gc-ms法测定龙脑樟植物不同部位右旋龙脑的含量

gc-ms法测定龙脑樟植物不同部位右旋龙脑的含量

龙脑樟（l.）是樟科拉齐亚樟属的一种化学类型。近年来，湖南省西部发现了一些樟属植物，主要包括天然的右旋龙脑（d-bonrol）。右旋龙脑又称为天然冰片,属于“芳香开窍类”中药,中医学认为龙脑为“芳香走窜”之品,内服有开窍醒神之效,适用于神昏、惊厥诸证;外用有清热止痛、防腐止痒之功,可治疗疮疡、肿痛、口疮等疾患。由于天然右旋龙脑的药用价值是合成龙脑无法比拟的,因而其需求量与日俱增,供需矛盾相当突出。可以预料,龙脑樟树的开发利用产业将具有一个乐观的市场前景。龙脑樟树被发现的时间不长,目前栽培的地方不多,由于它含有珍贵的天然右旋龙脑,因而越来越受到人们的青睐。利用龙脑樟进行工业化生产提取右旋龙脑成为迫切的需要。目前工业化生产主要是采用叶,其他部位的研究应用很少,为了进一步开发利用,探讨不同部位(鲜花、鲜枝、鲜皮、鲜叶、鲜叶阴干、干枝、干叶、落叶)挥发油“龙脑油”的含量。因此,本实验对龙脑樟用水蒸气蒸馏方法提取,采用气质联用法测试分析,对右旋龙脑含量进行比较,为龙脑樟的综合利用以及工业化生产提取天然冰片提供实验依据。1龙脑樟对照品GC-MS-QP2010型气质联用仪(日本岛津公司);Aoc-20i自动进样器,EdwardE2M2.5真空泵,GCMSsolution工作站(日本岛津)。天然冰片(d-龙脑)对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号111688-200501);龙脑樟样品采自湖南省浏阳市古港镇,在同一块地同一株龙脑樟植物采集鲜花、鲜枝、鲜枝皮、鲜叶、鲜叶阴干(室内通风处自然干燥)、干枝、干叶(低温干燥,干燥后100g干叶相当于鲜叶200g)、落叶,以上药材由湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室刘塔斯教授鉴定;乙醚,丙酮,萘等试剂均为分析纯。2方法和结果2.1浸泡和蒸馏法经过反复实验,采用以下方法进行提取:将以上样品剪碎,分别称取200.0g,加水浸泡30min,水蒸气蒸馏1h。馏出液用乙醚萃取3次,合并萃取液,用无水硫酸钠干燥,过滤,回收乙醚,得到有特殊气味的白色晶体粗龙脑,密封待测。2.2溶液制备2.2.1对照溶液的制备精密称取天然冰片(d-龙脑)对照品0.0200g,置5mL量瓶内用丙酮定容,配成4.00g·L-1的d-龙脑对照品溶液。2.2.2标准溶液的制备精密称取萘1.1122g,置100mL量瓶中用丙酮定容,得内标溶液。2.2.3供试品溶液的制备分别称取2.1项下适量粗龙脑(约0.2g)置10mL量瓶中用丙酮定容,从中精密量取0.5mL置5mL量瓶中,加上述内标液0.5mL,丙酮定容,得供试品溶液。2.3在铬条件下进行系统适用性试验2.3.1气候表及流速Rtx-5ms色谱柱(0.25mm×30m,0.25μm)。载气为高纯度氦气;程序升温,从80℃开始,以10℃·min-1升至120℃,并恒温4min,再以20℃·min-1升至140℃;进样口温度250℃;流速1.00mL·min-1;分流比30∶1。2.3.2条件2.4%乙醇提取溶剂EI离子源;电子能量70eV;离子源温度200℃;接口温度250℃;溶剂切除时间2.5min;质量扫描范围40~400;采集方式扫描;NIST05.LIB谱库。进样量1μL。2.3.3适用性试验分别吸取1μL对照溶液、内标液与供试品溶液进样,测得对照品、内标物与供试样品各组分分离度良好;色谱图见图1。2.4组分保留时间和峰面积的测定分别吸取上述对照品溶液(4.00g·L-1)0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7mL,分别加内标液(取5mL稀释为10mL)0.2mL,用丙酮定容至1.00mL,摇匀。分别进样1μL,测定各组分的保留时间和峰面积。以d-龙脑的质量为Y,d-龙脑峰面积与内标物萘峰面积的比值为X,进行线性回归分析,得回归方程为Y=1.1914X+0.0876(r=0.9999),d-龙脑在0.4~2.8μg线性关系良好。2.5进样精密度试验精密吸取2.3下的1.6g·L-1浓度的对照品溶液,连续重复进样5次,进样量1μL,测得d-龙脑峰面积比值的RSD0.58%,结果表明精密度良好。2.6重复性试验结果取同一批样品(干枝)5份,精密称定,按2.1和2.2.3项下方法操作制得供试品溶液,在相同条件下进行5次重复性试验,测得d-龙脑峰面积比值的RSD1.0%。2.7稳定性测定取同一批样品(鲜叶)精密称定,按2.1和2.2.3项下方法操作制得供试品溶液,分别于0,2,4,8,12h测定,测得d-龙脑峰面积比值的RSD1.9%,表明样品在放置12h内稳定。2.8回收率及精密度称取已知含量的同一批龙脑樟鲜叶样品5份,精密称定,再精密加入一定量的d-龙脑对照品溶液,照2.1项提取,按2.2.3项下条件制备供试液测定含量,结果平均回收率为95.40%,RSD0.56%。见表1。2.9叶、叶片阴干、干枝、干枝、落分别称取龙脑樟不同部位样品(鲜花、鲜枝、鲜皮、鲜叶、鲜叶阴干、干枝、干叶、落叶)按2.1和2.2.3项下的方法提取和制备成相应的供试品溶液,按照2.3项下的条件进行含量测定,结果见表2,图1。3d-龙脑含量%与叶轮阴干后提取的比较测定结果表明,龙脑樟不同部位d-龙脑的含量不同,结果为鲜叶阴干>鲜叶>鲜花>鲜枝>鲜枝皮,且干叶>落叶>干枝,鲜枝皮含量最低,其次是鲜枝;叶含量相对较高,干叶比落叶含量高,鲜叶阴干后提取的d-龙脑较鲜叶要高。通过实验,鲜干叶重量比为2∶1,干叶与落叶的样品重量相当于鲜品重量的2倍,通过换算,样品中d-龙脑含量(%)鲜叶和鲜叶阴干较干叶和落叶要高。等量的鲜叶200g与鲜叶200g阴干后(约100g)提取比较,后者d-龙脑含量较高,据报道可能与