第1节高效液相色谱特点与仪器

2023/10/8第三章

高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography,HPLC2023/10/8

以液体为流动相的色谱法称为液相色谱。以高效能固体细微粒为固定相，高压溶剂为流动相，配备高灵敏度检测器的液相色谱为高效液相色谱。2023/10/8本章的主要内容第1节高效液相色谱的特点与仪器第2节主要分离类型与基本原理*第3节毛细管电泳色谱*第4节超临界流体色谱2023/10/8本章的基本要求掌握HPLC仪的基本组成了解HPLC法的特点及应用熟悉HPLC法的分类及各自的分离机制了解毛细管电泳色谱法了解超临界流体色谱法2023/10/8第一节

HPLC法的特点与仪器featureandinstrumentofHPLC2023/10/8一、液相色谱仪

highperformanceliquidchromatograph2023/10/8液相色谱仪（2）2023/10/8液相色谱仪（3）2023/10/8液相色谱仪（4）2023/10/8二、高效液相色谱法的特点

特点：高压、高效、高速、高灵敏度测试对象：高沸点的、热不稳定的、高极性的有机物及生物大分子或离子性化合物的高效分离分析方法。1.LC

与GC

的相似之处------固定相

GC中的固定液原则上都可以用于LC，其选用原则与气相色谱一样。featureofHPLC2023/10/82.LC与GC的区别

液相色谱中，一般不通过增加柱温来改善传质。恒温，改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接方法。

液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。GC法

H=A+B/u+CuLC法

H=A+Cu2023/10/8processandmainassembly(一)流程三、流程及主要部件贮液器高压泵梯度洗提装置进样器色谱柱检测器恒温器数据处理器2023/10/82023/10/8(二)主要部件压力：150～350×105

Pa。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性（动画）1.高压输液泵mainassemblyofHPLC2023/10/82.梯度洗脱装置高压梯度(进高压泵后再混合):

利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。低压梯度(混合后进高压泵):

一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2023/10/8梯度洗涤技术仅用弱溶剂仅用强溶剂梯度洗提2023/10/8比较气相色谱中的程序升温

和液相色谱中的梯度洗脱

技术的异同之处

缩短分析时间，提高柱效，改善峰形，使各组分得到良好的分离，避免漏检和误检并提高定量的准确度。

(1)相同点2023/10/8(2)不同点

程序升温

改变的是柱温。当流动相和固定相没有发生变化时，分配比的变化是通过温度变化引起的。适用于各组分沸点相差较大的样品的分离。

梯度洗脱

通过改变流动相组成或配比增强或减弱洗脱能力，需要梯度装置将多种溶剂按一定比例混合后进行梯度洗脱。一般柱温保持恒定。适用于各组分分配比相差较大的样品的分离。2023/10/83.进样装置

流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置。

4.高效分离柱

柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长：5、10、15、25cm等。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2023/10/85.液相色谱检测器(1)紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：灵敏度高；线性范围宽；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；

专属型检测器可用于梯度洗脱2023/10/8(2)光电二极管阵列检测器2023/10/8(3)示差折光检测器

可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。1.通用型检测器

2.灵敏度低、对温度敏感3.不能用于梯度洗脱

differentialrefractiveindexdetector差值与浓度呈正比2023/10/8(4)荧光检测器对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。fluorescencedetector高灵敏度、高选择性2023/10/8应用举例

在蛋白质水解中氨基酸与丹酰氯（1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯）反应产生荧光物质：2023/10/8(5)电化学检测器伏安计、安培计、库仑计和电导仪用于离子色谱安培检测计用于测定能氧化、还原的物质。原理是基于组分通过电极表面时，当两电极间施加大于该组分的氧化（或还原）电位的恒定电压时，组分被电解而产生电流，服从法拉第定律。检测池相当于一个微型电解池。2023/10/8SummaryofThekeyPoint