二氢杨梅素的分离、鉴定及药理作用

二氢杨梅素的分离、鉴定及药理作用

二羟基杨树林素为3、5、7、3、4、5、6羟基二、3-二羟基黄酮醇（酰胺；my），又名双羟杨梅素和蛇葡萄素，是黄酮类化合物。该化合物首次由Kotake和Kubota于1940年从葡萄科植物蛇葡萄属植物福建茶即楝叶玉葡萄A.Meliaefolia的叶中分离得到,命名为蛇葡萄素。据报导,二氢杨梅素具有消炎、止咳、祛痰、镇痛、抑菌、抗高血压、消脂以及解乙醇中毒等药理作用。目前国内外对二氢杨梅素已有广泛的研究,本文就近年来国内外对二氢杨梅素的研究做一综述。1藤茶及藤茶种类二氢杨梅素来源广泛,存在于葡萄科、杨梅科、杜鹃科、藤黄科、大戟科及柳科等植物中。资料显示二氢杨梅素大量存在于葡萄科蛇葡萄属植物中,如藤茶即显齿蛇葡萄(A.grossedentata)、粤蛇葡萄(A.cantoniesis)、羽叶蛇葡萄(A.chaffanjonii)、蛇葡萄(A.sinica)、东北蛇葡萄(A.brevipedunculata)、光叶蛇葡萄(A.sinciavar.hancei)等,其中藤茶尤为特别。广泛分布于我国的广东、广西、云南、湖南、湖北、江西等省区的显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中,发现其春夏幼嫩茎叶中二氢杨梅素的含量达到样品干重的20%以上,幼叶中的心叶可达40%以上。2乙酯溶液二氢杨梅素为白色针状结晶,mp:245~246℃,易溶于热水、热乙醇,溶于甲醇、乙醇,微溶于水、乙酸乙酯,难溶于氯仿、石油醚。林淑英等的研究表明:二氢杨梅素在水相中随时间和温度的增加会变得不稳定,发生氧化且不可逆,pH值是影响二氢杨梅素稳定性的重要因素,酸性和中性条件(pH<7.0)为二氢杨梅素应用和保存的适宜pH值条件,金属离子Al3+、Fe3+、Cu2+等对二氢杨梅素的稳定性有很大的影响。3为溶剂、成分配的二氢杨素覃洁萍等研究广西藤茶中的黄酮类成分,从中分离出二氢杨梅素,含量为19.6%。郑成等[7~8]用微波萃取法研究藤茶中的二氢杨梅素的提取工艺,二氢杨梅素的提取率为25.11%;用乙醇辅助法提取藤茶中的二氢杨梅素,以水为溶剂,考察了乙醇预处理时间、茶叶与乙醇的料液比、加热时间等因素对提取率的影响,通过单因素分析和正交设计确定了最佳提取工艺条件,最佳提取工艺条件为:乙醇预处理时间15h,茶与乙醇的料液痹为1:8,加热时间为30min,在此条件下二氢杨梅素的提取率34.23%。杨铃等用微波萃取法从藤茶中提取二氢杨梅素,正交设计法以水为溶剂,考察了提取温度、微波辐射时间及料液比3个因素,每个因素3水平,选择L9(33)正交设计表。结果表明:在提取温度为95℃、微波辐射时间为15min、料液比为1:20时二氢杨梅素的提取率最高。何桂霞等用石油醚回流脱去藤茶中的脂溶性色素,脱脂后的药材用95%乙醇回流提取两次,得乙醇提取液,减压回收乙醇至无味,加适量水加热溶解,趁热过滤,滤液放冷后析出大量黄色沉淀,将沉淀物用水反复重结晶得白色针状晶体,经鉴定为二氢杨梅素。李卫等以水为提取溶剂用逆流法(图1)提取二氢杨梅素并分别研究了影响二氢杨梅素提取收率的几个因素。研究表明,温度越高越有利于二氢杨梅素的提取,用沸水提取收率最大,料液比为1:10时最有利于二氢杨梅素的自然沉淀。提取时间在60min以前,二氢杨梅素的收率随提取时间的延长而增加,而在60min以后,二氢杨梅素的收率随提取时间的延长而减少。用偏碱性的水进行提取比用中性水和酸性水要好。周天达等研究藤茶中双氢黄酮醇,分离出一个白色晶体,元素分析得分子式为C15H12O8[实验值(%):C56.22,H3.78,计算值(%):C56.25,H3.75]。MSm/e:320(M+),292(M+,CO),291(M+,-CHO)。HCL-Mg反应呈紫红色,UVnm(logE):291(4.18)。