高中生物实验的染色与颜色观察名师优质课获奖市赛课一等奖课件

高中生物试验染色与颜色观察周口一高

zkwanghai@163.com第1页

染色剂染色与显微镜观察

显微镜观察是透射光而不是反射光，所以对于大部分无色半透明生物组织细胞结构来说，需用特殊方法制片染色处理后才能用显微镜观察清楚。而且生物材料极少是单层细胞结构，故还需要进行切片或压片、涂片等处理操作。假如观察经过染色剂染色生物材料，如观察洋葱根尖分生区有丝分裂试验时要用较强光照。而不经染色生物材料在显微镜下观察时，光线尽可能较暗些。如观察质壁分离与复原试验时，假如光线太强，不轻易观察到液泡。第2页碱性染料与染色体观察

生物试验中所用染料，按其起源可分为天然染料和人工染料两大类。人工染料依据其主要化学成份性质，又分成碱性染料、酸性染料和中性染料三大类，其碱性、酸性和中性是由染料中有色部分性质所决定。若染料有色部分为阴离子，即为“酸性”染料；若染料有色部分为阳离子，则称为“碱性”染料；若染料阴、阳离子都有颜色，则称为“中性”染料。染色体(质)是细胞核内轻易被碱性染料染成深色物质。第3页在观察植物细胞有丝分裂试验中，惯用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。二者染色时间都不可过长。１％～２％龙胆紫溶液俗称紫药水，是人们所熟悉外用药。龙胆紫溶液配制是将龙胆紫溶解在质量分数为2％醋酸溶液中配制而成。染色中使用龙胆紫溶液略呈酸性，

l％醋酸洋红本身也是酸性，一样含有碱性助色基团。配方中醋酸是染料溶剂，在染色时增加了细胞通透性，利于染液离子进入细胞而使细胞核内染色体着色。另外，改良苯酚品红溶液也可使染色体着色。应用：用高倍镜观察细胞有丝分裂等。

第4页DNA和RNA染色判定甲基绿和吡罗红是混合染色剂。甲基绿是含有金属光泽绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。稍溶于乙醇，不溶于戊醇。吡咯在盐酸作用下聚合成为吡罗红，可与RNA结合展现红色。这两种染色剂对DNA和RNA亲和力不一样，甲基绿使DNA展现绿色，吡罗红使RNA展现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，能够观察到DNA和RNA在细胞中分布情况。注意：①盐酸能改变细胞膜通透性，加速染色剂进人细胞，同时使染色体中DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。②2种染色剂要混合使用，而且要现配现用。第5页活体染色剂健那绿和亚甲基蓝健那绿染液是专一性线粒体活细胞染料，线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围细胞质中染料被还原成为无色状态。所以能够使活细胞中线粒体展现蓝绿色，而细胞质靠近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，经过染色，能够在高倍显微镜下观察到生活状态线粒体形态和分布。

第6页亚甲基蓝是细胞活体染色剂，0.01％亚甲基蓝对细胞无毒害，亚甲基蓝是一个有机物小分子，在水中离解成亚甲基蓝阳离子(呈蓝色)和氯离子(无色)，亚甲基蓝阳离子可经过主动运输进入到细菌体内，在酶作用下被细菌分解成无色小分子，使蓝色褪去。褪色程度越大，说明细菌越多，水污染越严重，所以可用于水污染程度指示剂。另外，亚甲基蓝是氧化还原指示剂，在有氧环境中蓝色褪去，可用作氧气检测剂。第7页台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常活细胞，细胞膜结构完整含有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内;死细胞或细胞膜不完整细胞，胞膜通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。应用：区分活细胞和死细胞;检测细胞膜完整性。另有用红墨水判定种子发芽率试验同理。第8页第9页苏丹红与脂肪判定

苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ是人工合成苏丹红系列染料。常作为一个工业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油增色以及鞋、地板等增光。近年有不法分子用于食品添加剂，对人体有害。苏丹红为亲脂性化合物。在脂肪类物质中溶解度大于在其它溶剂(如酒精、丙酮)中溶解度时，染料颗粒便大量进入脂肪类物质结构内，在脂滴中溶解积累，并吸附在脂肪颗粒结构上，苏丹Ⅲ遇脂肪显橘黄色，苏丹Ⅳ遇脂肪显红色。苏丹Ⅳ染液与脂肪亲和力比较强，所以染色时间应比苏丹Ⅲ短。三（山）橘子丹四（是）红第10页斐林试剂检测可溶性还原糖

原理：还原糖+斐林试剂（加热后）→砖红色沉淀注意：斐林试剂甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。应用：检验和检测某糖是否为还原糖;不一样生物组织中含糖量高低测定;在医学上进行疾病诊疗，如糖尿病、肾炎。

