防治烟草立枯丝核菌的药剂筛选

防治烟草立枯丝核菌的药剂筛选

草坪枯萎是由草坪扎枯杆菌引起的草坪生长期疾病。虽然对生产危害较小，但如果苗族床管理不完善、控制不当，幼苗就会萎缩、变黄，导致死亡。因此,加强苗期管理,及时施药防治,对于培育健壮烟苗、减少苗期及大田生产损失具有重要意义。本试验筛选了对RhizoctoniasolaniKühn具有较好抑制效果的化学药剂,研究药剂间的最佳复配比例,旨在提高杀菌剂对烟草立枯病的防治效果,避免长期单一施用化学药剂而导致病原菌产生抗药性,降低防治成本。1材料和方法1.1细菌的分离采用常规组织分离法对发病烟株的病原菌进行分离、纯化。1.2烟苗的培养从培养3d的病原菌菌落边缘切取1cm×1cm大小的菌丝块贴于4～6叶期烟苗的根茎部,用沾有灭菌水的脱脂棉保湿,置于26℃室内培养,以贴PSA培养基的烟苗为对照,每处理5株烟苗,3次重复。3d后检查发病情况,并对发病植株进行再分离,以明确供试菌株的致病性。1.3菌核观察参考张敬泽等、黄江华等的方法,将病原菌在PSA培养基平板上25℃下暗培养,同时进行菌落形态观察、菌落生长速度测定、菌核产生特点检查、挑取菌丝显微计测、菌核的解剖学检查以及菌丝细胞核数目的染色检查等。鉴定工作按Sneh等和巴尼特H.L等提出的程序和标准进行。1.4防雨和药筛选1.4.1%“瑞毒脱”ec和“蒂鲜胺锰盐”wp10%“世高”EC(中国科学院植保所廊坊农药中试厂);12.5%“瑞毒脱”EC(山东省联合农药工业有限公司);50%“咪鲜胺锰盐”WP(上海迪拜农药有限公司);20%“三唑酮”WP(英国LK作物科学有限公司)。1.4.2药剂毒力测定将各供试药剂用灭菌水充分溶解,配制成有效浓度为10mg/mL的母液,并用细菌过滤器过滤除菌,置于4℃冰箱保存备用。药剂毒力测定参考蒋家珍等的方法。通过菌丝生长抑制概率值和药剂浓度对数值之间的线性回归分析,求出各药剂对病原菌的有效抑制中浓度(EC50值)。1.4.3复配剂的增效作用根据单剂室内毒力测定的结果,按“比例混合法”,将10%“世高”EC与12.5%“瑞毒脱”EC按有效浓度5∶0,4∶1,3∶2,2∶3,1∶4,0∶5比例混合,配成复配剂。药效测定参照1.4.2节的方法,求得各复配剂的EC50,并按照孙云沛等的方法求得各混剂的共毒系数(CTC),根据共毒系数的大小,评价复配剂的增效作用。CTC≥120表明具有增效作用;80﹤CTC﹤120为相加作用;CTC≤80为拮抗作用;并考虑药剂成本确定最佳配比。1.5盆栽防治试验1.5.1菌土的制备菌土制备参考李艳琼等的方法。1.5.2复配剂ec2005A.10%“世高”EC1500倍;B.12.5%“瑞毒脱”EC2000倍;C.12%复配剂EC1500倍;D.12%复配剂EC2000倍。1.5.3烟苗的接种与培养将3～4叶期健康烟苗移栽于装有灭菌土的花盆(20cm×20cm)中,每盆10株,缓苗备用。接种时,在每株烟苗的根部周围盖上约7g菌土,同时浇灌各供试药剂,每盆200mL,以浇灌等量清水为对照。每处理10株烟苗,3次重复。接种6d后观察、记载其发病情况,病害分级参考Lipps等的标准。2结果与分析2.1多核丝核菌组的形态特征观察发现,病原菌菌落初期为白色,绝大部分菌丝匍匐生长,气生菌丝很少。菌落生长速度较快,在25℃下培养1d菌落平均直径为4.2cm,培养2d菌落平均直径为8.4cm。菌丝蛛网状,有横隔,见图1(A),初期无色,培养3d后菌丝呈浅色至黄褐色,顶端菌丝直径4.6～8.5(6.3)μm,主干匍匐菌丝直径5.7～9.2(8)μm,分枝呈钝角或几乎成直角,分枝与主干处有缢缩,附近形成隔膜。