高效液相色谱法测定饲料中喹烯酮的含量

高效液相色谱法测定饲料中喹烯酮的含量

棕榈醇的化学名：3-甲基-2-肉桂-4-二氧化物（3-meth-2-cinimase-1，4-nicli-1），属于四-硝基-1和四-二氧化物类化合物。它是由中国农业科学院兰州兽医研究所开发的一种中国饲料添加剂药物。它对动物和家禽有显著的促生长和抗菌作用。对动物和猪饲料中的添加量分别为50和75毫克。目前还未见有关检测饲料中喹烯酮的报道。该研究采用高效液相色谱法测定饲料中喹烯酮的含量，操作简便快速，适用于全价配合饲料中喹烯酮的检测。1材料和方法1.1检测仪器和测定设备(1)Waters2690高效液相色谱仪（美国waters公司生产），配有2487紫外检测器和Millenium32色谱工作站；超声波清洗器。(2）喹烯酮（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所生产）；喹烯酮对照品（自制：氯仿二次精制后再用乙醇精制所得）；乙腈为色谱纯；水为一次蒸馏水经密理博公司去离子装置过滤。1.2流动相、柱温度色谱柱：Diamonsil钻石C18分析柱（250mm×4.6mm）；流动相：乙腈-水（45∶55），流速为1.0ml/min；检测波长：380nm；柱温：30℃；进样量：30μl。1.3超声提取法称取饲料2～5g（视喹烯酮含量高低而定），加入乙腈25ml，超声提取2min，过滤弃去初滤液，取续滤液经0.45μm微孔滤膜过滤。1.4白砂糖的稀释准确称取喹烯酮对照品25mg于50ml棕色容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，吸取2～50ml棕色容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，混匀。用自动进样器分别进样2、5、7、10、15、20、30μl，按“1.2”方法进行测定。1.5精密度测试测定同一饲料样品提取液，重复进样7次，计算喹烯酮的峰面积的变异系数。1.6稳定性试验同一饲料样品提取液于第1天、第2天和第3天分别进样3次，计算喹烯酮的峰面积的变异系数。1.7返回率测试分别配制40、80、200mg/kg3种浓度的喹烯酮饲料样品，每种浓度3份。按“1.2”和“1.3”测定，计算回收率。1.8干预试验1.8.1干预空白饲料的试验1.8.2药物干预试验分别称取适量喹恶啉-1,4-二氧化物类促生长药物：卡巴氧、喹乙醇、痢菌净加入含喹烯酮的饲料中，按“1.2”和“1.3”测定。2结果与分析2.1标准曲线与检测限制的测量结果喹烯酮的质量X与峰面积Y的回归方程为：Y=2.38×106X+1.52×104（γ2=0.9999），检测限为1ng。2.2综合密度试验结果表1由表1可知，喹唏酮的峰面积的变异系数RSD为0.20%，表明精密度较好。2.3稳定性试验结果表2由表2可知，3d内喹烯酮的峰面积的变异系数RSD为0.72%，表明该饲料样品提取液在3d内稳定。2.4平均回收率由表3可知，该法测定3种浓度喹烯酮的平均回收率分别为：89.42%、96.20%、98.83%；RSD分别为1.28%、1.53%、0.78%。2.5干预试验的结果2.5.1白色饲料干扰试验的结果图22.5.2药物干预试验的结果图33不同空白饲料提取物对喹烯酮的干扰喹烯酮对光敏感，因此整个试验在光线弱处操作。样品前处理对饲料样品分析至关重要。在试验过程中分别选用了乙腈、甲醇、醋酸乙酯和氯仿作提取溶剂，结果发现甲醇和醋酸乙酯的空白饲料提取物对喹烯酮有干扰，而氯仿的空白饲料提取物虽对喹烯酮无干扰，但氯仿中的喹烯酮色谱峰的峰型展宽且分裂成双峰。而用乙腈作溶剂提取，喹烯酮色谱峰为尖锐对称峰且饲料提取物对其无干扰。因此确定乙腈为提取溶剂。取2个仔猪和3个仔鸡的