第11页菲林试剂与双缩尿试剂比较第12页第13页第14页第15页第16页DNA染色与判定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色应用：能够显示DNA在细胞中分布。判定原理：DNA+二苯胺→蓝色应用：用于DNA粗提取试验判定试剂。

第17页一些化学物质检验方法第18页第19页第20页第21页吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应

原理：吲哚酚即2，6-二氯酚靛酚钠，其水溶液为蓝紫色，维生素C含有还原性，能将其褪色。应用：可用于检测食品营养成份中是否含有维生素C。

第22页亚硝酸盐检测出现玫瑰红

原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。应用：将显色反应后样品与已知浓度标准液进行目测比较，能够大致估算出泡菜中亚硝酸盐含量。

第23页脲酶检测

原理：细菌合成脲酶能够将尿素分解成氨，氨会使培养基碱性增强，使PH升高，从而使酚红指示剂变红。应用：在以尿素为唯一氮源培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红是否能够判定这种细菌能否分解尿素。

第24页刚果红检测纤维素分解菌

原理：刚果红是一个染料，它能够与像纤维素这么多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当在含有纤维素培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红-纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心透明圈。

第25页伊红美蓝检测大肠杆菌

原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌代谢产物(有机酸)与伊红美蓝结合使菌落展现黑色。应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌含量。

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例题分析

例1只有在保持细胞活性条件下，才能显示细胞中某物质或结构试验是（）A.苏丹Ⅲ染色剂观察花生种子子叶细胞中脂肪B.龙胆紫染色观察洋葱根尖分生区细胞有丝分裂C.健那绿（詹纳斯绿B）染色观察动物细胞线粒体D.甲基绿、派洛宁（吡罗红）染色观察动物细胞中DNA和RNAC第27页解析：本题考查相关染色剂使用。苏丹Ⅲ染色剂用于观察花生子叶细胞中脂肪颗粒。观察洋葱根尖分生区细胞试验在解离时细胞已死亡，甲基绿、吡罗红用于观察DNA和RNA健那绿染液是专一性线粒体活细胞染料，其染色原理是：线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围细胞质中染料被还原成为无色状态。所以能够使活细胞中线粒体展现蓝绿色，而细胞质靠近无色。所以只有在保持细胞活性条件下，才能显示细胞中线粒体结构。答案为C。第28页例2下表是依据试验目标，所选取试剂与预期试验结果正确是试验目标试剂预期试验结果A观察DNA和RNA在细胞中分布斐林试剂吡罗红斐林试剂将DNA染成绿色，吡罗红将RNA染成红色B检测植物组织中脂肪双缩脲试剂脂肪颗粒被染成紫红色C检测植物组织中葡萄糖甲基绿葡萄糖与甲基绿作用，生成绿色沉淀D观察根尖分生组织细胞有丝分裂醋酸洋红染色体被染成紫红色D第29页解析：本题主要考查生物教材中不一样试验染色或一些颜色改变。植物脂肪判定用苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）试剂呈橘黄色（或红色）；观察DNA和RNA在细胞中分布应该选取甲基绿和吡罗红染色剂，甲基绿将DNA染成绿色，吡罗红将RNA染成红色；葡萄糖用斐林试剂判定展现砖红色沉淀。答案为D第30页例3使用染色剂染色是生物学试验惯用方法，某同学对相关试验做了以下归纳：试验观察对象染色剂试验结果①花生子叶细胞脂肪颗粒苏丹Ⅲ脂肪颗粒被染成橘黄色②人口腔上皮细胞中DNA和RNA分布吡罗红甲基绿细胞内染成绿色面积显著大于染成红色面积③人口腔上皮细胞中线粒体健那绿线粒体展现蓝绿色④洋葱根尖分生组织细胞有丝分裂龙胆紫间期细胞不着色，分裂期细胞染色体着色第31页（1）上述试验结果归纳，正确有_______（试验序号）。（2）试验②和试验④在染色之前，都使用了一定浓度盐酸处理。其中，试验②用盐酸可改变______通透性，加速染色剂进入细胞；试验④用盐酸与酒精混合，对材料进行解离。在两个试验操作中，都要注意盐酸浓度，处理材料时温度和______。（3）健那绿使线粒体着色与线粒体内膜酶系统相关。线粒体内膜上酶主要催化有氧呼吸第______阶反应，该反应改变是____________。①③

细胞膜

时间三

[H]与氧结合形成水，同时释放大量能量第32页解析：使用甲基绿和吡罗红进行染色体色时，甲基绿使DNA展现绿色，吡罗红使RNA展现红色。DNA主要存在于细胞核，而RNA存在于细胞质中，所以应该是展现红色面积较大。使用龙胆紫对洋葱根尖分生区细胞进行染色时，染色体被染色，在间期细胞核被染成深色，在分裂期可看到染色体。②④不正确。