培养5d后,在菌落表面形成白色气生菌丝团,7d后生成浅褐色至黑褐色的小菌核,菌核无一定形状,一般扁平,常彼此相连,松散分布在菌丝体中,见图1(B)。菌核由疏丝组织连结而成,外层和内层细胞均是褐色或黑褐色,即内、外细胞的形态、大小和色泽无明显差异,见图1(C)。经番红O-KOH染色后,菌丝细胞核呈现深红色,背景为模糊的橙红色。菌丝顶端细胞内有4～9(6)个细胞核,见图1(D),确定该菌属多核丝核菌组。根据菌落形态、顶端菌丝和主干菌丝形态与大小、菌丝顶端细胞核数目、菌核内外层细胞大小和颜色等特征,与Sneh等和巴尼特HL等在丝核菌属分类专著中描述比较,可确定病原菌为立枯丝核菌。2.2细胞菌群和小菌核接种后2d,可见接种部位出现水渍状圆形斑点,随后变为褐色斑点,随着病害的发展,斑点迅速扩大成褐色椭圆形凹陷病斑,边缘明显,继续扩大环绕茎一周并向上扩展,在病部上可见白色气生菌丝团,随后变成深灰色粒状的小菌核;病苗下部叶片首先黄化萎蔫,病部干枯缢缩,最终烟苗死亡,但不倒伏,症状见图2(A),与田间自然发病症状相同,见图2(B)。2.3有效杂草剂的选择2.3.1烟草立枯丝核菌抑制效果各单剂毒力回归方程、EC50和相关系数测定结果见表1。10%“世高”EC的EC50为0.56μg/mL,是供试药剂中EC50较小的,说明其对烟草立枯丝核菌抑制效果最好;12.5%“瑞毒脱”EC的EC50为0.8μg/mL,其抑制效果次之;20%“三唑酮”WP和50%“咪鲜胺锰盐”WP的EC50分别为59.9μg/mL和656.8μg/mL,说明这两种药剂抑菌效果较差。由此可见,10%“世高”EC和12.5%“瑞毒脱”EC对烟草立枯病菌具有较好的抑制效果,可作为复配的药剂。2.3.2复配剂的抑菌效果测定综合考虑各供试药剂的EC50及其作用方式,选择10%“世高”EC和12.5%“瑞毒脱”EC进行复配,并测定复配剂的抑菌效果,见表2。表2结果表明,“瑞毒脱”与“世高”按不同比例复配后,除2∶3混配剂为拮抗作用外,其它混配剂均具有显著的增效作用,表现为CTC2∶3<CTC1∶4<CTC3∶2<CTC4∶1,其中,4∶1复配剂的CTC最大,确定“瑞毒脱”∶“世高”(4∶1)为最佳配比。2.3.3复配剂的防效盆栽防治试验结果见表3。表3表明,供试的4种药剂对烟草立枯病均具有一定的防效。施药后6d,12%复配剂EC1500倍药液对烟草立枯病的相对防效为96%,防效最为显著;“世高”1500倍液次之,相对防效为94.3%;其次是12%复配剂EC2000倍药液,相对防效为90.3%;“瑞毒脱”2000倍液的防治效果较差,为55.6%。经Duncar新复极差法检验,12%复配剂EC1500倍与“世高”1500倍药剂处理间差异不显著,防治效果较好。若生产上烟草种植密度为18000株/hm2,发病期每株烟灌药500mL,则用“世高”1500倍的防治成本为1800元/hm2,而用12%复配剂1500倍的防治成本为840元/hm2。可见,施用复配剂成本比单独施用防效相当的“世高”药剂节省1/2以上。因此,综合防治效果和药剂成本,确定12%复配剂EC1500倍药剂为最佳防治药剂。3烟草病的防治药剂研究烟草立枯病是一种低温型病害,我国各烟区的育苗时节大多逢12月～3月的低温气候,有利于该病害的发生。目前生产上普遍采用漂浮育苗,在育苗过程中未采集到烟草立枯病害标本,病原菌是从移栽大田后的烟草病株上分离得到,因此,本试验是针对移栽大田后的病株进行防治药剂的筛选,有关漂浮育苗下的防病试验有待进一步研究。“世高”和“瑞毒脱”对RhizoctoniasolaniKühn具