微生物接种技术 课件

4.2微生物接种技术接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。接种的关键是使用接种工具按正确的方法进行无菌操作，尤其是无菌操作一、微生物接种技术常用接种方法斜面接种划线接种液体接种穿刺接种1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀二、无菌操作材料接种工具材料器械和用品：酒精灯、记号笔、标签、火柴、灭菌培养皿、无菌水、试管架菌种培养基三、接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境操作需在无菌室或超净工作台内进行无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。实验使用的物品使用前后需严格灭菌四、常用的接种方法斜面接种液体接种穿刺接种平板接种1.斜面接种从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。用于好气性微生物的接种，可进行好氧微生物的形态观察或菌种保藏单击此处添加大标题内容消毒：手和台面用75%酒精棉消毒标记：接种前在距离试管口2-3cm位置注明菌名、接种日期、接种人姓名整理台面：左手用的物品放左手边，右手用的物品放右手边，酒精灯位于中央；无菌物品左手边，用过的放右手边。点燃酒精灯。接种：（1）手持试管将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。（2）旋松管塞（3）接种环灼烧灭菌：三步。拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。取菌:接种环冷却，轻沾取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。接种:在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。斜面接种示意图由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。2.液体接种操作方法：与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种3.穿刺接种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种只适宜于细菌和酵母的接种培养穿刺接种方法：消毒标记整理台面点燃酒精灯接种

手持试管，

旋松棉塞

，接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌，拔出棉塞取菌：用冷却接种针的针尖沾取少量菌种穿刺：水平法和垂直法。将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出8.塞上棉塞,接种针灼烧灭菌4.平板接种目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。1.划线接种目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环※适用于含菌量较多的标本连续划线法适用于含菌量较少的标本稀释法：微生物分离、纯化稀释倒平板法:菌悬液稀释—不同梯度的稀释液少许与培养基混合—摇匀—倒培养皿中稀释混合平板法（倾注法）：稀释—培养皿中加入不同梯度的菌悬液1mL—加45℃左右的培养基—摇匀稀释涂布平板法：倒平板----稀释----接种0.1mL—涂布5、各种接种方法的用途斜面接种法用于鉴定和保存菌种。液体培养基接种法可观察细菌在培养基中的生长现象或用作生化反应实验半固体培养基接种法穿刺接种法，用于保存菌种或观察细菌动力平板划线接种法目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。方法：分