我的过硅胶柱的经验

一、装柱装柱子（添硅胶)时，常用的有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有好坏。无论干法仍是湿法，硅胶（称为固定相更加广义）的上表面必定要平坦，而且硅胶(固定相）的高度一般为15cm左右（长度没有绝对之说,依据自己状况而定，制备的大柱能够长达一米）,很短了可能分别成效不好,太长了也会因为扩散或拖尾致使分别成效不好。湿法装柱是先把硅胶用适合的溶剂拌匀后，再填入柱子中，而后再加压（土方法能够用养鱼的氧气泵加压或是用氮气，自然不加压也能够)用淋洗剂”走柱子”，本法最大的长处是一般柱子装的比较结实，没有气泡。(我一般都用湿法装柱)干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，而后再轻轻敲打柱子双侧（湿法也要敲的，成效好点），至硅胶界面不再降落为止，而后再填入硅胶至适合高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接着是用淋洗剂”走柱子"，一般淋洗剂是采纳TLC剖析获得的睁开剂的比率再稀释一倍后的溶剂.往常上边加压，下边再用油泵抽,这样能够加迅速度。干法装柱较方便，但最大的缺点在于"走柱子”时，因为溶剂和硅胶之间的吸附放热(能够用手摸柱子显然感觉到）（梯度洗脱时，湿法装柱也会出现该状况，比较不好办理，能够迟缓改变溶剂，且置于通风处），简单产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚（用乙醚最最显然），二氯甲烷更加明显。固然产生的气泡在加压的状况下不易觉察,可是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会开释出来，严重时,整个柱子变花,样品不可以能平坦地经过，自然也就谈不上分别了。解决的方法是:第一、硅胶必定要压结实；第二、必定要用许多的溶剂”走柱子",必定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂（我一般垫张滤纸，撒上石英砂，再放些棉花)，防备增添溶剂的时候，使得样品层不再齐整。但我的感觉是假如当心上样，增添溶剂，则没有这个必需。二、上样上样也有干法和湿法之分:干法（也称硅胶制沙)就是把待分其余样品用少许溶剂溶解后，在加入少许硅胶,拌匀后再旋去溶剂。这样获得的粉末再当心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但能够保证样品层很平坦。（我一般喜爱用这类方法，除非不可以用)湿法上样就是用少许溶剂（最好就是睁开剂，假如睁开剂的溶解度不好，则能够用一极性较大的溶剂,但一定少许）将样品溶解后,再用胶头滴管转移获得的溶液,沿着层析柱内壁平均加入。而后用少许溶剂清洗后,再加入。湿法较方便,但不溶剂让其完整被硅胶平均吸附，不简单跑的很平坦柱层析重点在于柱子能否装好（这是最大影响要素）和淋洗剂能否选择适合。而淋洗剂的选择则是经过TLC确立.这里要指出的一点是:TLC（作用仍是很大的）的作用除了追踪反响进度，检测试剂和原料纯度外,一个重要的用途就是为柱层析选择适合的淋洗剂。上样完成后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采纳TLC剖析获得的睁开剂的比率再稀释一倍后的溶剂。因为层析柱和薄板的不一样，即便二者使用的硅胶都同样,可是在把TLC剖析获得的睁开剂用在柱层析时,也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不可以稀释太多，不然成了靠扩散作用来分别，成效也不会好。（这一点很适用,可是有些特别状况也不必定，假如要保险能够先做根小柱子跑一下,这样最安全,就是花点时间）三、采集主要依赖TLC（听说外国有石英柱，直接用荧光灯照能看出来，可是太贵了，在国内不必定合用），需要牢记的是：第一、某种样品在这类睁开剂中只显示一个点，其实不等于在其余睁开剂中也只显示一个点。所以在找寻睁开剂时，多试试几种比率不一样，成分不一样的睁开剂。睁开剂的极性太小，点分不开，极性太大，也分不开。一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最正确.第二、点不可以点得太浓（在最后时应当点的浓点,这样看看有无收尽产品），不然简单重叠,不易判断,因为假如两个点邻近的话,一浓就变为一个点了.第三、板上点的睁开的清楚程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性相关，只有二者比较合方才能有一个交好的分别成效.选择适合的睁开剂是首要任务。一般常用溶剂依据极性从小到大的次序摆列大体为：石油迷<己烷<苯<乙醚睁开剂的比率要靠试试。一般依据文件（这是首选)中报导的该类化合物用什么样的睁开剂,就第一试试使用该类睁开剂，而后不停试试比率，直到找到一个分别成效好的睁开剂.好多时候，睁开剂的选摘要靠自己不停变换睁开剂的构成来达到最正确效果。不可以能够试试两两混淆，三者混淆，一般把两种溶剂混淆时,采纳高极性/低极性的体积比为1/3的混淆溶剂，假如有分开的迹象,再调整比率，达到最正确成效，假如没有分开的迹象，最好是换溶剂。在利用TLC追踪反响时，在点板的时候常常是反响系统的混和溶液点一个点A,每种难挥发的原料各点一个点B，C，D等等，而后全部的原料和反响系统的混淆溶剂再共同点一个混淆点X，这些点在板上的地点如下图：AXBCD这样的利处是睁开后能够清楚地看见每个点的地点，把A这个点睁开后的各个层份的点与B，C,等原料比较,进而判断原料消逝没有,点混淆点X的目的在于，方便察看,因为有时，板睁开后，各点的地点有些变形,或许因为边沿效应等等,使得判断不易.(我喜爱用小板，跑的快,很快见到结果,为了防止小板的边沿，用机器板较好）利用TLC判断物质的纯度时,假如不可以完整确立，能够再联合其余检测手段，如NMR，因为某种样品在这类睁