HIV抗体检测与质量控制

HIV抗体检测与质量控制滋病毒（人类免疫缺陷病毒）艾滋病毒（即人类免疫缺陷病毒）是一种逆转录病毒，它具有极强的迅速变异能力，这一特征不仅使人体的免疫系统难以抵御其侵害，而且给特效治疗药物和预防用疫苗的研制带来困难。艾滋病毒直接侵犯人体的免疫系统，破坏人体的细胞免疫和体液免疫。它主要存在于感染者和病人的体液（如血液、精液、阴道分泌物、乳汁等）及多种器官中，它可通过含HIV的体液交换或器官移植而传播。病毒现状

在世界范围内导致了近1200万人的死亡，超过3000万人受到感染。在感染后会整合入宿主细胞的基因组中，而抗病毒治疗并不能把病毒根除。在2004年底，全球有约四千万被感染并与人类免疫缺陷病毒共同生存的人，流行状况最为严重的仍是撒哈拉以南非洲。1986年7月25日，世界卫生组织（WHO）发布公报，国际病毒分类委员会会议决定，把艾滋病病毒改称为人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）简称HIV。病毒特点

HIV病毒主要攻击人体的辅助T淋巴细胞系统；一旦侵入机体细胞，病毒会和细胞整合在一起终生难以消除；病毒基因变化多样；广泛存在于感染者的血液、精液、阴道分泌物、唾液、尿液、乳汁、脑脊液、有神经症状的脑组织液，其中以血液、精液、阴道分泌物中浓度最高；对外界环境的抵抗力较弱，对乙肝病毒有效的消毒方法对艾滋病病毒消毒也有效；感染者潜伏期长、死亡率高；艾滋病病毒的基因组比已知任何一种病毒基因都复杂。

体外生存

人类免疫缺陷病毒在人体外生存能力极差，不耐高温，抵抗力较低，离开人体不易生存，常温下只可生存数小时至数天。HIV对热敏感。在56℃条件下30分钟即失去活性，但在室温保存7天，仍保持活性。灭活方法

国际卫生组织推荐对艾滋病病毒灭活加热100℃持续20分钟，效果较理想。

病毒形态人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈球形。

致病机制HIV选择性的侵犯带有CD4分子，主要有T淋巴细胞、单核巨噬细胞、树突状细胞等。传播途径

HIV感染者是传染源，曾从血液、精液、唾液、尿液、阴道分泌液、眼泪、乳汁等分离得HIV。性接触传播血液传播

母婴传播

疾病诊断HIV抗体筛查试验ELISA试验化学发光法快速检测补充试验抗体确证试验：免疫印迹试剂（WB）和条带免疫试验（RIBA）核酸试验：核酸定性和核酸定量试验

HIV抗体检测目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。HIV抗体筛查样品

血清/血浆/全血滤纸干血斑口腔黏膜渗出液尿液筛查试剂

国家食品药品监督管理局注册批准有效期内酶联免疫试剂应批批检合格选择敏感性和特异性高的试剂筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果快速检测（RT）及其它检测试验

酶联免疫吸附试验（ELISA）HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体用酶标仪测定结果有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）测定的重复性差1.加样本及试剂量不准2.加样过快，孔间发生污染3.加错样本4.加样本和试剂时，加在孔壁上部非包被区5.温育时间、洗板、显色时间不一致6.酶标仪滤光片问题ELISA试验中可能出现的问题和原因分析问题可能的原因（非试剂盒本身的原因）白板（阳性对照不显色）1.漏加酶结合物2.洗液配制问题，量筒不干净含酶抑制物3.漏加显色剂A或B4.终止液当显色剂使用全部板孔都有显色1.洗板不干净2.加底物的吸头被酶污染3.洗板液受酶污染4.由于仪器或加样头造成的交叉污染ELISA测定中的干扰因素内源性干扰因素外源性干扰因素内源性干扰因素

人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等外源性干扰因素常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等分析ELISA测定中出现的假阳性或假阴性结果时，需综合考虑试剂因素、操作因素和标本因素等。ELISA法结果判断临界值概念:将检测的阳性和（或）阴性对照的OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值判断标准:标本OD值与临界值的比值大于等于1(S/CO≥1)为阳性注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同酶联免疫吸附试验（ELISA）优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存用途：流行病学监测及临床大量标本的检测化学发光或免疫荧光试验采用发光或荧光底物既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物用发光仪或荧光仪测定结果（1）免疫渗滤试验：斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验以硝酸纤维膜为载体HIV抗原点状固定在膜上加待检样品阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点有效试验的质控点必须显色快速检测（RT）及其它检测试验斑点免疫胶体金快速诊断试验（2）免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体HIV抗原线状固定在膜上待检样品（血液、唾液或尿液）沿着固相载体迁移阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带有效试验的质控带必须显色第四代快速试剂（SD）：可区分抗原抗体的检测全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果快速检测（RT）及其它检测试验病人条质控条快速检测（RT）及其它检测试验优点:快速单份标本检测不需额外试剂或设备操作简便缺点:肉眼判断较主观价格较贵结果不易保存（建议拍照保存）HIV筛查试剂的选择检测目的实验设施条件价格其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等试剂-1有反应

无反应

试剂1双份或双孔检测或两种试剂*均有反应

一有反应,一无反应

均无反应补充实验报告HIV抗体阴性

图2使用抗体检测试剂的检测流程*两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂，也可以是两种不同试剂。临床诊断相关的检测策略使用抗体检测试剂的筛查检测流程HIV抗体筛查结果的意义及处理阴性：真阴性未感染HIV病毒假阴性注意窗口期阳性：真阳性感染HIV病毒假阳性非特异性反应操作失误处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。补充试验

是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体或者核酸确定艾滋病病毒感染的检测方法。

补充试验包括抗体确证试验[免疫印迹试验、条带/线性免疫试验，特定条件下的替代检测（三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快速试验），免疫层析和核酸检测试验（核酸定性检测和核酸定量检测试验）HIV抗体确证试验确证试验的试