IR:3350(-OH),1650(宽峰,-CO-)。13CMR(20MHz,DMSO-d6):166.8,163.3,162.5,145.7,145.5,133.4,133.3,127.1,107.4,107.2,106.9,106.6,100.4,95.9,94.9,83.2,71.6。HNMR和D20交换波谱数据提示,该化合物具有6个氧氢(羟基)质子和6个碳氢质子。经波谱分析,该化合物为3,5,7,3′,4′,5′-六羟基2,3-二氢黄酮醇,即二氢杨梅素。4藤茶中总黄酮类成分的检测覃洁萍等以双氢杨梅树皮素为指标,采用差视分光光度法测定广西瑶族腾茶中黄酮类成分的含量,利用藤茶样品溶液中的黄酮类成分与ZrOCl2络合,所测得的络合前后的吸光度差值与黄酮类成分在一定浓度范围内存线性,该方法操作简单、重现性好,可作为该药材的质量控制方法。何桂霞等[13~15]采用分光光度法对藤茶中总黄酮类成分进行了含量测定,平均收率为99.15%,CV=3.22%,结果表明该方法简单、可靠、准确,可作为该药材及其制剂的质量控制标准。采用薄层扫描法测定腾茶中二氢杨梅素的含量,结果二氢杨梅素含量为38.17%~38.54%,回收率为98.5%,RSD为1.6%。用HPLC法对不同产地不同采收期藤茶叶、茎中的二氢杨梅素进行含量测定,采用NovapakC18柱(150mm×4.6mm,5μm),甲醇-水-磷酸(27:73:0.1)为流动相,流速1.0mL.min-1,紫外检测波长为290nm,柱温25℃,结果本法线性关系良好,平均加样回收率为99.47%,RSD为1.68%;5月份藤茶中二氢杨梅素含量最高27.8%~31.2%,叶中含量高于茎中3~4倍。5药理作用5.1药氯化铵对照酚红排泌量钟正贤报导,在给小鼠做了一系列的实验,结果表明二氢杨梅素大小剂量组(1.0g.Kg-1,0.5g.Kg-1)和阳性对照药氯化铵(1.0g.Kg-1)的酚红排泌量,与对照组比较均有明显升高,证实二氢杨梅素有明显祛痰作用;同时,二氢杨梅素能明显延长咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数,其中大剂量组(1.0g.Kg-1)的止咳作用强度与对照组咳必清相当。5.2mic的测定二氢杨梅素对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、大肠埃希军菌、产气杆菌、啤酒酵母、黏红酵母、青霉、黑曲霉、毛霉及根霉均有抑菌作用,尤其对格兰阳性、格兰阴性球菌或杆菌作用明显。二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌,沙门菌,大肠埃希军菌,产气杆菌的最低抑菌浓度(MIC)均为0.625mg.ml-1,最低杀菌浓度(MBC)分别为0.625、0.625、1.25、1.25mg.ml-1;对枯草芽孢杆菌无杀菌作用。二氢杨梅素(含量90%)对牛奶酸败混合菌群和真菌具有明显的抑制作用,并随着年度增加而抑菌作用增强。在pH7.0时,纯度为99.5%的二氢杨梅素对金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌和铜绿假单胞菌标准株的MIC分别为0.23,1.80,0.90mg.ml-1,MBC分别为0.45,1.80,1.80mg.ml-1;对金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌和白假丝酵母菌临床分离株的MIC分别为0.06,1.80,0.90mg.ml-1,MBC分别为0.11,1.80,1.80mg.ml-1。从显齿蛇葡萄中分离繁荣DMY对金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌标准株,乙型溶血性链球菌临床分离株,肺炎链球菌,流感嗜血杆菌有抑菌作用,MIC均为0.63mg.ml-1。