈一样。答案①偏重学术经历，主要写自己的