从龙江柳中得到的DMY对多主枝孢霉有抑制作用。5.3小鼠热反应过程中的痛阀水平林建峰等证实二氢杨梅素对小鼠巴豆油性耳廓水肿,大鼠角叉菜胶性、甲醛性足环肿胀及腹腔毛细血管通透性、急性、亚急性炎症的渗出过程均有抑制作用;对小鼠酸性扭体反应和热水反应显示有一定的镇痛作用,能提高小鼠的痛阀水平。周雪仙等报导采用伤寒、副伤寒(甲、乙)三联菌苗制热家兔的解热实验表明,藤茶乙醇提取液(主要含二氢杨梅素)腹腔注射能明显降低致热后家兔的体温。5.5对葡萄糖负荷小鼠血糖的影响覃洁萍等报导,二氢杨梅素(含量为98.4%)0.25g.kg-1灌胃7d能明显抑制四氧嘧啶诱导的小鼠血糖升高;0.125和0.25g.kg-1灌胃均明显抑制肾上腺素诱导的小鼠血糖升高;给药后1h对葡萄糖负荷小鼠的血糖有明显降低作用,但对正常小鼠血糖无明显影响。钟正贤等报导,二氢杨梅素0.125和0.25g.kg-1灌胃给药30d对链霉素诱导的大鼠血糖升高有抑制作用,同时升高血清胰岛素水平,胰腺组织中淋巴细胞浸润明显减少,炎症反应明显减轻,胰岛素目明显增加。5.6dmy对肝毒性指标的影响郑作文等报导,二氢杨梅素0.1、0.3、0.6g.kg-1灌胃7~8d,对四氯化碳和D-半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清ALT和AST均有明显的降低作用,并随着DMY剂量的增加而增。钟正贤等报导,0.05、0.10g.kg-1灌胃7d能明显降低四氯化碳急性肝损伤小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ATL)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,明显降低D-半乳糖胺急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性和总胆红素(T-BIL)含量;明显降低异硫氰酸萘酯急性肝损伤小鼠血清ALT活性和T-BIL含量。5.7氢杨树素对小鼠b6瘤细胞的黏附作用二氢杨梅素浓度为20、40、80μmol.L-1时,能抑制体外培养的小鼠B16黑色素瘤细胞对重组细胞基底膜的侵袭,侵袭抑制率分别为36.1%、59.6%、79.1%;同时抑制B16瘤细胞的运动能力,运动能力抑制率分别为51.6%、56.5%、66.8%;降低B16瘤细胞对层黏连蛋白、纤维黏连蛋白和重组细胞基底膜的黏附,降低瘤细胞黏附的效应与二氢杨梅素浓度呈正相关。二氢杨梅素100,200,250mg.kg-1给每只尾静脉注射2×105个B16瘤细胞的小鼠灌胃18d能明显抑制小鼠B16瘤细胞肺转移灶,抑制率分别为31.0%、40.6%、61.2%。刘德育等报导,二氢杨梅素浓度为0.8~500μmol.L-1时对外培养的小鼠B16黑色素瘤细胞的抑制达27.8%~78.9%。周宁宁等报导,二氢杨梅素对HL-60、K562白血病细胞株和Bel-7402肝癌细胞株有明显的抑制作用随DMY浓度增加而增强,IC50分别为12.4、18.4、18.6μg.mL-1。5.8刘建新在植物水混凝土中最佳配方的确定刘建新等用显齿蛇葡萄植物水煎剂进行了解酒实验,结果显示随其水煎剂浓度的加大,跌倒反应百分率和步态不稳百分率下降,证实其具缓解酒醉反应,促进醒酒的作用,尽管刘建新用的不是二氢杨梅素单体,但显齿蛇葡萄植物水煎剂的主要成分为二氢杨梅素,从中也可发现二氢杨梅素能减轻乙醇中毒的作用。6氢杨树叶片的制备二氢杨梅素在天然植物中广泛存在,尤其在蛇葡萄属植物中含量很高,关于二氢杨梅素来源、提取分离、结构鉴定、含量测定及药理作用已有广泛的研究,为二氢杨梅素的开发利用提供了理论依据。已有的